Cours de Biologie Moléculaire et Génie Génétique
Cours de Biologie Moléculaire et. Génie Génétique. Dr. Abdelhakim Aouf. Destiné aux étudiants de 3 e année Licence de Microbiologie. 2015-2016.
Biologie Moléculaire Biologie Moléculaire etGénie Génétique
L'activité ADN-polymérasique est la synthèse de l'ADN dans le sens 5' 3' dans la chaine du brin en cours de synthèse. Cette activité nécessite une initiation :.
3I019: Cours dintroduction à la biologie moléculaire
des propriétés qui assurent sa transmission au cours des générations cellulaires. De l'ADN aux protéines : le dogme de la biologie moléculaire. 1.3.1.
Destiné aux étudiants de 3 année Licence Microbiologie 2017-2018
Faculté des sciences. Université Mohamad. V Rabat 50p. Aouf Abdelhakim (2016). Cours de Biologie moléculaire et génie génétique. Université. Ferhat-
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Comme elle est devenue une technologie qui a bouleversé la biologie moléculaire et s'est implantée très rapidement dans les laboratoires ( moins de 3ans)
BIOLOGIE CELLULAIRE ET MOLÉCULAIRE
Ce « cours en fiche » a pour vocation de donner aux étudiants des connaissances actualisées sur l'organisation à l'échelle moléculaire de la cellule puis d'
BIOLOGIE MOLÉCULAIRE
Le dogme central de la biologie moléculaire (W. Crick 1956) Dans ce cours c'est la transcription par l'ARN polymérase II qui sera présentée.
Biologie moléculaire de
ser à la biologie cellulaire – l'étude de la structure de la fonction et du d'une bougie ou la formation de vagues sur l'eau
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premières étapes dans la plupart des études de biologie moléculaire et dans toutes les techniques d'ADN recombinant. Afin d'obtenir des molécules d'ADN
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COURS DE BIOLOGIE MOLECULAIRE. ENSEIGNANTE :Mme Rahmouni M. ANNÉE UNIVERSITAIRE : 2019/2020. Page 2. 1. Expression de
BIOLOGIEMOLÉCULAIRE
COURSDE3
ÈME
ANNÉEGBA
2016 -2017
CAROLINESTRUB
caroline.strub@umontpellier.fr6 x 1,5h de cours
1,5h de TD
Etude dun article scientifique par groupe de 4
= > évaluation : Poster (Format A4) + oral (15-20 minutes ) en Janvier 2017 = > plus dinfo pendant les TPSOMMAIRE
Biologie moléculaire
IMatériel génétique
II Réplication
III Transcription et traduction
IV Mutations, réparations de lADN
VEpigénétique
1Biotechnologies
Techniques de génie génétique (ER,
Clonage, PCR, amplifications
isothermales)Techniques de séquençage, méthodes de
séquençage nouvelle génération (NGS).Introduction à la biologie synthétique.
Physique
Microbiologie
Virologie
Biochimie
Génétique
BIOLOGIE
MOLÉCULAIRE
1953 : Structure de lADN
(Crick et Watson)DÉFINITIONETHISTORIQUE
2Prix Nobel 1962 (Watson, Crick et Wilkins)
Structure moléculaire de lADN
RosalindFranklin,
The darklady of DNA
Cristallographie au rayon X sur
"fibre de thymus de veau»Phénotype
Gènes
Protéines
Biologie moléculaire
léchellemoléculaire géniegénétique,biotechnologies. 3 qLe dogme central de la biologie moléculaire (W. Crick 1956) qLe dogme central de la biologie moléculaire (années 2000) Les différences par rapport au dogme des années 60 : Les rétrovirus (HIV), les virus à ARN et les prions 4 qLes années 2010 : Isogène, promotérome, épigénomeLes prions
qProtéine infectieuse / PRoteinaceousInfectiousparticle Découverte en 1982 par S. Prusiner(Prix Nobel 1997) qAgent pathogène non conventionnel => Dégénérescence du système nerveux central Pas dacide nucléique, pas de réponse immunitaireLe prion dérive dune protéine endogène :
structure I R identique structures II R , III R et IV R différentes. 5Conversion de la protéine "sauvage»
en protéine "prion»Processus auto-catalytique
(cas sporadique ou contamination)Polymérisation de type amyloïde
qPropagation du prion qChez les mammifères : maladies neurodégénératives : Encéphalopathies spongiformes transmissibles (Aspect spongieux du cerveau) qLes EST se définissent par laccumulation dans le système nerveux central, de particules infectieuses de nature protéique (prions) : Chez lhomme : le kuru (Tribu Papou 1957) Prix Nobel D. Gajdusek1976, La Maladie de Creutzfeldt-Jakob (hormone de croissance) Chez dautres mammifères : La scrapie chez le mouton, lESB chez les bovins vLEncéphalopathie Spongiforme Bovine1996 : La crise sanitaire de la maladie de la vache folle
(Royaume Uni)Bétail nourrit aux farines animales
Les prions
6190000 animaux diagnostiqués
qApparition dun nouvelle forme dEST en GB à la fin des années 90 proche de la maladie de Creutzfeldt-Jakob sur jeunes adultesTransmission inter-espèce de lESB ?
Les prions
qBILAN de cette crise sanitaire majeure : Effondrement de la consommation de la viande de buf Interdiction des farines animales dans lalimentation du bétailDéveloppement du principe de précaution
214 victimes humaines (jusquà 2009)
Temps dincubation de lEST ?
7 8 9 10 11 12SOMMAIRE
Biologie moléculaire
IMatériel génétique
II Réplication
III Transcription et traduction
IV Mutations, réparations de lADN
et EpigénétiqueBiotechnologies
Techniques de génie génétique (ER,
Clonage, PCR, amplifications
isothermales)Techniques de séquençage,
méthodes de séquençage nouvelle génération (NGS). 13I -MATÉRIELGÉNÉTIQUE
1.1 Structure moléculaire des acides nucléiques
Les acides nucléiques sont constitués de chaînes linéaires de nucléotides reliés par des ponts phosphodiestersStructure dun NUCLÉOTIDE
Base + Pentose + Groupement phosphate
PENTOSES
OHRibose
Désoxyribose
ADN = acide désoxyribonucléiqueARN = acide ribonucléiqueNucléosides = Base + Pentose
BaseDésoxyribose
BASESAZOTÉES
Purines
Pyrimidines
Uracile (U)
ARNThymine (T)
ADNCytosine (C)
ADNGuanine (G)
ADNAdénine (A)
ADN 14AT (ADN) /AU (ARN) : 2 liaisons H (E = -21 kJ)
Lappariement des bases azotées seffectue par liaisons hydrogènesCG (ADN et ARN) : 3 liaisons H (E = -63 kJ)
Squelette
"sucre-P»Extrémité
3 OHExtrémité
5 P 15 qAcide faible qSens denroulement droit qSuper enroulements qEtat intermédiaire : relâché qDénaturation de lADN double brin par chauffage qLADN, support de linformation génétique est constitué de deux brins (DS "double strands») complémentaires et antiparallèles (= bicaténaire)0,38 nm
1,9 nm
Petit sillon 0,6 nm
Pb / tour : 10,4
Rotation / pb34,6°
qLa double hélice dADN possède un petit et un grand sillon (fixation de molécules "intercalentes» de lADN)Squelette sucre -P
Paires de base
Espacement entre pb:
16 grand sillon 1,2 nm3,54 nm
10,4 pb/ tour
2,53 nm
11 pb/ tour
4,56 nm
12 pb/ tour
2,55 nm
2,37 nm
1,84 nm
ABZ tour dhélice :STRUCTUREALTERNATIVESDELADN DS
qLADN est une molécule polymorphe : importance pour la régulation de lexpression géniqueLa plus communeDimère ADN/ARNSéquences GC
171.2 Matériel génétique
18 qChromosome circulaire pelotonné (dble hélice enroulée en super hélice) vOrdres de grandeur :Chromosome circulaire (E. coli 1 mm, de 4,6x10
6 pbà 5,5x10 6 pb) vComposition :ARN30%
60% ADN (dont 90% codant)
Protéines (Polymérases)
10%1.2.1 Génophorede procaryotes
Topoisomères
de lADNForme relâchée
Surenroulement
= désenroulementSurenroulement +
Superhélice
Topoisomèresde lADN
19 qPlusieurs chromosomes dans le noyau (dble hélice enroulée en superélice) vOrdres de grandeur :1 chromosome ~ 10 8 pb vComposition :Quelques définitions :
qHaploïdie / Diploïdie : 1 exemplaire / une paire de chaque chromosome (homme : 23 paires, levures : 16-18 chromosomes (ou paires), moisissures : 4-8 chromosomes) qNucléole : structure riche en ARN, site de synthèse de lARNr qDivision cellulaire végétative : bourgeonnement ou scissiparité50%ADN (dont 10% codant)
10% ARNProtéines
(histones "+») 40%1.2.2 Matériel génétique des eucaryotes
Octamères
dhistones2 x H2A
2 x H2B
2 x H3
2 x H4
Queues N-terminales
qLe nucléosome est lélément structural de base (fibre de base = 200 pbet 10 nm de diamètre) 20 211.Double hélice classique : 10 pb/ tour.
2.Nucléosome : lhélice senroule autour
des histones (200 pb/ nucléosomes ; 10 nm de diamètre)3.Nucléosomes se regroupent en
senroulant sous forme de fibres de 30 nm de diamètre (6-7 nucléosomes/tour) = solénoïde.4.Chacune de ces fibres senroulent sous
forme de spirale (superhélicede 50 fibres,500 nm de diamètre).
5.Spirales se regroupent sous forme de
mini-bandes visibles en microscopie optique (environ 18 spirales ou > 1 M de pb). Succession denroulements qui caractérisent la molécule dADN au niveau des chromosomes. qStructuration de lADN chromosomique (Représentation schématique) vChromatine hétérogène : hétérochromatine et euchromatine (code des histones) vGènes = exons + introns vGènes répétés en tandem : gènes qui codent pour lARN ribosomique (250 copies/cellule), lARN de transfert (50 copies/cellule) et les histones (20 à 50 copies par cellules) vSéquences non codantes = extragénique(98% du génome humain) vSéquences répétées : env. 50% du génome. Séquences répétitives en tandem ou disperséesSatellites
Minisatellites
Microsatellites
Longueur
100 kb -1 Mb
1 -30 kb
<150 pbMotif (pb)
>10010 -100
1 -10Localisation
Centromères
Télomères
qLes chromosomes eucaryotes 221.Télomères (aux deux extrémités du
chromosome), localisation des séquences minisatellites2.Centromère, localisation des séquences
satellites3.Séquences non codantes modérément
répétitives;4.Zones très répétitives non codantes
5.Gènes, plus ou moins spécifiques, certains
gènes (comme ceux codant pour lARN ribosomal étant codés des centaines de fois). qLes zones composant un chromosome eucaryote (Représentation schématique) 231.3 Matériel extrachromosomique
1.3.1 ADN mitochondrial
vADN DS et circulaire (sauf exception), plusieurs copies / mitochondries vLes mitochondries sont des organites présents dans les cellules eucaryotes qui seraient issues de l'endosymbiosed'une alpha-protéobactérie(2 Mds dannées). Les mitochondries ont conservé leur propre génome. Chez lhomme : 16 kb (37 gènes séparés par des régions non codantes très courtes)Saccharomyces cerevisiae86 kb (43 gènes)
Arabidopsisthaliana367kb (60 gènes)
24ADN nucléaire hérité de
lensemble des ancêtresADN mitochondrial hérité
dune seule lignée dancêtres qLes mitochondries de la cellule-uf proviennent exclusivement de l'ovocyte. Transmission de lADN mitochondrial par la mère (génétique des population) 251.3.2 ADN Chloroplastique
Taille de 120 à 160 kb
Plusieurs copies / chloroplaste
ADN circulaire et non associé à des histones Code pour une partie des protéines chloroplastiques (organites semi autonomes),Chloroplaste (microscopie électronique)
261.3.3 Plasmides (principalement chez les procaryotes)
§Copies : 5 à 30 / cellules
§ADN DS circulaire
§Taille 10
3à 2x10
5 pb §Réplication autonome, non indispensable à la cellule §Transmission de cellule à cellule par conjugaison §"Parfois intégrés au chromosome, épisome (cas des phages)» vTrès utilisés en génie génétique (plasmides commerciaux)Plasmides eucaryotes
Moins nombreux, même structure et taille
S. cerevisiae: taille 2 µm ; 50-100 copies / cellule 27vIls sont médiateurs de nombreuses propriétés meilleure adaptation des bactéries : Port de gènes dattaque (AB, toxines) ou de résistance (AB, métaux lourd) ou de synthèse denzymes métaboliques spécifiques (phénols, camphre) Plasmides quasi-ubiquitaires chez les bactéries pathogènes vExemple : acquisition de différentes propriétés par des bactéries : 28
1.3.4 Facteur "killer»
qCertaines souches de Saccharomyces sp. ont la propriété de libérer des substances toxiques. qCertaines levures contiennent 2 virus à ARN. Le " petit virus » code une protéine toxique exo-cellulaire capable de tuer d'autres levures et une protéine de résistance à cette même toxine pour empêcher les levures " killer » de se tuer entre elles. Le " grand virus » est nécessaire à la multiplication et au maintien du " petit virus » dans le cytoplasme, il contient, entre autres, les gènes codants pour la capside.Mise en évidence de levures "killer»
2930
1.4 Les gènes
qLes gènes sont les entités contenant linformation nécessaire à la synthèse de macromolécules
qUn gène est une portion dADN. qUn gène peut coder pour une fonction / un caractère (ex : linsuline, groupe sanguin).qUne fonction / un caractère peut être codée par plusieurs gène (ex : les antibiotiques, les
mycotoxines , la couleur de la peau) Cluster de gènes codants pour les enzymes responsable de la biosynthèse de mycotoxines (trichotecenes, Fusariumsp. sur orge de brasserie)Enzyme
Glycosyltransférase
Gene ABO
Quelques définitions :
qLe locus est lemplacement dun gène sur le chromosome. ex: locus du gène CFTR responsable le la mucoviscidose sur le chromosome n°7 qLes allèles correspondent aux différentes versions dun même gène, Un allèle se différencie d'un autre par une ou plusieurs différences de laquotesdbs_dbs50.pdfusesText_50[PDF] cours de biologie sous marine
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