CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC)
La chromatographie est une méthode de séparation des constituants d'un mélange même très complexe Il existe trois principaux types de chromatographie: • la chromatographie en phase gazeuse (CPG) • la chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC) • la chromatographie en couche mince (CCM)
La Chromatographie en Phase Liquide CPL
une forte pression sur la phase mobile La CLHP, Chromatographie Liquide à Haute Performance a donc été longtemps appelée Chromatographie Liquide sous Haute Pression Depuis 2004, l'UPLC, Ultra Performance Liquid Chromatography, avec PS
CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC)
La chromatographie en phase liquide a permis de réaliser des analyses qui n'étaient auparavant pas possible avec les techniques sur couche mince ou en phase gazeuse A l'origine la chromatographie en phase liquide se faisait sur des colonnes en verre Le liquide traversait la phase stationnaire par gravité ou sous faible pression Puis pour
Chromatographie Liquide à Haute Performance HPLC
La chromatographie liquide à haute performance, souvent appelée du nom de son abréviation CLHP – HPLC en langue anglaise – constitue une technique analytique très générale d’emploi
Applications médicales - Biologie Sans Frontières
Chromatographie en phase liquide haute pression Anglais LHHHHH HPLC High Performance (or High Pressure) Liquid Chromatography Applications médicales Utilisation principale L’HPLC (nous emploierons l’acronyme anglo-saxon, le seul utilisé) a de multiples applications dans de nombreux
Les méthodes séparatives: la chromatographie
- chromatographie analytique: Phase stationnaire = phase qui reste en place, soit dans une colonne, soit sur une surface plane Phase mobile = phase qui se déplace sur ou à travers la phase stationnaire, entraînant l’analyte avec elle Elution = processus au cours duquel les analytes sont entraînés à travers une phase stationnaire par le
HPLC Principe et appareillage - ac-rouenfr
A l'origine la chromatographie en phase liquide se faisait sur des colonnes en verre Le liquide traversait la phase stationnaire par gravité ou sous faible pression Puis pour augmenter le débit, des manipulations ont été réalisées sous pression plus forte C'est ce que l'on a appelér la chromatographie liquide sous haute pression (HPLC
TECHNIQUES: Principes de la chromatographie
Phase mobile Nom Gaz Chromatographie en phase vapeur (CPV) ou en phase gazeuse (GC) Liquide Chromatographie couche mince (CCM ou TLC) ou éclair Liquide Chromatographie liquide à haute performance (CLHP ou HPLC) 6 Utilité de la chromatographie Selon la quantité de produit appliqué en ch romatographie, on s’en sert pour:
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HPLCAutres désignations
Chromatographie en phase liquide haute
pressionAnglais
LHHHHH
HPLCHigh Performance (or High Pressure) Liquid
Chromatography
Applications médicales
Utilisation principale
onyme anglo-saxon, le seul utilisé) a de multiples applications dans de nombreux domaines, seule son utilisation en biologie nous intéressera, elle permet : - en biochimie, .- en hématologie, la reconnaissance et quantification des hémoglobines anormales, et le diagnostic de la
drépanocytose, des alpha et béta thalassémies de type hétérozygote ou monozygote. - en toxicologie, la mise en évidence et le dosage des substances - en pharmacologie, le dosage de nombreux médicaments pour un suivi efficace du traitement. - en hydrologie, dans le domaine de la potabilité des eaux dest dosage des principaux anions : (biochimie, hématologie, toxicologie,).Principe de fonctionnement
colonne. Les constituants du mélange, étant inégalement retenus par la phase fixe de la colonne, se déplacent à des
vitesses différentes. Ils sont élués, en sortie de colonne, les uns après les autres et donc séparés. Un détecteur couplé
délivrant la phase mobile sous des pressions de 20 à 150 bars), silice de différentes granulométries, un détecteur (UV-visible, réfractométrie, fluorimétrie, ou spectromVersion 09/2013 Page 2 sur 4
Pour plus de clarté, voir le schéma ci-dessous.Options et versions disponibles sur le marché
Selon les applications , les versions disponibles sur le marché sonttrès nombreuses, avec des choix de modules variés tels les pompes dont la pression délivrée varie de 20 à 150 bars,
les injecteurs manuels ou automatiques (la majorité), les fours à température variable, les détecteurs
dizaine de types). Il faut ajouter un outil informatique avec son logiciel.000 Euros à plus de 200 000 Euros.
Cependant on trouve sur le marché de 000
Euros.
Structures adaptées
Ces appareils sophistiqués et onéreux doivent être réservés à des structures importantes : hôpitaux, CHU,
grosses cliniques.Consommables et accessoires à prévoir
Désignation Fourchette de prix
Les solvants utilisés soit seuls soit en mélanges sont très différents selon la technique et nous citerons quelques exemples parmi un choix très vaste :Les colonnes de chromatographie ont une
Méthanol : 25 Euros/l
Ethanol : 55 Euros/l
Cyclohexane : 50 Euros/l
DMSO : 100 Euros/l
Acétonitrile : 75 Euros/L
Colonnes de silice de 400 à 600 Euros/pièce
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durée de vie limitée. Elles peuvent être alors vidées, nettoyées et rechargés avec le support ad hoc prévoir, telles des connecteurs divers, desEntretien
des résultats. impérativement les préconisations du constructeur.Maintenance
Niveau de formation requis
jours. Encore faut-il avoirde bonnes bases pour en profiter. Dans le cas contraire, il existe des formations approfondies, sur une dizaine de
interprétation des chromatogrammes.Maintenance
Il faut suivre à la lettre le cahier de maintenance donné par le fournisseur, avec la maintenance journalière,
hebdomadaire, mensuelle, avec visite du fournisseur au moins annuellement. Il faut de plus savoir changer les
Utilisation
Niveau de formation requis
Le personnel utilisateur (biologiste, ingénieur, technicien de laboratoire) doit avoir suivi une forma
habilitée. cteur. Port de gants obligatoire pour la protection du personnel. Pièce climatisée, courant stabilisé et ondulé 220 V (ou 110) 50 Hertz.Acheminement
Volume 3 à plusieurs m3
Poids entaine.
Précautions particulières Mise en caisse, de préférence par le fournisseur.Personnes ressources
^= Personnes ressources :Version 09/2013 Page 4 sur 4
André BAYLE, Biologie Sans Frontières : mca.bayle@orange.fr Louis BERNY, Biologie Sans Frontières : louis.berny@sfr.fr Roger LATER, Biologie Sans Frontières : r.later@wanadoo.frE-mail de B.S.F. courrier@bsf.asso.fr
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obtenir des renseignements supplémentaires sur un modèle précis de matériel, adressez-vous directement au
fabricant concerné. Vous pouvez également contacter les personnes ressources dont les coordonnées sont
indiquées en fin de fiche t de BSF et ne peut aucunement être considéré comme reflétant le point de vue -infos matériel développée et validée par le groupe de travail " le matériel médical dans les actions de coopération internationaleHumatem. Cette série est en accès libre sur les sites www.humatem.org et www.biologiesansfrontieres.org.
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