Extraction de lADN
L'extraction de l'ADN (acide désoxyribonucléique) est une technique qui isole de l'ADN à partir d'une cellule en quantité et en qualité suffisante pour
Protocole dextraction de lADN de poissons
PROTOCOLE D'EXTRACTION DE L'ADN DE POISSON. 180 µL. Tampon ATL. +20 ?L de protéinase K. Morceau de poisson 25 mg. 56°C. 200 ?L de tampon AL.
Protocole dextraction de lADNe et de lARNe à partir déchantillons
sont découpés et répartis dans 5 coupelles de pesée (env.7g). Cette matrice sert à l'analyse de virus ADN animaux (osHV1). ? 2ème lot : les tissus digestifs (
Etape 2 : Protocole dextraction et de purification dADN
Protocole. L'extraction et la purification de l'ADN sont réalisées avec le kit QIAamp DNA Mini (QIAGEN). Le kit peut être conservé à température ambiante
Technique dextraction dADN génomique de végétaux permettant l
26?/05?/2020 As we have to amplify by PCR a large fragment of DNA (> 3kpb) we set up a protocol described in this paper that allows us to extract from small ...
AQUADIEN™ KIT Ref.: 3578121 96 tests
VII - Protocol for water filtration and DNA extraction. VIII - Calculation of the analyzed VII - Protocole de filtration de l'eau et d'extraction d'ADN.
Extraction de lADN à partir des prélèvements de poissons
cela il faut l'extraire des tissus de poisson prélevés. Fiche technique 1 : Extrait du protocole d'extraction d'ADN animal du fournisseur (Kit.
Protocole de Labo I - Extraction de lADN
Le matériel organique à partir duquel l'extraction de l'ADN est effectuée doit être manié en suivant des protocoles adaptés au type de matériel. Si.
MD HEALTH
Le kit d'extraction ARN-ADN VIASURE fournit une méthode rapide et facile pour Protocol 2: Simultaneous isolation of pathogen DNA and RNA from all liquid ...
EXTRACTION dADN DU SOL Purification dADN du sol
07?/04?/2020 L'objectif est de purifier des ADN sales après extraction d'ADN de sol de boues ou de ... renouveler le protocole à partir de l'étape 8.
180 µL
Tampon ATL
+20 ʅde protéinase KMorceau de
poisson 25 mg56°C
200 ʅde
tampon AL200 ʅ
d'éthanol ( 96- 100%)Étape 1+ 2 : LYSE Cellulaire Étape 3
La chaleur et les détergents détruisent la
membrane et dénaturent les protéines (couplé au cassage mécanique du vortex) . Les protéines, y compris les nucléases, sont lysées par des enzymes digestives, telle que la protéinase K. protéinesTube annoté
15 sec
Transférer
colonne) . La fraction cellulaire non adsorbée (liée) à la résine est eliminéepar la centrifugation dans1min/ 6000 x g
(8000 rpm)Eluant (FNA)
Changer de tube collecteur 2 mL
Tube collecteur
de 2 mLsans capuchonPoubelle bio (solide)
500 ʅde
tampon AW1500 ʅde
tampon AW21min/ 6000 g
3 min /20 000g Eluant
(lavage) accroché a la résine (Les protéines et les cations divalents, les ions chargés positivement, y compris le magnésium, sont éliminés à l'aide de multiples lavages de tampons et d'étapes de centrifugation)Eluant
(lavage)Poubelle bio (solide)
Changer de tube collecteur 2 mL
(8000 rpm) (14000 rpm) Poubelle bio (solide)Changer de tube collecteur 1,5 mL
1min/ 6000 g
(8000 rpm)Eluat1
par compétition)200 ʅ
tampon AE1min/ 6000 gEluat2
200 ʅ
tampon AEChanger de tube
collecteur 1,5 mL (8000 rpm)CHRONOGRAMME
Étape 1+ 2 : LYSE Cellulaire
180 µL
Tampon ATL
+20 ʅde protéinase KVortex
Bain marie
56°C (1-3h)
Vortexetc
30 min
Décongeler poisson
Découpe
m= 25 mg10 min 60-180 min
15secVortex
200 ʅde tampon AL
Vortex
200 ʅéthanol
( 96-100%)Vortex
Etape 3 :
précipit°ADNTransfert sur
colonne1min / 800rpm
Changer tube
collecteur500 µL AW2
3 min/ 14000 rpm
3 min 3 min 3 min 6 min
Changer tube
collecteur (1,5 mL)200 µL AE
1min / RT
1 min/ 8000 rpm
3 min 3 min
Changer tube
collecteur (1,5 mL)200 µL AE
1min / RT
1 min/ 8000 rpm
Étape 7 : ELUTIONÉtape 5 +6 : LAVAGE
DE LA COLONNE
Étape 4 :
Fixation
ADN à la
résineChanger tube
collecteur500 µL AW1
1 min/ 8000 rpm
DangerNature
du danger VoieSituations exposantes
Décrire moment ou on manipule le
dangerExemple
dangereux = conséquences possible à éviter EPI EPCEchantillon
de poissonRisque
bio cutanéeDécoupe du poissonTransfert dans le tube (étape 1)
Lyse mécanique au vortex
Toucherle poisson à
main nueRenverser son tube
Ouverture du bouchon
étape de vortex
(projection)Blouse
GantsPoubelle déchets bio
solideEluants(FNA, wash(étape4/ 5/ 6)
Transfert du lysat sur la colonne
Transfert de la colonne sur nouveau tube
collecteurReste de washautour
de la colonne touche les muqueusesATL Risque
chimique Nocif irritant cutanéePipetage et Transfert des 180 µL Vortexer le lysatTransfert du lysat sur la colonne
Blouse
GantsPoubelle déchets bio
solideProtéinase KRisque
chimiqueIrritation
cutanéePipetage et Transfert des 20 µL Vortexer le lysatTransfert du lysat sur la colonne
Blouse
GantsPoubelle déchets bio
solideAL Risque
chimique Nocif irritant cutanéePipetage et Transfert des 200 µL Vortexer le lysatTransfert du lysat sur la colonne
Blouse
GantsPoubelle déchets bio
solideAW1cutanéePipetage et Transfert des 500 µLRetirer la colonne du tube collecteur
Evacuer le tube collecteur poubelle
déchets bioLa procédure de lyse idéale est souvent un compromis de techniques et doit être suffisamment
rigoureuse pour briser le matériau de départ complexe (par exemple, le tissu), mais suffisamment
Les procédures de lyse courantes sont les suivantes :cellulaireset des sels chaotropiquespuissants pour inactiver les enzymes intracellulaires. Après la lyse
ou par précipitation.Méthodes de purification
combinaisons de deux ou plusieurs des techniques suivantes : extraction/précipitation, chromatographie, centrifugation et séparation par affinité.La chromatographie d'affinité est une
technique de chromatographie qui permet de séparer un composé en utilisant des interactions biologiques entre un ligand spécifique (greffé sur une matrice macromoléculaire) et son substratquotesdbs_dbs1.pdfusesText_1[PDF] extraction d'adn bactérien
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