[PDF] Etude de la cytogénétique et la génétique des Culicidae et des

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CENTREDEBRAZZAVILLE

Serviced'Entomologiemédicale

desCulicidaeetdesSimuliidae

RAPPORTDESTAGE

ParP.CARNEVALE

ChargédeRecherchesstagiaire

RAPPORTDESTAGE

ETUDEDELACYTOGENETIQUEETLAGENETIQUE

DESCULICIDAEETDESSIMULIIDAE

Baséesurunséjourde45joursdansles

laborptoiresdesProfesseurs -J.B.KITZMILLER, -G.B.CRAIGJr., -K.H.ROTHFELS,

DepartmentofZoology,..Urbana.

UniversityofIllinois,U.S.A.

DepartmentofBiology,

UniversityofNotre-Dame,

Notre-Dame,Indiana,U.S.A.

DepartmentofBotany,

UniversityofToronto,

Toronto,

Ontario,CANADA.

CYTOGENETIQUEDESANOPHELES

1-1-

1-1-2-Elevagedesmutantsd'A.albimanuG.

1-1-3-Quelquestechniquesutiles.

a-Techniqued'isolementdesfemelles b-Techniquedecomptagedesoeufs c-Techniquedecopulationforcie d-Techniquedeponteforcée

1-2-1-Produitsutilisés

a-Fixat:eut: b-Colorant c-Milieuxdemontage

1-2-2-Dissectiondeslarves

1-2-3-Obtentiondeschromosomes

a-"Squashtechnic" b-"Taptechnic"

1-2-4-Préparationpermanente

1-3-1-Rappelsuccint

1- 3-2-J:1atiri e 1

a-Priparationspersonnelles b-Collectionsmisesànotredisposition

1-4-1-Rappelssuccints,

1-4-2-Matériel

1-4-3-Observations

II-CYTOGENETIQUEETn'AEDESAEGYPTI.

11-1-Cytogénétiqued'Aedesaegypti

tènes. a)MéthodesdeMESCHER(1963) b)Remarquespersonnelles.

11-1-2-Chromosomespolytènes

a)Dissectiondeslarvesetpréparationdes glandessalivaires. tènes. bl)Observationspersonnelles b2)TravauxdeMESCHER(1963)etRAI c)Discussionetperspectives.

11-1-3-Chromosomesmitotiques.

a)Principalestechniques b)Observations.

11-2Génétiqued'Aedesaegypti.

a)Souchesetobservationspersonnelles -Matériel -Remarques b)Elevagederoutinedesmutants c)Conservàtiondessouches

11-2-2-Cartesgéniques

a)Rappelssuccincts .al)Phénomènerdte.linkage a2)Caractèresliésausexe a3)Phénomènedecrossing-over b)Locationd'ungène bl)Croisements b2)Interprétationdesrésultats aegypti.

11-3-1Luttebiologique

..Principes b -T'echniques

A-Stérilisationdes

"\Al-Chimiostérilisations

A2-Irradiation

Manipulationsgénétiques

Bl-Distorsiondusex-ratio'

B2-Translocationschromosomiques

B3-Contrôlegénétiquedesvecteurs

filaires

Premiersrésultats

d·-Perspectives

11-3-2-Cytotaxonomie.

III-CYTOTAXONOMIEDESSIMULIIDAE

de

111-1-depréparationdeschromosomes.

111-1-1-Dissectionùeslarves

a)Technique"pushandpull"deNEWMAN b)TechniquedeDUNBAR c)Technique"ouvrirettirer" a)TechniquedeROTHFELSetDUNBAR:"Feulgen technique" technique"

111-1-3-Montagespermanents

a)TechniquedeNEWMAN b).TechniqùedeROTHFELS c)TechniquedeDUNBAR

111-2-Observations

111-2-1-Observationspersonnelles

Prosimuliumfuscum.

111,,2-2..Cytotaxonornie

chromosomesgéantsde a)LecomplexeSimuliumdamnosum b)Lesespècesjumelles c)Leproblèmeduchromosome'sexuel d)PolyplordieetParthénogénèse e)Leproblèmedeshybrides f)phyl/étiques.

CONCLUSIONETCONSIDERATIONS

sansmodificationsessentiellesdubiotope. quenuisance. lasciencequinousintéresse.

ROTHFELS.

- 2 - Ce stagenousapermissuccessivement -lacytoginétiquedesanophèles, -lacytogénétiquedessimulies. delrJRIGHTetPAL(1957).

1-CYTOGENETIQUEDESANOPHELES

61801,U.S.A.).

Selon(corn.pers.)onpeutdire,qu'iderares

Sud(Anophelesdarlingi.!.muneztovari).

lesimportantstravauxqui's'yrattachent. ',\,1 --3 etKITZMILLER,1971). d'expressionbiochimique. p.réparatîons -élevageméticuleuxdes -optimaleparbac,

1enent,

débutduquatrièmestade. 1 -dissection,fixationetcoloration, -premièreobservation, -écrasement("squashtechnic") lés, -bonnededeibandesdonc -unecartographiecorrecte.

Apartirdecettedeonpeutalorsobser-

- 4 - lesparticu1iiresqu'ellesC'estcette

Urbana.

depuisplusieursgénérations -Anophe1es -Anophe1esquadrimacu1atus -Anophe1esatroparvus corn.pers.). ceuxdesespèces sontplusnettes. eaudoucedé-ionisée, - 5 - 25
0 chromosomesn'enserontqueplusnets. ximaleduarticletarsal, mentairesurletroisièmearticletarsal, lesetdesfemelles"sauvages"albimanus. 6 dor saleduc0b aye"exp0séea ux p i qûr e sdesan0pr."es.est!'asé echa que ves. lephénotype.: -sauvages, -bisignatus -trisignatus -"deformedhindtarsus" individusdontlestarsesposté- -mâle-femelle -sauvage-mutant représentés - 7-. le!:lieuxmarqué. a)Techniqued'isolementdesfemelles. ron2à 3cm.Attendrelaponteetcompterlenombred'oeufs. b)Techniquedecomptagedesoeufs. touslesoeufssanslesabîmer. lesoeufsselontroiscatégories -oeufsnormalementéclos, - 8 - l'intérieur. sultats nés+

Nb.d'oeufsnon

nonembryonnés+Nb.d'oeuf3nonéclos). donne,enréalitéaucunelarveviable. c)Techniquedecopulationforcée.

Cettes'emploiecouremmentpourBaintenirles

élevagesdpunctipennissA.!::..!.

serfaceventraleverslehaut. auniveaudel'abdomendelafemelle.Aumoment - 9 - d)Techniquedeponteforcée. lesdeuxheuresquisuiventsamutilatioa.

1-2-Préparationsdeschromosomes.

1-2-1-Produitsutilisés

a)Fixateurs estfaitedanslefixateur. rf.

Deuxmilieuxsontcourammentutilisés

fonctiondel'habiletédumanipulateur. leurchoixest -10- unedissectionpluslente.

Inconvénientfixationpluslente.

glandessalivairesenquelque60secondes. b )Col0ran·t. dansunflaconde100ml. soudrelapoudreenremuantleflacon. dre'toutelapoudre.

à45%.

-11- c)Milieuxdemontage.

Ilexistedeuxtypesdemontagedechromosomes

-montagètemporaire tion.Ceciimpliquedeuxinconvénients sontpluslisibles. -Montagepermanent.

1-2-2-Dissectiondeslarves.

tantssurunpapierfiltre. unegouttedefixateur. -Placerladanscettegoetteetcettelarve facedorsaleverslehaut. quesdelalarve. -12-

Observations

desmodificationsentrapidement desintactes.

1-2-3-Obtentiondeschromosomes

Lorsquedesglandessont23lecolo

lamelle(cf.sché.maO. toujourslacoloration. a)"Squashtechnic" bienattentionànepasfaireglisseL -13- suivantlesutilisateurs -€crasementaveclepouce, -écrasementaveclapaumedelamain, l'indexdel'autre aprèschaqueécrasement. b)"Taptechnic" oü onpeutmieuxdoserl'intensitédel'impactetchoisir' oùonl'applique. mosomesimparfaitementétalés. etque"Godhe1psus". tapertrèsintensémentsurlalamelle. -14-

Leslamesdechromosomespeuventêtreà

contredemandebeaucoupplusdetemps. notredisposition. Pourconserverceslamesdefaçonpermanenteily adiffé laisserceslames30minutesau cooléthylique:

C2H50Hà95%5minutes

C2H50Rà100%5minutes

-recouvrird'unelamelleordinaire, 1 indéfiniment. autosomes -15-

1-3-1-Rappelsuccint.

LesAnophelinipossèdent3chromosomes(

-lechromosomeIl) lechromosome lesbrasdroitetgaucheduIl, lesbrasdroitgauchQduchromosomeIll.

Cesbrassont€longueursetmita

faiblegrossissement. saformuleseraXXouXY. nousavonsunelarvefemellelechromosomeXX sinousavonslarvelechromosomeXeu 9

1-3-2-Matériel

a)Préparationspersonnelles. quantelamespourlesespècessuivantes -A.albimanus -A.atroparvus -A.quadrimaculatus -16-

Ayantnoslarvesselonlamfthodeetla

duProfesseurnousavonspucomparerlesré

élevéeseneausalée:

somessontctbandessontmieuxmarquéesque h)Collectionsmisesanotre nuneztov.:lri. -leshomologiesautosomales, trechaque -chromosomiquepr€sentéparA. darlingi•. quesdecartographiecytog€nétique. -17- tions). plane. pattern"este ssent i eIlet a rbitraire.Dansunpremiertemps,i1 dechromosomesavantdelesschématiser.

Leschèmadoitmontrer

tés, sériedephotographiespourchaquebras, 18 1 ,1(,................" grédecolorationàchaquebande, inversions"(KITZMILLER,com.pers.). chromosome. qui$'effectuedelafaçon"suivante -chromosomeXdedistaleaucentromère, -chromosome3D:dedistaleaucentromère, pratiquedeschromosomes. lamorphologieexternedeschromosomes,

1"agencementdesbandes,

-19.·' -1acolorationetformedechaquebande, cédentes. etlesdifférences.Ilnefautpasqu'ilyaun com.pers.). coreuniversellementadmise. modèleinitial. tion.

1-4-1-Rappelssuccints

les'reconnaître. -déficienceoudé18tion. 20- formealorsuneboucle("loop"). chromosomeconnu. -duplication. -inversion.

Alasuited'unerotationde180

0 uneportiondechromosomeest vidu·.esthétérozygotèpouruntyped'inversionily aformation leurrapportaveclesphénomènesde pesd'inversion -inversionpéricentrique(fig.6) -inversionparacentrique(fig•.7) obtiendra -21-

Enconséquence,uneinversionsupprimele

tantcecrossing-over. nous noustrouvonsdansunesituationoùtousleslocidesgènes -encroixaustadepachytene, -enanneauàladiakinèse, -en8àlamétaphase. que(CRAIG,corn.pers.).

1-4-2-Matériel.

-22- laF.2sontcroisésentreeux.

AlaF.3ilfaut:

location, larvesdechaque"famille"detranslocation. danssaprochainepublication.

1-4-3-Observations.

tionsdeoréférence. -AIlT(2R-3L)zonesdelOB-42A -ABT(X-2L)zonesderupture4c-25A

A9T(ZL-3R)zonesderupture19A-33C

117T(X-3R)zonesderupture1E-26B

-1·,9T(2R-3R)zonesderupture7A-2913 -M18T(Y-2R)zonederupturel4A -K18T(X-3R)zonesderuptureSB-27A

K9T(X-3L)zonesderuptu!."e2A"

-K14T(2R-3L)zonesderupturel3C-40C. -23- nombreetdesgènesdansleschromosomes. desgènes.

Onpeutaussieffectuerunindirectainsique

pourcentagesdecrossing-over. espèceconsidérée. l'autreauseind'unemêmepopulation. jumeIles)• sante 24
lité.••). -25-

4uG.B.(DepartmentofBiology,Univers

rammentutilisies. employie. 1 Aedes nosconversations. othergeneticprocedure"}.1ESCHER(1963). -26- a)Méthodede(1963) il •Cesbacspré-" b)Remarquespersonnelles

étaientenmilieulégirementsalé.

1bacd'eaunormale

- 4bacsd'eausalée:

3/4eaunormale+1/4eausaléeClNa7,5

<:7 1.

3/4eaunormale+1/4eausaléeClNa10%

3/4eaunormale+1/4eausaléeClK

7,5%

3/4eaunormale+1/4eausaléeClK10%

tureétaitdelamêmefaçon. enfonctiondumilieu +ClNa10% +ClK nymphe. +ClK10% -27-

Chromosomespolytènes

verslehaut. raxafindemieuxfairesortirlesglandes. resteducorpsque.l'onjette. pendanttroisminutes. tiondurede3à5minutes. Pournotrepartnousavonsutiliséla_ .techniquefixa- aegyptisecomposent

àchromosomes"étudiables".

dontleschromosomesnesontpas"lisibles". lesnoyaux -28- bl-personnelles. sesontmontrêesetR.I\I(com.pers.), surtoutparrapportàcellesfaiteslelot nousn'avonspuessayerd'établirla b2'-Travauxde..(1963)etRAI. parationsdechromosomes.Ily aunecertainecorrêlationentrele messontgrands. S ""qued'autres.Les

TexasD,TexasY,India,Israel.

-29- ll entrela -30- d'Aedesaegypti. c)Discussion-Perspectives.

Lesnombreusesdifficultésplushaut)

(10c.c i t.)arema r quéquel'agencementdesbande.sestiÎlterrompu parcles"we ak spots",cer t a i nespar t i e ssontreli:éesparcle5fila déterminée. pers.). -31-

11-1-3-Chromosomesmitotiques.

messomatiques. voulunousaccorderquelquesetnousfaire préparationsdetelschromosomes. a)Principalestechniques. tors"(RAI,inloJRIGHTetPAL,1967). 1 posée+Méthanol6parts +Chloroforme3parts +Acide2parts employé,ils'agit'duCarnoy(1/31/3acide a'cétiqueglacial,1/3alcoolabsolu'). c -32-

ôterlecerveaudelacapsulecéphalique

céineacéto-lactiqueà2%. b).Observations. asestravaux. -33,- somessomatiquesestde2n=6. pluspetite. l,III. ment5,4 ;6,9et7,6microBsrespectivementàlamitaphase. pers.). tre. 34-

Lediveloppementdesderisistance

s

1'illiportanceico

s

1970).

étaientdisponib1es

s

Elevagedesmutantsetmaintiendessouches

a)Souchesetobservationspersonnelles. al-'

Afinparlesd'élevasedes

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