COURS 8: HYBRIDATION MOLECULAIRES ET SONDES HYBRIDATION MOLECULAIRE. • L'hybridation moléculaire est la propriété que présente une molécule d'acide.
L'hybridation moléculaire est l'association de 2 simples brins d'ADN (ADNs) par formation de liaisons H entre ces deux brins. On distingue les hybrides:.
Pour plus de simplicité nous ne montrons ici qu'un seul brin de sonde marquée. Au cours du passage des molécules de sondes simple brin marquées au contact du
Cours de Biologie Moléculaire et Hybridation d'ADN sur support solide : SOUTHERN BLOT ... Hybridation sur colonie de bactéries sur plage de lyse.
assay) hybridation de 2 sondes (HybProbes)
L'HYBRIDATION MOLECULAIRE. 2-1/ La température de fusion de l'ADN : C'est une température appelée également températurede demi dénaturation (Tm) qui
La forme des molécules. • considère un atome central A
Hybridation moléculaire. Southern Blot au cours d'une synthèse d'un fragment d'ADN de contrôler si l'appariement de la base qui vient d'être.
TD1: Hybridation moléculaire. 1. Principe de l'hybridation ADN-ADN. 2. Hybridation de type Southern. Module 9: B. Brunel. Septembre 2007
séparer les deux brins qui le composent une hybridation des amorces aux Risque de contamination de la PCR : au cours de l'expérience
Chapitre III HYBRIDATION MOLECULAIRE L’hybridation moléculaire est l’association de 2 simples brins d'ADN (ADNs) par formation de liaisons H entre ces deux brins On distingue les hybrides: • ADN-ADN = Homoduplex • ADN-ARN = Hétéroduplex Sondes nucléiques sont des séquences d'acides nucléiques simple brin (d'au moins 15
La règle stipule que le type d’hybridation est déterminer à partir de la valeur de : ? +?NL ? : la somme des liaisons que l’atome central peut former avec les autres atomes de la molécule ?NL: la somme des doublets non liants de l’atome central ? +?NL= 4 hybridation sp3 ? +?NL= 3 hybridation sp2
2-3-3/ Hybridation in situ (HIS): C’est une technique qui permet par l’utilisation de sondes de mettre en évidence et de repérer dans des cellules ou des tissus des séquences d'acides nucléiques connues Elle est très proche dans son principe du Southern et du Northern Blot et repose comme eux sur l'hybridation d'une sonde d'acide
L’hybridation moléculaire de type Southern – ADN sur ADN (dénaturés) – ADN sonde marqué (radioactivité ou sonde froide) – Incubation à Tm - 20°C – Composition des tampons importante • Sel nécessaire pour neutraliser les phosphates • formamide éventuelle pour abaisser la température d’hybridation
I HYBRIDATION MOLECULAIRE : L’hybridation moléculaire repose sur le principe qu’un fragment ADN simple brin s’apparie à un autre fragment ADN en respectant rigoureusement les règles de complémentarité L’hybridation est réalisée entre une sonde dont la séquence est connue et un
2-3/ Les différents types d’hybridation : 2-3-1/ Hybridation en phase liquide :Les segments complémentaires sont placés dans une solution contenant un tampon et de la formamide. L’agitation thermique assure la liaison entre les fragments complémentaires. Cette température est généralement inférieure de 15°C à la Tm de l’ADN concerné.
Cette température est généralement inférieure de 15°C à la Tm de l’ADN concerné. Les hybrides formés sont quantifiés selon trois méthodes : 1. les méthodes spectrophotométriques (la diminution en DO à 260nm est due à l’augmentation du taux des hybrides) 2. la technique de la nucléase S1 (digestion des ADN et ARN simples brins) 3.
Hybridation in situ (HIS) C’est une technique qui permet, par l’utilisation de sondes, de mettre en évidence et de repérer, dans des cellules ou des tissus, des séquences d'acides nucléiques connues.
Orbitales atomiques hybrides 3 Dans une molécule, le nuage électronique autour de l’atome s’adapte à son environnement et diffère de celui de l’atome isolé. Les orbitales atomiques se déforment.