[PDF] Anti-A1 Lectin El reactivo del grupo sanguí

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Anti-A1

Tube and Slide Tests

Blood Grouping

GSIS03-I 30/05/19 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com

Anti-A1 Lectin

Qualitative test for determination of the A1 antigen on human red blood cells. IVD

Store 2 - 8ºC.

To be sold out of CE countries, not CE marked product.

PRINCIPLE OF THE METHOD

The reagent will cause agglutination (clumping) of test red cells, that carry the A1 antigen, after centrifugation. No agglutination generally indicates the absence of the

A1 antigen (see Limitations).

CLINICAL SIGNIFICANCE1

A1 antigen is a subgroup of A and was discovered in 1910. Anti-A1 is usually non- reactive at 37ºC, however examples reactive at 37ºC and predominantly IgM can cause in vivo red blood cell destruction. About 78% of group A people are A1 and

22% are A2, similar proportions apply among AB people.

REAGENTS

Spinreact Anti-A1 Lectin blood grouping reagent is prepared from an extract of Dolichos biflorus seeds, diluted with a sodium chloride solution containing bovine albumin. The reagent is supplied at optimal dilution for use with all recommended techniques stated below without the need for further dilution or addition. For lot reference number and expiry date see Vial Label.

PRECAUTIONS

1. The reagent is intended for in vitro diagnostic use only.

2. If a reagent vial is cracked or leaking, discard the contents immediately.

3. Do not use the reagent past the expiration date (see Vial Label).

4. Do not use the reagent if a precipitate is present.

5. Protective clothing should be worn when handling the reagents, such as

disposable gloves and a laboratory coat.

6. The reagent has been filtered through a 0.2 µm capsule to reduce the bio-

burden. Once a vial has been opened the contents should remain viable up until the expiry date as long as there is no marked turbidity, which can indicate reagent deterioration or contamination.

7. The reagent contains < 0.1% sodium azide. Sodium azide may be toxic if

ingested and may react with lead and copper plumbing to form explosive metal azides. On disposal flush away with large volumes of water.

8. No known tests can guarantee that products derived from human or animal

sources are free from infectious agents. Care must be taken in the use and disposal of each vial and its contents.

9. For information on disposal of the reagents and decontamination of a spillage

site see Material Safety Data Sheets, available on request. NOTES

1. It is recommended a positive control (ideally group A1B cells) and a negative

control (group A2 cells) be tested in parallel with each batch of tests. Tests must be considered invalid if controls do not show expected results.

2. In the Recommended Techniques one volume is approximately 40µl when

using the vial dropper provided.

3. The use of the reagent and the interpretation of results must be carried out by

properly trained and qualified personnel in accordance with the requirements of the country where the reagent is in use.

4. User must determine suitability of the reagent for use in other techniques.

STORAGE Do not freeze. Reagent vials should be stored at 2 - 8ºC on receipt. Prolonged storage at temperatures outside this range may result in accelerated loss of reagent reactivity. Reagent will remain stable for up to 7 days when subjected to temperatures not exceeding 30ºC.

MATERIAL REQUIRED

Applicator sticks.

Glass microscope slides.

Glass test tubes (10 x 75 mm or 12 x 75 mm).

Lighted Rh viewbox.

Phosphate Buffered Saline (PBS): NaCl 0.9%, pH 7.0 ± 0.2 at 22ºC ± 1ºC Positive (group A1B) and negative (group O) control red cells.

Test tube centrifuge.

Volumetric pipettes.

SAMPLES

Blood samples should be drawn aseptically into EDTA and tested within 48 hours. If EDTA is unavailable, samples drawn into ACD, CPD or CPDA-1 are acceptable and may be tested up to 35 days form the date of withdrawal. All blood samples should be washed at least twice with PBS before being tested.

PROCEDURE

A. Tube Technique

1. Prepare a 2-3% suspension of washed test red cells in PBS.

2. Place in a labelled test tube: 1 volume Spinreact Anti-A1 reagent and 1 volume

test red cell suspension.

3. Mix thoroughly and then centrifuge all the tubes for 20 seconds at 1000 rcf or

for a suitable alternative time and force.

4. Gently resuspend red cell button and read macroscopically for agglutination.

B. Slide Technique

1. Prepare a 35-45% suspension of test red cells in serum, plasma or PBS.

2. Place on a labelled microscope slide: 1 volume Spinreact Anti-A1 and 1

volume test red cell suspension.

3. Using a clean applicator stick, mix reagent and cells over an area of about

20 x 40 mm.

4. Slowly tilt the slide back and forth maintaining slide at room temperature.

5. Observe for macroscopic agglutination for period not to exceed 30 seconds

because after 30 seconds some group A2 and A2B cells may show weak agglutination.

6. Any weak reactions should be repeated by the tube technique.

INTERPRETATION OF TEST RESULTS

1. Positive: Agglutination of test red cells constitutes positive test result and

within the accepted limitations of the test procedure, indicates the presence of A1 antigen on the test red cell.

2. Negative: No agglutination of the test red cells constitutes negative test result and within the accepted limitations of the test procedure, indicates the

absence of A1 antigen on the test red cell.

3. Discrepancies:

forward group, further investigation is required.

Stability of the reactions 1. Tube tests must be read immediately after centrifugation. Delays may cause

dissociation of antigen-antibody complexes leading to false negative or weak positive reactions.

2. Slide tests should be completed within 30 seconds to ensure specificity and

to avoid the possibility a negative result may be incorrectly interpreted as positive due to drying of the reagent.

3. Caution should be exercised in the interpretation of results of tests

performed at temperatures other than those recommended.

LIMITATIONS

1. Anti-A1 may react with Tn-polyagglutinable or Cad positive cells.

2. Cord blood and specimens from infants cannot be accurately typed using

Anti-A1 Lectin since the A1 antigen is not fully developed on red blood cells until the age of six months.

3. Individuals older than six months should have their ABO blood-grouping

results confirmed by testing their serum or plasma against known group A1 and B cells before their ABO blood group can be confirmed.

4. Stored blood may give weaker reactions than fresh blood.

5. False positive or false negative results may also occur due to:

Contamination of test materials

Improper storage, cell concentration, incubation time or temperature

Improper or excessive centrifugation

Deviation from the recommended techniques

6. The user is responsible for the performance of the reagents by any methods

other than those mentioned in the Recommended Techniques.

7. Any deviations from the Recommended Techniques should be validated

prior to use.

PERFORMANCE CHARACTERISTICS

1. The reagent has been characterised by the procedures mentioned in the

Recommended Techniques.

2. Prior to release, each lot of Spinreact anti-A1 Lectin reagent is tested by the

Recommended Techniques against a panel of antigen-positive red cells to ensure suitable reactivity

3. The Quality Control of the reagents was performed using red cells that had

been washed with PBS prior to use.

4. The reagent complies with the recommendations contained in the latest

issue of the Guidelines for the UK Blood Transfusion Services.

BIBLIOGRAPHY

1. Widman FK. Technical Manual, 9

th Edition. American Association of Blood Banks,

Arlington, VA, 1985; Chapter 8

2. Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man, 6

th Edition. Blackwell Scientific, Oxford

1975; Chapter 2

3. Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8

th Edition. Blackwell Scientific,

Oxford 1987; Chapter 7

4. Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3

rd Edition. Montgomery Scientific, Miami

1985; Chapter 6

5. Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O.

Current Edition.

6. British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force.

Recommendations for evaluation, validation and implementation of new techniques for blood grouping, antibody screening and cross matching. Transfusion Medicine, 1995,

5, 145-150.

PACKAGING

Anti- A1 Lectin Ref.:1700010

5 mL

Anti-A1

Tests en Tubo y Porta

Grupos sanguíneos

GSIS03-E 30/05/19 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com

Anti-A1 Lectina

Determinación cualitativa del antígeno A1 en hematíes humanos. IVD

Conservar a 2 - 8ºC.

Para ser vendido fuera de los países CE, producto marcado no CE.

PRINCIPIO DEL MÉTODO

Los reactivos provocan la aglutinación directa de los hematíes que contengan el antígeno A1, después de la centrifugación. La ausencia de aglutinación generalmente es indicativo de la inexistencia del antígeno A1 (ver Limitaciones).

SIGNIFICADO CLÍNICO

El antígeno A1 es un subgrupo del grupo A y fue descubierto en 1910. Anti-A1 normalmente es no-reactivo a 37ºC, sin embargo ejemplos que reaccionan a 37ºC y predominantemente IgM, pueden causar destrucción de los hematíes in vivo. Aproximadamente el 78% de la población del grupo A es A1 y el 22% es A2. Para la gente perteneciente al grupo AB se aplican proporciones similares.

REACTIVOS

El reactivo del grupo sanguíneo Anti-A1 Lectina de Spinreact se prepara a partir de un extracto de semillas Dolichos biflorus, diluído con una solución de cloruro de sodio que contiene albúmina bovina. El reactivo es suministrado en la dilución óptima para su utilización en todas las técnicas aquí recomendadas sin necesidad de diluciones o adiciones suplementarias. Ver el lote y caducidad de cada referencia en la etiqueta del vial.

PRECAUCIONES

1. El reactivo es sólo para uso en diagnóstico in vitro.

2. Si el vial del reactivo está roto o agrietado, descartar inmediatamente su

contenido.

3. No utilizar reactivos caducados. (ver la etiqueta de vial).

4. No utilizar reactivos que presenten precipitados.

5. La manipulación del reactivo debe realizarse con la apropiada indumentaria de

protección, tales como guantes desechables y bata de laboratorio.

6. El reactivo ha sido filtrado a través de cápsulas de 0.2 µm para reducir la

carga biológica. Una vez abierto el vial, el contenido debe permanecer viable hasta la fecha de caducidad, siempre y cuando no haya una marcada turbidez la cual podría ser indicativa de deterioración o contaminación del reactivo.

7. El reactivo contiene < 0.1% de azida sódica. La azida sódica puede ser tóxica,

si se ingiere y puede reaccionar con cobre o plomo de las tuberías y formar azidas metálicas explosivas. En caso de eliminación del producto, hacerlo con abundante agua del grifo.

8. Ningún método puede garantizar que los productos derivados de fuentes

humanas o animales están libres de enfermedades infecciosas. Manipular y desechar con precaución los viales y su contenido.

9. Para mayor información sobre la eliminación del producto o descontaminación

en caso de derrame, ver las fichas de seguridad. NOTAS

1. Se recomienda la utilización de un control positivo (idealmente células del

grupo A1B) y un control negativo (células del grupo A2) para testar de forma paralela en cada lote de tests. Los tests deben considerarse inválidos si los controles no muestran los resultados esperados.

2. En las técnicas aquí recomendadas un volumen es aproximadamente 40µl

utilizando el gotero suministrado.

3. La utilización de los reactivos y la interpretación de los resultados deben

llevarse a cabo por personal cualificado y formado de acuerdo a los requisitos del país dónde los reactivos están siendo utilizados.

4. El usuario debe determinar la idoneidad de los reactivos para otras técnicas.

CONSERVACIÓN

No congelar. Los viales de reactivo deben ser conservados a 2-8ºC. Almacenamientos prolongados, a temperaturas fuera de este rango, pueden provocar una aceleración de la pérdida de reactividad. El reactivo seguirá siendo estable hasta 7 días si permanece a temperaturas que no excedan los 30ºC.

MATERIAL NECESARIO

Stick aplicador.

Portaobjetos de vidrio para el microscopio.

Tubos de vidrio (10 x 75 mm or 12 x 75 mm).

Visor de Rh.

Tampón fosfato salino (PBS): NaCl 0.9%, pH 7.0 ± 0.2 at 22ºC ± 1ºC Hematíes control Positivos (grupo A1B) y negativos (grupo O) c.

Centrífuga de tubos.

Pipetas volumétricas.

MUESTRAS

Sangre extraída con o sin anticoagulante. Si el tipado no se efectúa de inmediato, conservar las muestras a 2-8ªC. Las muestras de sangre en EDTA o citrato deben ser tipadas en 48 horas. Las muestras recogidas en ACD, CPD or CPDA-1 pueden ser testadas hasta 35 días desde su fecha de extracción. Todas las muestras de sangre deben ser lavadas con PBS al menos 2 veces antes de realizar el test.

PROCEDIMIENTO

A. Método en tubo

1. Preparar una suspensión de hematíes a testar lavados al 2-3% en PBS.

2. Añadir en un tubo identificado: 1 volumen de reactivo Anti- A1 y un volumen de

la suspensión de hematíes.

3. Mezclar minuciosamente y centrifugar los tubos durante 20 segundos a 1000

rcf (g) o a una fuerza y tiempo alternativos adecuados.

4. Resuspender cuidadosamente el botón celular y leer macroscópicamente

por aglutinación.

B. Método en Porta

1. Preparar una suspensión de hematíes a testar al 35-45% en suero, plasma

o PBS.

2. Depositar en un porta identificado: 1 volumen del reactivo Anti- A1 y 1

volumen de la suspensión de hematíes.

3. Utilizando un stik aplicador limpio, mezclar el reactivo y las células en una

área de unos 20 x 40 mm.

4. Lentamente inclinar el porta de atrás a delante manteniendo el porta a

temperatura ambiente.

5. Leer macroscópicamente durante un periodo que no exceda los 30

segundos ya que después de los 30 segundos algunas células de los grupos A2 y A2B pueden mostrar una débil aglutinación.

6. Cualquier reacción débil debe ser repetida con la técnica en tubo.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

1. Positivo: La aglutinación constituye un resultado positivo y dentro de las

limitaciones aceptadas para el procedimiento del test, indica la presencia del antígeno A1 en los hematíes testados.

2. Negativo: La ausencia de aglutinación de hematíes constituye un resultado

negativo y dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento de la técnica, indica la ausencia del antígeno A1 en los hematíes testados.

3. Discrepancias: Si no existe correlación entre los resultados obtenidos en el

grupo directo y el grupo inverso, es preciso realizar más pruebas

Estabilidad de las reacciones

1. Leer los tests realizados en tubos inmediatamente después de la

centrifugación. Los retrasos pueden suponer la disociación de los complejos antígeno-anticuerpo, causando falsos negativos o resultados positivos débiles.

2. Los tests en porta deben ser interpretados en 30 segundos a fin de

asegurar la especificidad y evitar la posibilidad de que un resultado negativo sea incorrectamente interpretado como positivo debido al secado del reactivo.

3. Los resultados, de tests realizados a otras temperaturas de las aquí

recomendadas, deben ser interpretados con cautela.

LIMITACIONES

1. Anti-A1 puede reaccionar con células Tn-poliaglutinables o Cad-positivas.

2. La sangre de los neonatos no puede ser tipada con precisión usando el

reactivo Anti-A1 Lectina ya que el antígeno A1 no está completamente desarrollado en los hematíes hasta los 6 meses de edad.

3. Antes de confirmar el grupo sanguíneo ABO de individuos mayores de 6

meses, deberían confirmarse los resultados de su grupaje sanguíneo ABO, testando su suero o plasma frente a células conocidas del grupo A1 y B.

4. Muestras conservadas pueden dar reacciones más débiles que muestras

frescas.

5. Puede también ocurrir falsos resultados positivos o negativos debido a:

Contaminación de los materiales del test.

Inadecuadas conservación, concentración celular, tiempo o temperatura de incubación.

Centrifugación inapropiada o excesiva.

Introducción de suero humano/globulinas gamma en el test.

6. El usuario es responsable del funcionamiento de los reactivos en cualquier

otro método distinto de los mencionados como técnicas aquí detalladas.

7. Cualquier desviación de las técnicas aquí recomendadas debería ser

validada antes de su utilización.

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

1. El reactivo ha sido caracterizado para todos los procedimientos aquí

mencionados.

2. Préviamente a su liberación, cada lote de Anti-A1 Lectina de Spinreact es

testado a través de las técnicas recomendadas frente a un panel de hematíes antígenos-positivo, a fin de asegurar la adecuada reactividad.

3. El Control de Calidad del reactivo se llevó a cabo utilizando hematíes

lavados en PBS, previa utilización.

4. El reactivo cumple las recomendaciones de la última versión de las Guías

para los Servicios de transfusión de sangre del Reino Unido.

BIBLIOGRAFÍA

1. Widman FK. Technical Manual, 9

th Edition. American Association of Blood Banks, Arlington,

VA, 1985; Chapter 8

2. Race RR, Sanger R. Blood Groups in Man, 6

th Edition. Blackwell Scientific, Oxford 1975;

Chapter 2

3. Mollison PL. Blood Transfusion in Clinical Medicine, 8

th Edition. Blackwell Scientific, Oxford

1987; Chapter 7

4. Issitt PD. Applied Blood Group Serology, 3

rd Edition. Montgomery Scientific, Miami 1985;

Chapter 6

5. Guidelines for the Blood Transfusion Service in the United Kingdom. H.M.S.O. Current

Edition.

6. British Committee for Standards in Haematology, Blood Transfusion Task Force.

Recommendations for evaluation, validation and implementation of new techniques for blood grouping, antibody screening and cross matching. Transfusion Medicine, 1995, 5, 145-150.

PRESENTACIÓN

Anti- A1 Lectina Ref.:1700010

5 mL

Anti-A1

Essais en Tube et sur Lame

Groupes sanguins

GSIS03-F 30/05/19 SPINREACT,S.A./S.A.U. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN

Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99 e-mail: spinreact@spinreact.com

Anti-A1 Lectine

1 dans les hématies humaines.

IVD

A conserver à 2-8ºC.

À vendre hors des pays de la CE, pas de produit marqué CE

PRINCIPE DE LA MÉTHODE

A1 après la centrifugation.

A1 (voir Limitations).

SIGNIFITION CLINIQUE

1 es un sous--A1

est normalement non-réactif à 37ºC, mais des exemples réagissant à 37ºC et de manière prédominante IgM peuvent causer la destruction des hématies in vivo. Environ 78 % de la population du groupe A est A1 et 22 % est A2. Pour les

RÉACTIFS

Le réactif du groupe sanguin Anti-A1

extrait de graines Dolichos biflorus, dilué dans une solution de chlorure de sodium Le réactif est fourni dans la dilution maximale afin qu puisse être utilisé avec toutes les techniques que nous recommandons, sans

Se reporter au lot et à la date de

péremption de chaque référence, inscrits

PRÉCAUTIONS

1. Les réactifs sont uniquement destinés à un usage diagnostic in vitro.

2. Si le flacon du réactif est cassé ou fêlé, jeter immédiatement son contenu.

3.

4. Ne pas utiliser de réactifs qui présentent des précipités.

5. La manipulation du réactif doit être réalisée avec un vêtement de protection

approprié : gants jetables et blouse de laboratoire.

6. Les réactifs ont été filtrés à travers des capsules de 0,2 µm pour réduire leur

charge biologique. Une fois que le flacon est ouvert, le contenu restera viable n'apparaisse, celle-ci pouvant indiquer la détérioration ou contamination du réactif.

7. Les réactifs contiennent < 0,1

laisser couler longte

8. Aucune méthode ne peut garantir que les produits provenant de sources

humaines ou animales sont exempts de maladies infectieuses. Manipuler et jeter avec précaution les flacons et leur contenu.

9. élimination du produit ou la

décontamination en cas de déversement, consulter les fiches de sécurité. NOTES

1. éalement des cellules du

groupe A1B) et un contrôle négatif (des cellules du groupe A2) pour tester Les essais doivent être considérés comme non valables si les contrôles ne présentent pas les résultats attendus.

2. Dans les techniques que nous recommandons, un volume équivaut à environ

40µl quand on utilise le compte-gouttes fourni.

3. réalisées

par un personnel qualifié et formé en accord avec les exigences en vigueur dans le pays où les réactifs sont utilisés.

4. déterminer si le réactif convient pour une utilisation avec

CONSERVATION

Ne pas congeler. Les flacons de réactif doivent être conservés à 2-8ºC. Des stockages prolongés, à des températures non comprises dans cette plage, peuvent accélérer la perte de réactivité. des températures ne dépassant pas les 30ºC.

MATERIAL NECESARIO

Stick applicateur

Lames porte-objets en verre pour le microscope.

Tubes en verre (10 x 75 mm ou 12 x 75 mm).

Viseur de Rh.

Tampon phosphate salin (PBS) : NaCl 0,9%, pH 7,0 ± 0,2 à 22ºC ± 1ºC. Hématies de contrôle positives (idéalement A1B) et négatives (groupe O) c.

Centrifugeuse de tubes.

Pipettes volumétriques.

ÉCHANTILLONS

Sang prélevé avec ou sans coagulant.

réalisé, conserver les échantillons à 2-8ªC. Les échantillons de sang avec de

Les échantillons

-1 peuvent être testés pendant 35 jours maximum à partir de la date de leur prélèvement. Tous les échantillons de sang

PROCÉDURE

A. Méthode en Tube

1. -3

2. Mettre dans un tube identifié : 1 volume de réactif Anti-A et 1 volume de la

3. Mélanger soigneusement et centrifuger les tubes pendant 20 secondes à

1000 rcf (g) ou à une force et un temps alternatifs adaptés.

4. Remettre en suspension soigneusement le bouton cellulaire, puis lire de

manière macroscopique par agglutination.

B. Méthode sur lame

1. Préparer une suspension -45 % dans du sérum, plasma ou

2. Déposer sur une lame identifiée : 1 volume de réactif Anti-A et 1 volume de la

3. En utilisant un stick applicateur propre, mélanger le réactif et les cellules sur

une zone de 20 X 40 mm. 4. température ambiante.

5. Lire par macroscopie pendant une période ne dépassant pas les 30 secondes

A2 et A2B peuvent

présenter une faible agglutination.

6. Toute réaction doit être répétée avec la technique du tube.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

1. ique,, indique la présence de l A1 dans les hématies testées.

2. Négatif : ;

, indique l 1 dans les hématies testées.

3. Discordances :

Stabilité des réactions

1. Lire les essais réalisés dans les tubes immédiatement après la

centrifugation. Les retards peuvent impliquer la dissociation des complexes antigène-anticorps, et produire de faux négatifs ou de faibles résultats positifs.

1. Les essais sur lame doivent être interprétés dans un intervalle de 2 minutes

interprété à tort comme positif, en raison du dessèchement du réactif.

2. Les résultats des essais réalisés à des températures distinctes de celles

recommandées doivent être interprétés avec précaution.

LIMITATIONS

1. -A1 peut réagir avec des cellules à polyagglutinabilité de type Tn ou

positives Cad.

2. Le sang des nouveaux nés ne peut être typé avec exactitude en utilisant le réactif

Anti-A1 1

3. Avant de conindividus âgés de plus de 6 mois, il

faudra confirmer les résultats de leur groupage sanguin ABO en testant leur sérum ou plasma par rapport aux cellules connues des groupes A1 et B.

4. Des échantillons conservés peuvent donner des réactions plus faibles que des

échantillons non frais.

5. Il peut également se produire de faux résultats positifs ou négatifs en raison de :

La conservation inadaptée, la concentration cellulaire, le temps ou la température

La centrifugation inappropriée ou excessive

6. méthode distincte de celles susmentionnées.

7. Tout écart par rapport aux techniques ici recommandées doit être validé avant

utilisation.

CARACTÉRISTIQUES DE LA METHODE

1. détaillées.

2. Avant leur Anti-A1 Lectine de Spinreact est testé

par le biais des techniques que nous recommandon antigènes-positif, afin de garantir la réactivité adaptée.

3. Le Contrôle de Qualité du réactif est réalisé en employant des hématies lavées

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