[PDF] Révéler le phénotype et les fonctions métaboliques cellulaires avec

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Note d"application

Analyse de cellules

Auteurs

Agilent Technologies,

La Jolla, CA

Agilent Technologies,

Lexington, MA

Agilent Technologies,

Cork, Irlande

Agilent Technologies,

Lexington, MA

Agilent Technologies,

Cork, Irlande

Résumé

La technologie Agilent Seahorse XF permet de mesurer le métabolisme énergétique des cellules vivantes en temps réel, fournissant ainsi des informations essentielles fonctions métaboliques cellulaires 2

Introduction

facteur clé pour de nombreuses fonctions importantes des 1,2 en substrats dans des expériences contrôlées peut fournir des informations utiles à différents domaines de la recherche, oncologie, les dysfonctionnements immunitaires, les maladies cardiovasculaires, les maladies neurodégénératives et les 3,4,5 La technologie Agilent Seahorse XF est une plateforme XF, la cartouche du capteur, les kits de test et le logiciel pour obtenir des données du métabolisme fonctionnel cellulaire la fonction cellulaire à des détails particuliers de mécanisme Les tests de stress oxydants du substrat XF constituent une suite de tests optimisés développée pour mesurer trois substrats principaux responsables des activités des des évaluations exhaustives des mitochondries avec le test XF Cell Mito Stress et des inhibiteurs de voies métaboliques dans les fonctions fondamentales des cellules que sont à des manipulations génétiques, des interventions Voies métaboliques principales, y compris la glycolyse, le cycle indiquent les inhibiteurs pertinents du métabolisme du glucose/pyruvate, Les injections séquentielles de composés mesurent la respiration basale, des changements minimes soient observés dans des conditions basales, souvent révélées dans des conditions de demande importante de substrat MPC

Glucose

ATP ATP O2 e-Glucose

GlycolyseGlutamate

Glutamate

Malate

Acétyl-CoA

ADP + Pi

ADP + Pi

CET

Acidesgras

Acidesaminés

Lactate

Pyruvate

Pyruvate

GlutamineAGLC

CPT-1GLS

Gluco -néogenèse AGLC (Palmitate)Glutamine 500
400
300
200
100
0

0 20 40 60 80 100

Temps (minutes)

Contrôle

+Inhibiteur

Réponse à

l'inhibiteur pour une respiration maximale

Plus grande

plage de réponse

Réponse à

l'inhibiteur à l'état basal lors de la respiration

Plus petite

Plage de

réponse 3 Toutes les lignées cellulaires ont été maintenues 4 4 ont été ensemencées dans des microplaques de culture 4 2 2 Les plaques de culture cellulaire ont ensuite été transférées Tous les tests XF ont été effectués ainsi que décrit dans La méthode analytique Agilent Seahorse a été utilisée pour de cellule ont été calculés comme suit et représentés sous 7 Le MST, un outil puissant et reconnu pour évaluer les fonctions mitochondriales avec ces inhibiteurs peut être utilisé pour révéler permet de rapporter les taux de respiration basale et maximale, respiration basale et surtout maximale sont largement impactés par la capacité des cellules à transporter et oxyder les

Cette méthode est idéalement adaptée

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