Kit mutagenèse
1 sachet noté « extrait levures + peptone » contenant 20g d'extrait de levure et Prélever avec un cure-dent stérile
MISE EN CULTURE DE LEVURES ROUGES - Conditions dhygiène
1/ Caractéristiques des souches de levures utilisées. La souche de levure utilisée est Saccharomyces cerevisae Ade2-. Cette souche porte une mutation qui
TP5 – Les effets des UV sur les mutations.
Des levures Saccharomyces cerevisiae de souche ade2 formant des colonies rouges sont cultivées sur un milieu nutritif gélosé dans des boîtes de Pétri.
Corrigé
Dans certaines levures ade2 mutantes la mutation permet au gène reponsable de l'enzyme 2 de redevenir fonctionnel. L'enzyme est alors efficace
Protocole pour létude des effets dune irradiation par les UV sur une
Les levures sont des champignons unicellulaires qui se reproduisent par On va mettre en culture des cellules d'une souche de levure Ade2 qui forment ...
Kit transgénèse de la levure
La souche de levures Saccharomyces cerevisae Ade2 présente des colonies de couleur rouge. Cette couleur est due à un pigment.
Présenter en tableau les conditions expérimentales les résultats et
Cette étude s'effectue sur une souche de levure mutée appelée ADE2- car elle porte une mutation sur un gène de la chaine de synthèse de l'adénine.
7. Mutagénèse par lUV
utilisons une souche de levure qui porte une mutation dans le gène ADE2 Prélever une colonie de levures ade2 bien rouge à partir de la boîte que l'on ...
1-A – EXPRESSION STABILITE ET VARIATION DU PATRIMOINE
levure sa couleur naturelle blanche. Les levures ade2- portent l'allèle ade2- du gène ade2. Cet allèle résulte d'une mutation qui entraîne l'interruption
ade2+ ade2-
on connaît 2 versions de ce gène chez les levures : - ade2+ qui permet une bonne division et des colonies de grande taille. - ade2- ne permet pas une bonne
Objectif : on cherche à montrer que des facteurs environnementaux, comme les UV, peuvent favoriser l'apparition
de mutations.Des levures Saccharomyces cerevisiae de souche ade2 formant des colonies rouges sont cultivées sur un milieu nutritif
gélosé dans des boîtes de Pétri. Une colonie regroupe plusieurs centaines de cellules qui sont invisibles individuellement.
Lors de la mise en culture, on veille à ce que les cellules sont isolées les unes des autres pour que chaque colonie formée
ne soit issue que du développement d'une seule cellule.Les levures sont exposées pendant des durées différentes à un rayonnement ultra-violet (O, 15, 30 ou 60 secondes).
Chaque boîte de Pétri est ensuite placée dans un incubateur pendant 5 jours afin que les cellules se multiplient et que les
colonies soient visibles.Vous disposez des photographies de boîtes de Pétri ayant subi les différentes conditions d'exposition aux UV (Partage -
SVT - TP 5 Mutations).
Schématisation du protocole de culture des levuresLe gène ade2 code une enzyme qui intervient dans la voie de biosynthèse de l'adénine. L'allèle muté (noté allèle2) présent
chez les levures de la souche ade2 entraîne la production d'une enzyme inactive. La voie de synthèse de l'adénine est alors
bloquée, conduisant à l'accumulation d'une substance intermédiaire de couleur rouge.Les levures sauvages possèdent l'allèle sauvage (noté allèle1) et non muté du gène ade2. Ces levures produisent donc
l'enzyme active permettant la synthèse normale d'adénine. La substance intermédiaire rouge n'est donc pas produite et les
levures sauvages sont donc de couleur blanche.Les levures ade2 peuvent subir une mutation qui rétablit l'allèle sauvage. Elles peuvent aussi provoquer d'autres
mutations dont certaines sont mortelles.Vous disposez des séquences de nucléotides des deux allèles (allèle1 et allèle2) du gène ade2 (Partage - SVT - TP 5
Mutations : fichier " ade2.edi »).
Activités à réaliser
1. Réaliser le comptage des différentes colonies dans les différentes boîtes de Pétri.
Le comptage se réalise avec le logiciel Mesurim et les différentes images "Levures 0sec.jpg » ...
Pour faciliter le comptage, travailler sur un quart de la boîte et redimensionner l'image. Pour cela, cliquer sur " Image »
puis " Redimensionner ». Choisir 150 %, puis OK.Compter les colonies situées sur la limite.
Les résultats seront notés au tableau et une moyenne sera effectuée avec les résultats des différents groupes.
Voir fiche technique : Comptage avec Mesurim
2. Comparer les séquences de nucléotides des deux allèles du gène ade2.
La comparaison se réalise avec le logiciel GENIEGEN et le fichier " ade2.edi » Voir fiche technique : Utilisation du logiciel Geniegen3. Exploiter l'ensemble de vos résultats pour montrer que des facteurs environnementaux peuvent favoriser
l'apparition de mutations. Chapitre 1 : Transmission, variation et expression de l'information génétiqueTP5 - Les effets des UV sur les mutations.
pas d'exposition aux UVlevures 0 sec UV UVUVculture
5 jours
culture5 jours
culture5 jours
culture5 jourslevures 15 sec
levures 30 sec levures 60 sec1. Comptage des colonies de levures (avec Mesurim)
2. Comparaison des séquences (avec GenieGen)
3. Exploitation
Le comptage nous montre que sous l'effet d'une exposition croissante aux UV, la proportion de colonies
blanches par rapport à l'ensemble des colonies augmente : elles sont absentes pour les les colonies n'ayant
pas reçu d'UV et elles sont largement majoritaires pour les colonies ayant reçu 30 secondes d'UV.
Or, on sait que l'apparition des colonies blanches à partir des colonies rouges résulte d'une mutation ayant
affecté le gène ade2.Donc, sous l'effet des expositions croissantes aux UV, on observe de plus en plus de colonies mutées, ce
qui nous montre bien que les mutations sont favorisées par des facteurs de l'environnement, comme les
rayonnements.La comparaison des séquences nucléotidiques des deux allèles confirme qu'il existe bien une mutation.
Elle concerne le 103ème nucléotide qui a subi une substitution : le nucléotide G sur l'allèle 2 (muté) est
remplacé par un nucléotide T sur l'allèle 1 (version sauvage non mutée).De plus, le comptage nous montre qu'une exposition aux UV de 60 secondes a entraîné une mortalité très
importante chez les levures, puisque seules 5 colonies ont pu se développer. Or, on nous apprendégalement que certaines mutations peuvent être mortelles. On peut donc supposer que la mortalité très
élevée des levures soumises à une exposition de 60 secondes est liée à des mutations. Cela confirme donc
que les mutations sont effectivement favorisées par des facteurs de l'environnement, comme les rayonnements.durée d'exposition aux UV0153060Colonies rouges5064144
Colonies blanches0175110153060010203040506070
Colonies rouges
Colonies blanches
Durée d'exposition des levures aux UV (en secondes)Nombre de colonies
quotesdbs_dbs47.pdfusesText_47[PDF] LEWIS ET CLARK LEUR EXPEDITIONT ,AIDE MOI SVP SES POUR DEMAIN !
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