[PDF] Réponse biologique de cellules animales à des contraintes

View - Download Réponse biologique de cellules animales à des contraintes

Previous PDF

Next PDF

R R R R R R R R R R R /°2oe:3%%2927:R R R

™]uα"[ě['"R "αR *"™R ˆR ""™?]™"α"][R ""R ◊C"[™"*∆◊"R ""R ◊ěR

R

3◊R "™αR ™]u*"™R ˆR ◊ěR ?π]?π"ŽαŽR "[α"◊◊"'αu"◊◊"R ""R ◊Cěuα"uπyR Q"'"R

R R R R R t t 5327%
t t t R colece eaoteciotnauinpeérdoc' éagéanimmtcoéa IE N SAINRPLNGRSAISCMemLACmAIbrTsmNGN LAIAPIbAdIUGdbCdPmLAdITSL AGPRLmAdIuINSTUTjI yENSAIbNEPNmRSAII AddNCmEAdIAmNEebedIAmNbCLPdIIGéLmNGGA AGPIumuséjI ORfNmRPNLmAIbAdISELAGEAdIbCILeGLAIPnL LcCAIuOSLPjI I

TpylyI

□○▲)0○2428796 12Te□2 I

é(()auéeciea

yGIéCAIbrNfPAGLmISAIsmRbAIbAI I gireé magéanEcolece eaoteciotnauinpeérdoc' éagéanimmtcoéa mT○pse8s0○2,2 □hp○C○▲2osh0pn)h8hcstr▲202a8si)0es□▲2 2 2 2 a umirégélagéar ne mélagéarénn nélavémiaaaaaaaa

éoabcncé altolalém baha

lh)0□sur0sh)▲2er2C○58hTTi)02C7r)2▲0□e0○cs2 a."2 2 2 C 2 2 2 2 2

YECHQEDR2mRamQ'R

m)ëëDqROAqHahaa/ LGAI'/FyvIIamNàAddACmhI"o-xtvothIFNGPmeRSI a a aiPPNIFyoTyvIIoAdMNGdRfSAIfLNMmNEebedhI.eGePnNGhIyémga éZ)(SM)ROAqHahavN,SIqyTo/2IIoAdMNGdRfSAIbeéASNMMA AGPILGbCdPmLAShIFemLRShI»gNGI

FRmEgI»0yPNLSAI

cMCSRTOahI I teELSAI.yv3I ItnAàIbAIMmN1APhIlRGNàLxMRdPACmhIFRmEgI»0yPNLSAI

INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE

Ec o le Nationale Supérieure d'Agronomie et des Insdustries Alimentaires (ENSAIA)

Ecole doctorale

Ressources Procédés Produits Environnement (RP2E) Laboratoire des Sciences du Génie Chimique (LSGC) THESE □○▲)0○2428796 12Te□2

Emma PETIOT

En vue d'obtenir le grade de

DOCTEUR DE L'INSTITUT NATIONAL POLYTECHNIQUE DE LORRAINE mT○pse8s0○2,2 □hp○C○▲2osh0pn)h8hcstr▲202a8si)0es□▲2 2 2 2

PROCEDES DE CULTURES DE CELLULES VERO

EN MILIEU SANS SERUM :

lh)0□sur0sh)▲2er2C○58hTTi)02C7r)2▲0□e0○cs2 a."2 2 2 C 2 2 2 2 2

Membres du jury

Président du Jury : Pascal SOMMER Airecteur de Recherche KNRSë DZKPë CGon Rapporteurs : Ymine IYMEN ProLesseurë DRZxKNRKë Montréal Otto MERTEN Responsable bioprocédésë èénéthonë EvrG Examinateurs : Noyl AETRY, Responsable développement industrielë Mérialë CGon Ynnie MYRK Airecteur de Recherche KNRSë CSèKë NancG Hervé PDNTON Airecteur èlobal Technologies Dnnovationë SanoLixpasteurë

MarcG C"Etoile

Incitée : Kécile èENB KheL de pro»etë SanoLixpasteurë MarcG C"Etoile c I I

I I I I I I I I

NESAIREPALGLCEMemACbE

II I E I c

Remerciements

Les travaux de cette thèse ont été réalisés au Laboratoire des Sciences du Génie Chimique de Nancy, au

sein du groupe " Génie des Procédés Biotechnologiques et Alimentaires », c'est pourquoi je tiens à

remercier Mr Michel Sardin de m'y avoir acceuillie. Je souhaite aussi exprimer ma profonde

reconnaissance à Mme Annie Marc et Mr Hervé Pinton pour leur encadrement et leurs conseils

scientifiques, mais aussi pour la confiance et l'autonomie qu'ils m'ont accordée tout au long de cette

thèse.

J'adresse mes sincères remerciements à Mr. Pascal Sommer de m'avoir fait l'honneur d'accepter de

présider mon jury de thèse ainsi que à Mr. Amine Kamen et Mr. Otto Merten d'avoir accepté de juger

ces travaux. Je souhaite aussi remercier Mr Noël Detraz pour sa participation à mon jury de thèse.

Je tiens aussi à remercier tous les membres des équipes " Dengue » de Sanofi pasteur pour leur aide

précieuse, et en particulier Laetitia, Gabriel, Fleurine, Isabelle, Mounir pour leur disponibilité et leur

participation active à ce travail. Je souhaite aussi remercier tout particulièrement Cécile Gény, Thierry

Magadoux et Isabelle Bernard qui m'ont suivie et encadrée.

Ces trois années de thèse ont représenté pour moi une transition sur bien des plans, c'est pourquoi,

mes pensées vont aux personnes qui ont marquées cette période. En premier lieu, un grand merci à mes

collèges de travail, actuels et passés pour m'avoir acceptée, écoutée (et peut être supportée), et parmi

eux, je tiens à remercier tout particulièrement Naziha, Eric O., Marie W., Jean-Mathieu, Frédérique,

Marie-Françoise, Mathilde, Caroline... Merci surtout à Fabrice Blanchard et ses perpétuels " thésards et

thésardes préférés », et qui entre autre, m'a initiée à la culture en réacteur...

Mes pensées vont aussi à mes amis proches, toujours présents à mes côtés et qui m'ont accompagnée

tout au long de ce périple. Une petite pensée pour mes compagnes de galère durant ces derniers mois,

Laure et Maia, probablement aussi entrain d'écrire leurs remerciements, mais aussi à tous les autres qui

m'ont permis

de temps à autres de m'échapper de ce " grand froid nancéen », Paulo, Kloé, Ché, Mathieu,

Pauline, Alban, Charlotte... sans oublier tous ceux qui m'ont aidée à le supporter ici, Sophie, Christophe,

Greg, Georges, Apo... Je pense aussi très fort à ma famille qui a été présente quand j'en avais le plus

besoin et surtout à ma mère, qui m'a écoutée et soutenue dans les moments difficiles...

Enfin, je tiens à remercier une personne qui a

blement beaucoup comptée et a marquée cette période, et qui j'espère, marquera la prochaine, Eric.

Abréviations

ACP Analyse en composante principale

ATCC American Type Culture Collection

DoE Plan d'expériences (Design of Experiment)

FDA Food and Drug Administration

HPLC Chromatographie liquide haute performance LC-MS/MS Chromatographie liquide couplée la spectrométrie de masse

MCS Microporteurs

MIR Moyen infrarouge

NIR (Near Infrared) Proche infrarouge

ORA Office of Regulatory Affairs

OUR Taux de consommation d'oxygène (Oxygen uptake rate)

PAT Process Analytical technology

PLS Régression des moindres carrés (Partial Least Square)

PS Phosphatidyl-sérine

QbD Quality by Design

TCA Cycle des acides tricarboxyliques

LDH Lactate déshydrogénase

EAEMP European Agency for the Evaluation of Medical Product

FSC Forward scatter (cytométrie)

SSC Side scatter (cytométrie)

BSA Bovine Serum Albumine ( Albumine bovine)

PBS Phosphate buffer saline (tampon phosphate)

CER Taux d'évolution du CO2

SOMMAIRE GENERAL

INTRODUCTION GENERALE - 1 -

ETUDE BIBLIOGRAPHIQUE - 5 -E

1.1.

La cellule Vero en milieu sans sérum - 10 -

1.2. Le virus de la dengue - 20 -

1.3. La mort cellulaire - 28 -

1.4. Le métabolisme cellulaire - 35 -

1.5. L'approche PAT appliquée à la culture de cellules animales - 59 -

OBJECTIFS DES TRAVAUX - 77 -E

E 1.1.

Culture cellulaire et production virale - 87 -

1.2. Croissance et viabilité cellulaires - 91 -

1.3. Etude du métabolisme cellulaire - 95 -

1.4. Calcul des paramètres cinétiques - 98 -

1.5. Autres techniques analytiques - 99 -

1.ECriblage de groupes de composés d'un milieu de culture sans sérum pour la culture de

1.1. Criblage rapide de milieux de culture sans sérum pour des cellules Vero adhérentes par une méthode à petite échelle et non invasive. - 111 -

2.EEtudes cinétiques et métaboliques de culture de cellules Vero en milieu sans sérum - 129 -E

2.1. Culture en milieu de référence - 135 -

2.2. Culture de cellules Vero en milieu de référence avec renouvellement du milieu - 140 -

2.3. Influence de la dilution du milieu de référence ou de l'ajout de glutamine dans le milieu de culture

- 149 -

2.4. Etude métabolique et physiologique de la cellule Vero en milieu sans sérum - 153 -

3.ENouveaux outils de suivi en-ligne pour l'évaluation d'une approche PAT dans le cas de

E

3.1. Analyse en ligne de la croissance et de la mort de cellules Vero cultivées sur microporteurs - 191 -

3.2. Etude préliminaire de l'analyse des cellules Vero et du milieu de culture par microspectroscopie

Raman - 211 -

3.3. Analyse en-ligne de métabolites du milieu de culture par spectroscopie proche-Infrarouge - 217 -

4.ECulture des cellules Vero en bioréacteur et production virale - 239 -E

4.1. Etudes cinétiques de cultures de cellules Vero à l'échelle du bioréacteur - 244 -

4.2. Influence du milieu de culture sur la production virale en bioréacteur - 251 -

4.3. Impact de la substitution de la glutamine sur l'extrapolation du procédé - 261 -

CONCLUSION GENERALE & PERSPECTIVES - 271 -

BIBLIOGRAPHIE - 285 -E

éatoEvHst(Eaiqlalogu i

U

4U)U4U

U U U U

Foc"aq»ol"FR

wTFTcjViR U U U U U U U U U U

éatoEvHst(Eaiqlalogu i

U

4U(U4U

U

éatoEvHst(Eaiqlalogu i

4UzU4UU

EFoc"aq»ol"FRR

R

-QPAOSO2 AONLUHTUYCNIEHE2UHTUIPSAPCT2UHTUITSSPST2U LOR ST2UYNPCUS UYCNHPIAONLUHTULNRMCTP2T2URNSEIPST2U3U

VO2ETU A:EC YTPAOrPTFU ATSST2U rPTU HT2U YCNAEOLT2U CTINRMOL LAT2U ml IATPC2U HTU ICNO22 LITFU LAOINCY2U

RNLNISNL P1FU:NCRNLT2FUI5ANàOLT2faUNPUHT2UV IIOL2UVOC P1FUT2AUTLUS CDTUT1Y L2ONLUHTYPO2USTUROSOTPUHPU

2OBISTUHTCLOTCUmJCTAgRTCU(//(a0UdSP2U2YEIOlOrPTRTLAFUH L2USTUI 2UHTUS UYCNHPIAONLUHTUV IIOL2FUSTUYCNIEHEU

HTUYCNHPIAONLUHPUVOCP2UHTUS UYNSONR5ESOATUM 2EU2PCUS UIPSAPCTUHTUITSSPST2UkTCNFU UEAEUSQPLUHT2UYCTROTC2U

YCNIEHE2U3U9ACTUHEVTSNYYEUY CUSQGL2AOAPAUnECOTP1UmnNLA DLNL i tiguKNU)oeK)ûUnNLA DLNLi tiguKNU)oeoeoea0U

oTYPO2UITU8NPCFUSTULNRMCTUHTUV IIOL2UVOC P1U3UP2 DTUVEAECOL OCTUNPU:PR OLFUYCNHPOA2U VTIUITAATUSODLETU

ITSSPS OCTFU U lNCATRTLAU PDRTLAE0U oTU YSP2FU 2 U I Y IOAEU 3U YCNSOlECTCU 2PCU ROICNYNCATPC2U U YTCRO2U

H»TLVO2 DTCU2 UIPSAPCTUTLUR 22TUH L2UHT2UMONCE IATPC2FUITUrPOUTLUl OAUPLU2PYYNCAUITSSPS OCTU P8NPCH»:POU

OLINLANPCL MSTUH L2US»OLHP2ACOTUY: CR ITPAOrPT0U U

uUS UlOLUHPU2OBISTUHTCLOTCFUS»PAOSO2 AONLUHTUROSOTP1UHTUIPSAPCTU2 L2U2ECPRUHTUVT PUlwA SULOURNSEIPST2U

H»NCODOLTU LOR STFU UEAEUlNCATRTLAUYCEINLO2ETUY CUST2UNCD LO2RT2UCEDSTRTLA OCT2UATS2UrPTUS UqouFUTLU

C O2NLU HT2U CO2rPT2U 2 LOA OCT2U YNATLAOTS20U n S:TPCTP2TRTLAFU YNPCU S U YSPY CAU HT2U SODLET2U ITSSPS OCT2U

PAOSO2ET2FUSQESOROL AONLUHPU2ECPRU2QT2AUAC HPOATUY CUPLTUHOROLPAONLUHT2UYTClNCR LIT2UHTUICNO22 LITFUHTU

VO MOSOAEU TAU HQ H:ECTLITU ITSSPS OCTU NPU HTU YCNHPIAONL0U c»T2AU YNPCrPNOFU HTU LNRMCTP1U AC V P1U NLAU EAEU

CE SO2E2UYNPCU YYCNlNLHOCUST2UINLL O22 LIT2UHTUM 2TU2PCUS UICNO22 LITFUSTUREA MNSO2RTUTAUS URNCAUHT2U

SODLET2UITSSPS OCT2UIPSAOVET2UH L2UIT2ULNPVT P1UROSOTP1UHTUIPSAPCT0UeLULNATU OL2OUPLULNRMCTUORYNCA LAU

HTUYPMSOI AONL2UAC OA LAUHTUHOllECTLAT2USODLET2UITSSPS OCT2FUINRRTUST2U:5MCOHNRT2FUST2UITSSPST2UcseUNPUST2U

ITSSPST2U7sJFUfFUEAPHT2USTUYSP2U2NPVTLAUlNI SO2ET2U2PCUHT2UYCNIEHE2UTLUHEVTSNYYTRTLA0UoTUl jNLU 22TgU

2PCYCTL LATFU TLU HEYOAU HTU ITAATU SOAAEC APCTU lNPCLOTFU ACB2U YTPU H» CAOIST2U 2TU 2NLAU YTLI:E2U 2PCU STU I 2U

Y CAOIPSOTCUHT2UYCNIEHE2UT1O2A LA2URTAA LAUTLUNTPVCTUS UIPSAPCTUHT2UITSSPST2UkTCN0U-T2U CAOIST2UINLITCL LAU

ITSST24IOU 2Q AA I:TLAU T22TLAOTSSTRTLAU P1U YTClNCR LIT2U HTU YCNHPIAONLU VOC STFU 2 L2U HEA OSSTCU STPCU

Y:52ONSNDOTU TAU STPCU REA MNSO2RT0U yE LRNOL2FU OSU T2AU IS OCU rPTU IT2U Y C RBACT2U 2NLAU lNCATRTLA2U

OLATCINLLTIAE2FUTAUrPTUSTUCTLHTRTLAUTAUS UrP SOAEUHQPLTUYCNHPIAONLUVOC STUHEYTLHTLAUlNCATRTLAUHTUSQEA AU

Y:52ONSNDOrPTU TAU REA MNSOrPTU HT2U ITSSPST20U d CU INL2ErPTLAFU lOLU HTU YNPVNOCU T1YSNOATCU PU ROTP1U ST2U

YNATLAO SOAE2UHTUITAATUSODLETUITSSPS OCTFUPLTUEAPHTU YYCNlNLHOTUHPUYCNIEHEUHTUIPSAPCTUHTUITSSPST2UkTCNUTLU

ROSOTPU 2 L2U 2ECPRU 2TU CEVBSTU 9ACTFU TLINCTU 3U ITU 8NPCFU PLU TL8TPU R 8TPCU A LAU PU LOVT PU I HEROrPTU

rP»OLHP2ACOTS0U

éatoEvHst(Eaiqlalogu i

U

4UêU4U

U U U

d CU OSSTPC2FUS UqouU UOLOAOEUTLU(//(US UHER CI:TUduéUmdCNIT22UuL S5AOI SUéTI:LNSND5aFUHEHOETU PU2NPAOTLU

HTUS»OLLNV AONLUH L2UST2UYCNIEHE2UY: CR ITPAOrPT2UTLUVPTUHQ RESONCTCUST2UICOABCT2UHTUYCNHPIAONLUTAU

H» 22PC LITU rP SOAEKiuYYSOrPE2U P1U YCNIEHE2U HTU IPSAPCTU HTU ITSSPST2U LOR ST2FU ST2U NM8TIAOl2U HTU ITAATU

YYCNI:TU 2NLAU RPSAOYST20U 'LU TllTAFU OS2U OLISPTLAU PLTU RTOSSTPCTU INRYCE:TL2ONLU HPU YCNIEHEU Y CU PLTU

INLL O22 LITU IICPTUHTUS UY:52ONSNDOTUTAUHPUREA MNSO2RTUITSSPS OCTFUR O2U P22OFUS URO2TUTLUYS ITUHTU

LNPVT P1UNPAOS2UHTUINLAC'STUTL4SODLTUHT2UY C RBACT2UISE2UHPUYCNIEHEUHTUIPSAPCT0U-TUMPAUPSAORTUT2AUHTU

Y CVTLOCU3UYCEHOCTFUNYAORO2TCUTAUINLAC'STCUS»EVNSPAONLUHPUYCNIEHEUY CUHT2UNPAOS2U YYCNYCOE2UTLUVPTUHTU

CTLlNCITCUS UrP SOAEUHPUYCNHPOAUlOL S0U

U U U

ëtHv ib(Mu(Eqog'h(TH i

4U6U4UU

U U U U U U R R oqaiR glgVl"wcjh4lzqiR

ëtHv ib(Mu(Eqog'h(TH i

4U%U4UU

ëtHv ib(Mu(Eqog'h(TH i

4U"U4UU

U U eAIseR.E.GEL' PCbErIeRàR,RàR U

GLACNHPIAONLU4UoeU4U

U )0 )0

U- UITSSPSTUkTCNUTLUROSOTPU2 L2U2ECPRU4U)/U4U

)0)0)0 UeCODOLTUTAU:O2ANCOrPTUHTUS USODLETUITSSPS OCTUkTCNU4U)/U4U )0)0(0U-T2UROSOTP1U2 L2U2ECPRU4U))U4U )0)0z0U-T2UYCNIEHE2UHTUIPSAPCTUHTUITSSPST2UkTCNUTLUROSOTPU VTIUTAU2 L2U2ECPRU4U)êU4U U )0 (0U-TUVOCP2UHTUS UHTLDPTU4U(/U4U )0(0)0Uc C IAECO2AOrPT2UHPUVOCP2UHTUS UHTLDPTU4U(/U4U )0(0(0U'YOHERONSNDOTUTAUY A:NDTLB2TU4U()U4U )0(0z0UnEI LO2RTUHQOLlTIAONLUITSSPS OCTUTAUHTUYCNSOlEC AONLUHPUVOCP2UHTUS UHTLDPTU4U((U4U )0(0ê0UtEYNL2TUORRPLOA OCTU4U(zU4U )0(060UGLlTIAONLUHT2UITSSPST2UkTCNUY CUSTUVOCP2UHTUS UHTLDPTU4U(êU4U )0(0%0Uk IIOL AONLUINLACTUS UHTLDPTU4U(6U4U )0(0"0U-

T 2UV IIOL2UI:ORBCT2U4U("U4U

U )0 z0U- URNCAUITSSPS OCTU4U(KU4U )0z0)0U-T2UHTP1UREI LO2RT2UHTUS URNCAUITSSPS OCTU4U(KU4U )0z0)0)U- ULEICN2TU4U(oeU4U )0z0)0(U-Q YNYAN2TU4U(oeU4U )0z0(0U- URNCAUITSSPS OCTUTLU252ABRT2UHTUIPSAPCTU DOAE2U4Uz)U4U )0z0(0)UGRY IAUHTUSQTLVOCNLLTRTLAUY:52OrPTUTAUREI LOrPTU4Uz)U4U )0z0(0(UGRY IAUHTUSQTLVOCNLLTRTLAUMONI:OROrPTU4Uz(U4U )0z0(0zUiAC AEDOT2UHTUSOROA AONLUHTUS URNCAUY CU YNYAN2TUUTLUROSOTPU2 L2U2ECPRU4UzzU4U U )0

ê0UnEA MNSO2RTUITSSPS OCTU4Uz6U4U

)0ê0z0U-TUREA MNSO2RTUHPUDSPIN2TU4Uz6U4U )0ê0ê0UnEA MNSO2RTUHTUS UDSPA ROLTU4Uê(U4U )0ê060UnEA MNSO2RTUHT2U IOHT2U ROLE2U4Uê6U4U )0ê0%0UdCNHPIAONLUHTUS IA ATUTAUHQONL2U RRNLOPRU4U6/U4U )0ê0%0)U-TUS IA ATU4U6/U4U )0ê0%0(U-T2UONL2U RRNLOPRU4U6)U4U )0ê0"0UuRESONC AONLUHT2UYTClNCR LIT2UHQPLTUIPSAPCTUITSSPS OCTUY CUSTUINLAC'STUHPUREA MNSO2RTU

ITSSPS OCTU4U6)U4U

)0ê0"0)UiAC AEDOTUHTUCEErPOSOMC DTUHPUREA MNSO2RTUHPUDSPIN2TUîUS IA ATU4U6(U4U )0ê0"0(Ui A C AEDOT2UHTUCEErPOSOMC DTUHTUS UDSPA ROLNS52TU4U66U4U U )0

60U-Q YYCNI:TUduéU YYSOrPETU3US UIPSAPCTUHTUITSSPST2U LOR ST2U4U6oeU4U

)060)0U-Q YYCNI:TUduéUTAUS UREA:NHNSNDOTUèMoU4U6oeU4U )060(0UiPOVOUHTUS UINLITLAC AONLUTAUHTUS UVO MOSOAEUITSSPS OCT2U4U%)U4U )060z0)UiYTIACN2INYOTUt R LU4U%KU4U )060z0(UiYTIACN2INYOTUYCNI:TUOLlC CNPDTUmyGtaU4U%oeU4U U

ëtHv ib(Mu(Eqog'h(TH i

4UKU4U

ëtHv ib(Mu(Eqog'h(TH i

4UoeU4UE

u5cdi.▼5adu) U o

L2U ITAATU YCTROBCTU Y CAOTFU LNP2U YCNYN2NL2U PLTU L S52TU MOMSONDC Y:OrPTU HT2U HOllECTLA2U 2YTIA2U

INLITCLE2UY CUS»NM8TIAOlUHTULN2UAC V P10UU

U

uOL2OFU S U YCTROBCTU Y CAOTU HTU LNACTU EAPHTU MOMSONDC Y:OrPTU CTS ATU HTU l jNLU T1: P2AOVTU ST2U HNLLET2U

HO2YNLOMST2UH L2US USOAAEC APCTU2PCUS UITSSPSTUkTCNUIPSAOVETUTLUROSOTPU VTIUNPU2 L2U2ECPR0U-T2UYNOLA2UYSP2U

Y CAOIPSOBCTRTLAU IITLAPE2U ANPI:TLAU P1U YCOLIOY ST2U PAOSO2 AONL2U HTU IT2U ITSSPST2U H L2U ST2U YCNIEHE2U

OLHP2ACOTS2UTAU I HEROrPT2U OL2OUrP»3USTPCUPAOSO2 AONLUTLU M2TLITUHTU2ECPR0U U

-T2UHTP1UY CAOT2U2POV LAT2UAC OATLAUCT2YTIAOVTRTLAUHTUS URNCAUTAUHPUREA MNSO2RTUHT2UITSSPST2U LOR ST20U

-T2UAC V P1UYCE2TLAE2U2»OLAECT22TLAU3UHOVTC2T2USODLET2UITSSPS OCT2FUTLUHEVTSNYY LAUYSP2UY CAOIPSOBCTRTLAU

ST2USODLET2UITSSPS OCT2UO22PT2UHTUAO22P2UCEL P1FUATSST2UrPTUST2UITSSPST2U7sJFUnocJUNPUs'JU(oez0U-TUYTPUHTU

HNLLET2UHO2YNLOMST2U2PCUS URNCAUTAUSTUREA MNSO2RTUHT2UITSSPST2UkTCNFULNA RRTLAUTLUROSOTPU2 L2U2ECPRFUU

T2AU P22OUYCE2TLAE0U

U

yNACTUEAPHTUMOMSONDC Y:OrPTU2QOLAECT22TU P22OU3US UY CAOIPSTUVOC STUYCNHPOATFUrPOUT2AUPLUVOCP2UI:ORBCTUHTUS U

HTLDPT0UcTAATUY CAOTULNP2UYTCRTAUHTUYCE2TLATCUSTUINLAT1ATUDELEC SUHTUS UYCNHPIAONLUHQPLUI LHOH AU V IIOLUINLACTUS UHTLDPTUTAUST2UI C IAECO2AOrPT2UHTUITUVOCP20UU U

'LlOLFUS URO2TUTLUwPVCTUHQPLTUHER CI:TUduéULEIT22OATUS URO2TUTLUYS ITUHTULNPVTSST2UREA:NHT2UHTU2POVOU

HPUYCNIEHEFU VTIFULNA RRTLAFUSTUHEVTSNYYTRTLAUHTULNPVT P1UI YATPC2UHTU2POVOUTL4SODLT0U,LTUVPTU HQTL2TRMSTUHT2UATI:LNSNDOT2UHO2YNLOMST2UYNPCUST2UYCNIEHE2UHTUIPSAPCTUHTUITSSPST2U LOR ST2UT2AUHNLIU

YCNYN2ETU H L2U S U HTCLOBCTU Y CAOTU HTU LNACTU EAPHTU MOMSONDC Y:OrPT0U ,LTU YCE2TLA AONLU YSP2U HEA OSSETU

INLITCLTUST2UATI:LNSNDOT2UI:NO2OT2UH L2ULNACTUEAPHT0U U

ëtHv ib(Mu(Eqog'h(TH i

4U)/U4UU

xOxO GjR»iVVqViRéic"RiFRulVliqRpjFpRpTcquRR U

0)0)0PeCODOLTUTAU:O2ANCOrPTUHTUS USODLETUITSSPS OCTUkTCNU

U

- U SODLETU HTU ITSSPST2U kTCNU U EAEU O2NSETU TAU EA MSOTU 3U Y CAOCU HTU CTOLU HTU 2OLDTU VTCAU HPSATU HQ lCOrPTU

mO otE'(th sHeig th(E'eaUTLUR C2U)oe%(UY CUv0Uv 2PRPC UTAUv0UJ ç àOA U3USQPLOVTC2OAEUHTUc:OM U PU. YNL0U

-TU LNRU HNLLEU 3U ITAATU SODLETU ITSSPS OCTU U EAEU I:NO2OU Y CU STU oC0U v 2PRPC U TAU YCNVOTLAU HTU S U S LDPTU

'2YTC LAN0UXUkTCNU&U2ODLOlOTUS UVECOAEUTLU'2YTC LANFUR O2UT2AU P22OUSQ ICNL5RTUHTUXUkTCH U&UTAUHTUXUtTLNU&U

mVTCAUTAUCTOLUCT2YTIAOVTRTLAUTLU'2YTC LANa0U'LU)oe%êFUITAATUSODLETU UEAEUAC L2RO2TU3US UM LrPTUITSSPS OCTU

RNLHO STUuéccU PUY 22 DTU))z0U'SSTU UTL2POATUEAEUYCNY DETU8P2rPQ PUY 22 DTU)()U V LAUHQEA MSOCUPLTU

M LrPTUITSSPS OCT0UcTAATUSODLETUITSSPS OCTUEA OAU SNC2UIPSAOVETUTLUROSOTPUn)oeoeU VTIU6UWUHTU2ECPR0U

- UI C IAECO2 AONLUOLOAO STUHTUITAATUSODLETUITSSPS OCTUTLUA LAUrPTU2PM2AC AUYNPCUS UYCNHPIAONLUHTUV IIOL2U

VOC P1U UEAEUCE SO2ETUH L2UST2U LLET2U)oeK/UY CUSQGL2AOAPAUnECOTP1FUR OLATL LAUINLLPU2NP2USTULNRUHTU

i LNlOU d 2ATPC0U -T2U YCOLIOY ST2U I C IAECO2AOrPT2U HTU ITAATU SODLETU 2NLAU YCE2TLAET2U IO4HT22NP2U H L2U STU

A MST PU)0UGSUT2AUOLINLAT2A MSTUrPTUS UYCNHPIAONLUHTURNSEIPST2UMONSNDOrPT2U3UP2 DTUA:EC YTPAOrPTU UEAEU

l IOSOAETUY CUSQPAOSO2 AONLUHTUITAATUSODLETUITSSPS OCT0U'LUTllTAFUITS U UYTCRO2UHTU2Q llC LI:OCUHTUSQPAOSO2 AONLU

HQ LOR P1FU TAU HNLIU HTU S U V CO MOSOAEU INLITCL LAU STPCU YCNVTL LITFU OL2OU rPTU HT2U LNRMCTP1U DTLA2U

OLlTIAOTP1U YNATLAOTSSTRTLAU YCE2TLA2U H L2U ST2U IPSAPCT2U YCOR OCT2U T1AC OAT2U HTU CTOL2U HTU 2OLDT2U VTCA2U

mnTCATLU (//%a0U - U APRNCODELOIOAEU HTU IT2U ITSSPST2U U EAEU EV SPETU 3U Y CAOCU HTU C A2U LNPVT P1U LE2U

ORRPLNHEYCORE20UuOL2OFUOSU UEAEURNLACEUrPTUST2ULNHPST2UlNCRE2UI:TgUIT2UC A2FU3US U2POATUHQOL8TIAONLUHTU

ITSSPST2UkTCNUCEDCT22 OTLAU8P2rPQ PU)%oe

BRTUY 22 DTU2PMOUmnNLA DLNLi tiguKNU)oeoeoea0UcT2UYCNYCOEAE2UNLAU

YTCRO2U SQPAOSO2 AONLU HTU ITAATU SODLETU YNPCU S U YCNHPIAONLU HTU V IIOL2U :PR OL2U 2TSNLU ST2U T1ODTLIT2U TAU

CEDSTRTLA AONL2UORYN2ET2UY CUSQNCD LO2 AONLURNLHO STUHTUS U2 LAEUmeniFU)oeK(a0U

AjgVijqRxOUU c C IAECO2AOrPT2UHTUS UITSSPSTUkTCNU

LclwlFiRtTOLUHTU2OLDTUVTCAU HPSATUH»ulCOrPTU

AcjFp("cujol"FRy APCTSSTUěU PUINPC2UHT2UY 22 DT2U2PIIT22Ol2U Aqu"clwTFl»loTRyNLUAPRNCODBLTUmH» YCB2US UHElOLOAONLUHPUhseaUěU RRcgeiv iaEvHu eivEatiugitg(uu igHqP at igR siu it P'eiDZCGiYIi

RRcgeiv iPltgetge ei

mjcv"ovhiRuLTPYSNŠHTUěU6KUI:CNRN2NRT2UH L2U%%WUHT2UITSSPST2U mqVoqciRuH:ECTLATU

T(TciF»iRPAmmRcc-K)FU)(êáUY 22 DTU

AcjUjglVloTRiPOVOTUHTYPO2U2NLUNCODOLTFUAC j MOSOAEUINRYSBATUmROSOTPFU2ECPRaU Ciculppl/loTRik4ê/FUik46FUCNPDTNSTFU CMNVOCP2FUCENVOCP2FUCPMENSTFUU RR HTLNVOCP2U2OROTLFUYNSONVOCP2FUDCOYYTFUVOCP2UCT2YOC ANOCTU25LI5AO SFU

RRUVOCP2UV IIOLO U000U

mjcj»oTclpolzqiRyTUYCNHPOAUY 2UH»OLATClECNLU

ëtHv ib(Mu(Eqog'h(TH i

4U))U4UU

)0)0(0E-T2UROSOTP1U2 L2U2ECPRU U

,LTUHT2UYCOLIOY ST2UHOllOIPSAE2UHTUS UIPSAPCTUHTUITSSPST2U LOR ST2UCE2OHTUH L2UST2UMT2NOL2UINRYST1T2UTLU

ESERTLA2ULPACOAOl20UcQT2AUYNPCrPNOFUYTLH LAUHTULNRMCTP2T2U LLET2FUSTU2ECPRUHTUVT PUlwA SU UEAEUSTU

INRYSERTLAU rPOU l VNCO2 OAU STU ROTP1U S U ICNO22 LITU TAU STU R OLAOTLU ITSSPS OCTFU TAU ITFU YNPCU PLTU DC LHTU

R 8NCOAEUHT2USODLET2UITSSPS OCT2FUrPQTSST2U2NOTLAUINLAOLPT2UNPULNL0UcT2UrP SOAE2UAOTLLTLAU3US UINRYN2OAONLU

INRYST1TUHPU2ECPRUTAU3U2NLU YYNCAUTLUESERTLA2UDELEC STRTLAUYTPUNPUY 2UYCE2TLA2UH L2UST2UROSOTP1UHTU M 2T2UTP14R9RT20UU'LUTllTAFUST2UROSOTP1UHTUM 2T2FUATSUrPTUST2UROSOTP1Un'nFUon'nFU'n'nFUbn'nFUGnonU

TAUtdnGU YYNCATLAUT22TLAOTSSTRTLAUST2UESERTLA2ULPACOAOl2ULEIT22 OCT2U3US UMON25LA:B2TUITSSPS OCTUm2PICT2FU

IOHT2U ROLE2FU VOA ROLT2FU ONL2FU fa0U cTYTLH LAFU S U IPSAPCTU HTU ITSSPST2U LOR ST2U LEIT22OATU P22OU HTU

LNRMCTP2T2U PACT2U RNSEIPST2U rPOU Y CAOIOYTLAU 3U S U ICNO22 LITFU S U YCNATIAONLFU SQ H:E2ONLFU SQ YYCNVO2ONLLTRTLAUTLULPACORTLA2UTAIfUmé MST PU(aU0U U - UYCNVTL LITU LOR STUHTUIT2U2ECPR2UCT2ATULE LRNOL2UPLUOLINLVELOTLAUR 8TPCUYNPCUST2ULNRMCTP1U

OLHP2ACOTS2U rPOU RTAATLAU TLU wPVCTU HT2U YCNIEHE2U HTU YCNHPIAONLU HTU RNSEIPST2U MONSNDOrPT2U 3U P2 DTU

A:EC YTPAOrPTU3UY CAOCUHTUITSSPST2U LOR ST2UTAUTLUY CAOIPSOTCUYNPCUST2UV IIOL2U:PR OL2UmnTCATLU(///a0U'LU

TllTAFU SQPAOSO2 AONLU HTU 2ECPRU TLDTLHCTU HOVTC2U YCNMSBRT2U HQNCHCTU EA:OrPTU TAU 2 LOA OCTFU R O2U P22OU HTU

rP SOAEUTAUHTUAC j MOSOAEUHT2UYCNHPOA2UlOLO20UdCTROBCTRTLAFUST2U2ECPR2U2NLAU2P8TA2U3UHT2UV CO AONL2UHTU

INRYN2OAONLU HTU Y CAU STPCU YCNVTL LIT0U GS2U YTPVTLAU P22OU 9ACTU S U 2NPCITU HTU INLA ROL AONL2U mT1UěU

R5INYS 2RT2FU DTLA2U HTU AC L2RO22ONLU HT2U TLIEY: SNY A:OT2U 2YNLDOlNCRT2U LNA RRTLAU MNVOLTaU TAU YNPCrPNOFUSQEVNSPAONLUHT2UYCNIEHE2U IAPTS2UATLHU3USQESOROL AONLUHPU2ECPRUTAFUHTUl jNLUYSP2US CDTFU3U SQESOROL AONLUHTUANPAUINRYN2EUHTUYCNVTL LITU LOR ST0UU U

oOllECTLA2U A5YT2U HTU lNCRPS AONLU T1O2ATLAU YNPCU ST2U ROSOTP1U 2 L2U 2ECPRFU Y CROU ST2rPTSST2U NLU YTPAU

HO2AOLDPTCUUST2U YYTSS AONL2U2POV LAT2Umx: LD

i tiguKNU(//6aěU U U

4UROSOTPU2 L2U2ECPRUmiqnUěUiTCPR4lCTTURTHOPRaU

4UROSOTPU2 L2UYCNAEOLT2UHQNCODOLTU LOR STUmudqnUěUuLOR SUYCNATOLUlCTTURTHOPRaU

4UROSOTPU2 L2UYCNAEOLT2UmdqnUěUdCNATOLUlCTTURTHOPRaU

4UROSOTPU2 L2UINRYN2E2UHQNCODOLTU LOR STUmuqnUěUuLOR SUlCTTURTHOPRaU

4UROSOTPUHTUINRYN2OAONLUI:OROrPTRTLAUHElOLOTUmconUěUc:TROI SS5UHTlOLTHURTHOPRaU

Uquotesdbs_dbs29.pdfusesText_35

[PDF] FICHE TECHNIQUE mais - SAED

[PDF] les et cultures fourragères tropicales leurs possibilités d - AFPF

[PDF] AIDES AU LOGEMENT ETUDIANT : Votre Caf répond ? vos questions

[PDF] C10 La pension d 'invalidité des salariés - France Assos Santé

[PDF] La cotisation foncière des entreprises et la taxe foncière - Atelier des

[PDF] Stages - Foire Aux Questions - energie-environnement-upmcfr

[PDF] Peut-on cumuler la pension d 'invalidité avec d 'autres - Justicefr

[PDF] Cumul emploi-retraite : les règles ont changé - safpt

[PDF] Images correspondant ? cung c

[PDF] le care, le caring, le cure et le soignant - Cairn

[PDF] Curentul electric

[PDF] Protocole d 'information pour curetage évacuateur - CHUV

[PDF] eu whoiswho annuaire officiel de l 'union européenne curia

[PDF] radiotherapie et curietherapie - THE WEBSITE chu-besanconfr

[PDF] Anglais - wwwedugovonca