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Kmb+mHB`2b 2M +mHim`2

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1

Membres du j

R DrR E E

Directeur de

Effets du resvératrol et de formulations de micro-nutriments alimentaires sur les fonctions du muscle squelettique chez la souris et sur les cellules musculaires en culture. 2

Avec les partenaires suivants :

NB actuel confidentielle 3 S

Sommaire

Rappels Bibliographiques

I.

Caractép23

Structure du mup24

I.1.2La cellule musculaire (fibre musculaire)p24

I.1.3Les comparp24

I.1.4Les fibres musculairesp25

Les fibres de type I dites lentes, oxydatives ou rougesp26

Les fibres de type IIa p26

I.1.4Les fibres de type IIb dites rapides, glycolytiques, blanchesp26

I.1.5La myogenèsep26

Les facteurs de transcription de la myogenèsep27

I.1.5Les microRNA (mp27

I.1.6Les voies de sip28

La voie de signalisation Notchp28

I.1.6La voie de signalisation NFț p28

I.1.6La voie de signalisation Wnt (p28

I.2 Fonctions métaboliques du muscle squelettiquep29 p30

I.2.2 Le métabolisme lipidiquep30

ȕ- p3

I.2.3 Le métabolisme glucidiquep32

La glycolysep32

p33 I.2.4PGC1Į Peroxisome proliferatorGamma Co1-p34 4

I.3 Les pathologies liées au muscle squelp35

p35

I.3.2 p36

I.3.3 p37

II. aturelle : le resvératrolp39

II.1.1 Sources du resvératrolp39

II.1.2 Biop41

II.1.3 Les autres polyphénols du raisin et du vinp41 II.2 Les propriétés biologiques du resvératrol

II.2.1 Propriétés généralesp43

II.2.1.1 Le resvp43

II.2.1.2 Le resvératrol et ses effets antioxydantsp43

II.2.1.3 Le resvératrol et ses effets antip44

II.2.1.4 Le Resvératrol et ses effets cardiop44

II.2.1.5 Le resvp45

II.2.1.6 Le resvératrol et ses effets neuroprotecteursp46

II.2.1.7 Le Resvératrol et p46

II.3 Le resvératrol et la myogenèsep47

III. "

III.1 Informations sur le p49

III.2 Rappels du contextep49

III.2.1 Le stress oxydantp49

III.2.2 Description des radicaux libresp50

III.2.3 p51

III.2.4 Le système antioxydantp51

III.2.5 Le système p51

III.2.6 Le système antioxydant enzymatiqp52

III.2.7Autre système antioxydantp53

Rappels du contextp56

Le syndrome métaboliquep56

Définition du syndrome métaboliquep56

Syndrome métabolique et obésitép57

IV.1.4Le tissu adipeuxp58

5

IV.2 p59

Informations sp59

Matériels et méthodesp63

I.

Modèle in vivo p64

I.2 Modèle in vitro p65

Cellules musculaires squelettiquep65

Conditions de culture des cellules C2C12p65

I.2.3 Analyse morphométriquep66

Traitements des cellules C2C12 avec du resvératrolp66

Traitements avec p67

II.3 Traitement avec p68

p68 III.2

Dosage des ARN totaux

III.4 Transcription inverse

III.5 Réaction de polymérisation en chaîne en p70

III.6 Préparations des échantillons

III.7 Polymérisation en chaîp71

III.8 p72

IV.

Préparation et dosage à partir

IV.2 Séparation des protéines sur gel de polyacrylamide en conditions dénaturante (PolyAcrylamide Gel Electrophoresis)

IV.3 p77

V. Dismutase (SOD) totale

p79

VI.2 Test au crystal violetp79

p79 6 VII.

Marquage au 3 p80

VII.2 Dosage de ROS intracellulaires avec sonde DHE (dihydroéthydine)

VIIIĮȖ

VIII.1 Préparation des plasmidesp82

Purification des plasmidesp83

Dosage des plasmidesp83

VIII.4 Transfection des cellules C2C12p83

ctivité luciférasep84

ȕ-ȕ-p84

. Effet de

Résultats

I Effet du resvératrol sur la différenciation et le métabolisme p89

I p100

II. in vivo

in vitro " p107

Induction du stress oxydantp107

p107

II.1.3 -p108

II.2 Etude in vitro (cellules C2C12, stade myoblaste)p109 p109

II.2.2 p110

II.2.3 défenses antip112

II.2.4 p113

II.3 p115

7 III. sur le métabolisme des cellules du muscle squelettique C2C12

Etude de la cytotoxicité de 3 p117

III.2 p119

III.3 ĮȖ p119

p121

Numération sanguinep122

Discussionp123

p131

Annexe/Publication "p134

p143

Addendump155

Resumé/Summary

8

Abréviations

9 A F

AAPH: 2

G

Glucose transporter type 4

H B horseradish peroxidase C 2O2: I K L

D LB:

DAG: diacylglycerol

DIOC(6)3: 3,3'

DMD: dystrophie musculaire de Duchenne

E M 10

NTNFĮ: Tumor necrosis factor Į

TG: Triglycérides

nicotinamide adénine dinucléotide phosphate

ț nuclear factor

NRF UV

P

PAGE: Polyacrylamide gel electrophoresisV

phénylalanine ammonium lyase

ĮPeroxisome Proliferator

W Q qPCR: PCR q R RC: r S SCAP: T

TAB/BAT: tissue adipeux brun

11

Liste des figures

12

Figure p17

Figure 2. Principaux types musculairesp23

p24 p25

5. Expression des différents facteurs de transcp29

p31 Figure 7. La régulation du métabolisme du glucosep33 Figure 8. Translocation de GLUT4 insulinodépendantep33

Figure 9. RégulationĮ p34

Structure chimique du resvératrolp39

Figure 11. Ellébore Blanchep39

Figure 12. Les sources naturelles du resvératrolp40 Figure 13. La voie de biosynthèse du resvératrolp41quotesdbs_dbs46.pdfusesText_46
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