Chromatographie sur colonne - The Zysman-Colman Group
Chromatographie sur colonne Deux types de chromatographie existent: • Chromatographie par gravité: elle utilise des particules de silice de 70 à 200 m et le solvant s’écoule au goutte-à-goutte Cette technique est désuette car elle demande une plus grande quantité de silice et de solvant
Les méthodes séparatives: la chromatographie
Chromatographie moderne = méthode séparative rapide et performante couplée à des détecteurs sensibles et variés - chromatographie préparative - chromatographie analytique: Phase stationnaire = phase qui reste en place, soit dans une colonne, soit sur une surface plane
CHROMATOGRAPHIE GENERALITES
3 Théorie de base de la chromatographie Fig 5 3 1 Théorie des plateaux Ø On assimile la colonne chromato à une colonne à distiller de longueur L Ø Cette colonne est constituée de qlq plateaux fictifs appelés plateaux théoriques Ø Une colonne est constituée de N plateaux théoriques (de même hauteur)
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chromatographie sur colonne), à travers laquelle la phase mobile progresse Les molécules progressent à travers la phase stationnaire à des vitesses différentes selon leur chimie Quelques types courants de chromatographie Dans la chromatographie par filtration sur gel, couramment appelée la chromatographie
Chromatographie La chromatographie regroupe un ensemble de
Chromatographie sur colonne pour couche mince : Gel de cilice dia tonnés cilite ou cilice pour amidon L ˇinconvénient de ces supports est leurs absorptions importantes Chromatographie sur papier : Cellulose fixe la phase aqueuse : ou butane (acide acétique) La phase fixe moins polaire que l ˇeau : Acide acétique ou méthanol glycérol
Principe généraux de la chromatographie
• la chromatographie sur colonne : la phase stationnaire est contenue dans une colonne cylindrique en verre ou en métal comme souvent en CPG • la chromatographie sur papier : une surface de cellulose considérée comme support maintient par imbibition une phase stationnaire liquide
LA CHROMATOGRAPHIE D’EXCLUSION STÉRIQUE POUR L’ANALYSE DE
connue sous le nom de chromatographie d’exclusion stérique (SEC) Contrairement à d’autres modes de chromatographie, elle repose sur l’absence de toute interaction entre l’analyte et la phase stationnaire de la colonne C’est une solution idéale pour la séparation et l’analyse de protéines intactes de contaminants pouvant inclure
TECHNIQUES: Principes de la chromatographie
Chromatographie d’adsorption: principe La chromatographie d’adsorption est basée sur le partage des solutés entre l’adsorbant solide fixe et la phase mobile Chacun des solutés est soumis à une force de rétention par adsorption et une force d’entraînement par la phase mobile L’équilibre qui en résulte aboutit à
Les Bonnes Pratiques en HPLC t UPLCHPLC et UPLC
– Connexion directe sur la colonne pour minimiser les volumes morts o Choix entre deux formats de ferrrule d’entrée de colonne – Haute performance du packing pour maintenir la séparation – Disponible sur toutes les granulométries (2 5µm à 5µm)Disponible sur toutes les granulométries (2 5µm à 5µm) ©2015 Waters Corporation 21
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Chromatographie sur colonne
Cette chromatographie est basée sur le même principe que la CCM, sauf que la silice est placée dans une colonne et non sur une plaque.Le but est toutefois différent:
La chromatographie sur colonne sert à séparer des produits, soit à purifier un produit de réaction.C'est la méthode standard de purification dans un laboratoire de chimie organique. C'est une méthode préparative, elle permet de purifier 50 mg à environ en laboratoire, et jusqu'à 1 kg en industrie. 2Chromatographie sur colonne
Deux types de chromatographie existent:
•Chromatographie par gravité: elle utilise des particules de silice de70 à 200 m et le solvant s'écoule au goutte-à-goutte. Cette technique
est désuette car elle demande une plus grande quantité de silice et de solvant. •Chromatographie éclair ("flash"): elle utilise des particules de silice de 35 à 70 m et le solvant s'écoule sous pression d'air comprimé. Première référence à la chromatographie éclair: Still, C.W.; Kahn, M.; Mitra, A. J. Org. Chem., 1978, 43, 2923-2925: Rapid chromatographic technique for preparative separations with moderate resolution. 2 3Préparation de la chromatographie éclair
Plusieurs choix sont à faire en fonction de la quantité de produit et de l'aspect de la CCM: •Diamètre de la colonne •Hauteur de silice •Choix de l'éluant 4Choix de l'éluant
Il faut faire des essais sur CCM avec différents éluants pour avoir une bonne séparation entre les produits, tout en recherchant un R f ~ 0.3 pour le produit le moins polaire. La polarité de l'éluant peut rester la même tout au long de la chromatographie (élution isocratique) ou aller en augmentant (gradient de solvant).Mauvaise séparation
même si ça paraît facile car l'éluant est trop polaireOk, mais il faudra
augmenter la polarité de l'éluant pour faire sortir le produit le plus polaire. 3 5Que se passe-t-il?
Le composé rouge est moins polaire
donc moins retenu.Ⱥ Sort en premier !
Le composé vert est plus polaire
donc plus retenu.Ⱥ Sort en deuxième !
On n'a qu'à changer régulièrement
le " récipient » (éprouvettes deformat variable)Soit deux produits de polarité différentes (rouge et vert) qui migrent à travers
une colonne de silice: 6