Cloning vectors - Assiut University
5 The replication origin (ORI) is a specific DNA sequence of 50 – 100 base pairs that must be present in a plasmid for its replication Host-cell enzymes bind to ORI, initiating replication of the circular plasmid
Cloning vectors - Assiut University
The replication origin (ORI) The replication origin (ORI) is a specific DNA sequence of 50 – 100 base pairs that must be present in a plasmid for it to replicate
TOPO Cloning Technology
4 TOPO cloning TOPO cloning vector 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 0 A OR PCR product PCR product A PCR product CACC Perform PCR with Taq or a proofreading polymerase 1 Add 1 µL of PCR reaction to 1 µL
Gateway cloning technology - Thermo Fisher Scientific
Invitrogen™ Gateway™ cloning technology has been cited by life science researchers more than 2,000 times It’s no wonder Gateway cloning has been the go-to choice for years, by researchers with varying experience—from
TD : clonage/ADN recombinant
• Clonage directionnel possible si 2 enzymes différentes • Possibilité d’utiliser des enzymes à extrémités compatibles • Addition de bouts collants • Ajout de nucléotides en 3’ par la terminal transférase • Liaison de bouts francs • Digestion par la nucléase S1 • Utilisation de l’ADN ligase de T4 Les stratégies de
Méthodologie et termes techniques
molécule d'ADN « porteuse » appelée vecteur permettant son amplification Cette technique de biologie moléculaire peut-être utilisée pour un clonage partiel, ne portant que sur un fragment de matériel génétique (ADN), mais aussi pour le clonage d'un gène entier permettant la production de la protéine recombinante correspondante
COURS 6: HOTES DE CLONAGE - USTO-MB
HOTES DE CLONAGE • Pour se répliquer, un vecteur doit être incorporé dans une cellule hôte spécifique de chaque type de vecteur Exemple : si le vecteur est un plasmide, la cellule hôte est une bactérie La cellule hôte ne doit pas modifier ou détruire l’ADN recombiné
L’isolement et la manipulation de gènes
La technologie de l’ADN recombinant chez les eucaryotes Les techniques de manipulation, clonage et expression des gènes ont d’abord été développées chez les bactéries, mais elles sont désormais utilisées en routine chez de nombreux modèles eucaryotes Le baculovirus des insectes est un vecteur largement employé pour les protéines
Produire une protéine recombinante Principes et Méthodes de
Clonage de grands fragments Recherche d’un gène à partir d’une banque d’ADN 1 -Fragmentation du grand fragment par enzyme de restriction 2 -Insertion des fragments résultants dansun vecteur de clonage 3 -Transformation d’E coli 4 -Identification du clone possédant le gène d’intérêt (ex :détection de l’activité enzymatique)
B/ La diversité des techniques de lADN recombinant
Vecteur cosmide (~5kb) avec une origine de réplication, un gène de sélection, un site de clonage Le cosmide est un plasmide dans lequel les séquences cos du bactériophage Lambda ont été insérées Ces séquences sont nécessaires pour l'encapsidation de l'ADN du phage Séquences Cos Site Cos Fragments d'ADN à + cloner Vecteur cosmide
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