NOTIONS FONDAMENTALES DE CHROMATOGRAPHIE
Classement des méthodes de chromatographie sur colonne 1 La chromatographie en phase liquide, CPL: la phase mobile est un liquide 2 La chromatographie en phase gaz, CPG: la phase mobile est un gaz 3 La chromatographie en fluide supercritique, CFS: P M = fluide supercritique
TECHNIQUES: Principes de la chromatographie
Chromatographie d’adsorption: principe La chromatographie d’adsorption est basée sur le partage des solutés entre l’adsorbant solide fixe et la phase mobile Chacun des solutés est soumis à une force de rétention par adsorption et une force d’entraînement par la phase mobile L’équilibre qui en résulte aboutit à
Les méthodes séparatives: la chromatographie
au développement de la chromatographie moderne Chromatographie = procédé physico-chimique de séparation d’un mélange homogène liquide ou gazeux Chromatographie moderne = méthode séparative rapide et performante couplée à des détecteurs sensibles et variés - chromatographie préparative - chromatographie analytique:
Chromatographie sur colonne - The Zysman-Colman Group
Chromatographie sur colonne Deux types de chromatographie existent: • Chromatographie par gravité: elle utilise des particules de silice de 70 à 200 m et le solvant s’écoule au goutte-à-goutte Cette technique est désuette car elle demande une plus grande quantité de silice et de solvant
LA CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION STÉRIQUE POUR L’ANALYSE DE
LE GUIDE POUR UNE CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION STÉRIQUE RÉUSSIE La séparation chromatographique de biomolécules basée sur leur taille en solution est connue sous le nom de chromatographie d’exclusion stérique (SEC) Contrairement à d’autres modes de chromatographie, elle repose sur l’absence de toute interaction
Linéarité courbe détalonnage - Phenomenex
La chromatographie est couramment utilisée à des fins quantitatives pour déterminer la concentration des composés cibles dans un échantillon Afin que cela soit possible, il est nécessaire de préparer une courbe d'étalonnage : représentation graphique de la relation entre le facteur de réponse (axe Y)
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6 Chromatographie sur couche mince Une chromatographie sur couche mince (CCM) permet de séparer et d’identifier les différentes espéces chimiques présentes dans un mé-lange homogène Un éluant monte par capillarité le long d’une plaque recouverte de si-lice et entraîne avec lui des espéces chimiques préalablement déposées
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Cours complet rédigé • Page 3 FIGURE 2 Chromatographie sur papier ou gel de silice D’après BREUIL (2007) 5 Chromatographie d’exclusion FIGURE 3 Chromatographie sur colonne échangeuse d’ions D’après BREUIL (2007) FIGURE 4 Chromatographie d’affinité D’après BREUIL (2007) FIGURE D’après BREUIL (2007)
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Chromatographie sur colonne
Cette chromatographie est basée sur le même principe que la CCM, sauf que la silice est placée dans une colonne et non sur une plaque.Le but est toutefois différent:
La chromatographie sur colonne sert à séparer des produits, soit à purifier un produit de réaction.C'est la méthode standard de purification dans un laboratoire de chimie organique. C'est une méthode préparative, elle permet de purifier 50 mg à environ en laboratoire, et jusqu'à 1 kg en industrie. 2Chromatographie sur colonne
Deux types de chromatographie existent:
•Chromatographie par gravité: elle utilise des particules de silice de70 à 200 m et le solvant s'écoule au goutte-à-goutte. Cette technique
est désuette car elle demande une plus grande quantité de silice et de solvant. •Chromatographie éclair ("flash"): elle utilise des particules de silice de 35 à 70 m et le solvant s'écoule sous pression d'air comprimé. Première référence à la chromatographie éclair: Still, C.W.; Kahn, M.; Mitra, A. J. Org. Chem., 1978, 43, 2923-2925: Rapid chromatographic technique for preparative separations with moderate resolution. 2 3Préparation de la chromatographie éclair
Plusieurs choix sont à faire en fonction de la quantité de produit et de l'aspect de la CCM: •Diamètre de la colonne •Hauteur de silice •Choix de l'éluant 4Choix de l'éluant
Il faut faire des essais sur CCM avec différents éluants pour avoir une bonne séparation entre les produits, tout en recherchant un R f ~ 0.3 pour le produit le moins polaire. La polarité de l'éluant peut rester la même tout au long de la chromatographie (élution isocratique) ou aller en augmentant (gradient de solvant).Mauvaise séparation
même si ça paraît facile car l'éluant est trop polaireOk, mais il faudra
augmenter la polarité de l'éluant pour faire sortir le produit le plus polaire. 3 5Que se passe-t-il?
Le composé rouge est moins polaire
donc moins retenu.Ⱥ Sort en premier !
Le composé vert est plus polaire
donc plus retenu.Ⱥ Sort en deuxième !
On n'a qu'à changer régulièrement
le " récipient » (éprouvettes deformat variable)Soit deux produits de polarité différentes (rouge et vert) qui migrent à travers
une colonne de silice: 6