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Les bactéries se reproduisent par simple division en deux de leur cellule (scissiparité). Elles peuvent également échanger du matériel génétique (conjugaison) pour brasser leurs gènes.Quelles sont les étapes de la croissance bactérienne ?
Plusieurs phases se succ?nt :
phase de latence (phase 1) Au cours de cette phase d'adaptation, la cellule synthétise en particulier les enzymes nécessaires à la métabolisation du substrat. phase exponentielle de croissance (phase 2) phase de ralentissement (phase 3) phase stationnaire (phase 4)- La bactérie se multiplie par fission binaire : la bactérie grandit puis se divise en deux cellules filles séparées par un septum de division formé par la paroi cellulaire. Durant la division, l'ADN se duplique ainsi que les autres constituants.
1 L.D.C. - O.D.C. - A.D.H.53725
MILIEU DE DIFFERENCIATION / RECHERCHE DES DECARBOXYLASES ET DES DIHYDROLASESBACTERIENNES
1- APPLICATION
Le diagnostic différentiel des espèces appartenant aux familles des Enterobacteriaceae, des Pseudomonadaceae... est souvent
facilité par la recherche de la lysine-décarboxylase (L.D.C.), de l'ornithine-décarboxylase (O.D.C.) et de l'arginine-dihydrolase
(A.D.H.).2- PRINCIPELes bacilles à gram (-) aéro-anaérobies facultatifs à métabolisme fermentatif (Enterobacteriaceaeet Vibrionaceae) fermentent le glucose
ce qui entraîne une acidification du milieu et une coloration jaunedu milieu en présence de pourpre de bromocrésol (indicateur de
pH). A pH acide les décarboxylases et les dihydrolases présentent une activité maximale. Si les bactéries étudiées possèdent la
décarboxylase ou la dihydrolase appropriée, l'activité enzymatique sera alors mise en évidence par la formation de métabolites
aminés qui alcaliniseront le milieu, et entraîneront un nouveau changement de coloration du milieu en mauve.
Au contraire, les bacilles à gram (-) aérobies stricts à métabolisme oxydatif (Pseudomonas, Alteromonas, Flavobacterium,
Xanthomonas, Alcaligenes, Acinetobacter) dégradent les glucides par voie oxydative en ne produisant que peu de catabolites
acides : il s'ensuit que la coloration des trois milieux demeure pratiquement inchangée, mauve pâle à violet foncéaprès 24 à 48 heures d'incubation.3- PRESENTATIONMilieu prêt à l'emploi code 53725
- 1 tube de 5 ml de L.D.C. - 1 tube de 5 ml de O.D.C. - 1 tube de 5 ml de A.D.H.4- COMPOSITION (en g/l d'eau distillée)
pH final : 6,8 - 6,9 ± 0,2 (l'indicateur B.C.P. est jaune à pH 5,2 et violet à pH 6,8)5- CONSERVATION
Milieu prêt à l'emploi : à + 2 - 8°C.
La date de péremption et le numéro de lot sont indiqués sur le conditionnement.Milieu O.D.C. Milieu A.D.H. Milieu L.D.C.
L-ornithine (monochlorydrate) 5 - -
L-arginine (monochlorydrate) - 5 -
L-lysine (monochlorydrate) - - 5
Extrait de levure 3 3 3NaCl 5 5 5
Glucose 1 1 1
Pourpre de bromocrésol 0,042 0,042 0,042
26- UTILISATION
Matériel :
Matériel fourni : Milieux L.D.C. - O.D.C. - A.D.H. Matériel spécifique non fourni : Témoin d'opacité de 0,5 Mac Farland.Ensemencement :
Pour les bacilles à métabolisme fermentatif :A partir d'une culture pure et fraîche prélevée sur milieu gélosé nutritif ou trypto-caseine-soja, préparer une suspension en eau
physiologique d'une opacité équivalente au standard Mac Farland 0,5.Ensemencer chacun des trois tubes avec 2 gouttes de cette suspension. Les tubes sont alors presque pleins : la culture des bactéries
s'effectue dans des conditions d'anaérobiose convenable pour la recherche des décarboxylases et il n'est pas nécessaire de
recouvrir d'huile la surface du milieu.Pour les bacilles à métabolisme oxydatif :
Verser stérilement le contenu de chacun des trois tubes dans trois tubes stériles (170 x 17 mm).
Ensemencer chacun des milieux avec 5 gouttes d'une suspension préparée comme il est indiqué plus haut.
Incubation :
Incuber pendant 24 heures à 37°C. Prolonger de 24 heures si la croissance est insuffisante.Lecture :
Pour les bacilles à métabolisme fermentatif :La lecture est limitée à 4 jours.
Coloration jaunedu milieu (virage acide) : résultat négatif. Coloration violettedu milieu (virage alcalin) : résultat positif.+ : positif en 1 ou 2 jours, [+] : généralement positif en 1 ou 2 jours, (+): positif en 3 ou 4 jours.
- : négatif, [-] : généralement négatif, d : résultats variables selon les souches.Pour les bacilles à métabolisme oxydatif :
Il est possible de mettre en évidence une décarboxylase ou une dihydrolase chez ces bacilles en versant goutte à goutte une solution
de tampon pH 4 dans chacun des trois tubes de milieu. Agiter quelques secondes après l'addition de chaque goutte. Chaque tube
reçoit le même nombre de gouttes de tampon pH 4 jusqu'à ce que l'un des trois tubes se colore en jaune.
Ajouter alors dans les tubes restés alcalins (coloration mauve) trois gouttes supplémentaires de tampon pH 4. Agiter. L'absence de
virage acide correspond à la présence d'une décarboxylase ou d'une dihydrolase. ENTEROBACTERIACEAEL.D.C. O.D.C. A.D.H.ENTEROBACTERIACEAEL.D.C. O.D.C. A.D.H.E. coli[+] d -E. cloacae-++
Alkalescens dispard [-] - E. agglomerans - - -
S. dysenteriae---H. alvei++-
S. boydii---S. marcescens++-
S. flexneri---S. liquefaciens+ ou (+) + -
S. sonnei-+-S. rubidaea+ ou (+) - -
S. Typhi + - -
P. mirabilis-+-
S. Paratyphi A - + - ou (+)
P. morganii-+-
Autres
sérotypes de Salmonella+ + - ou (+)P. vulgaris (y compris S. arizonae)P. rettgeri - - -Citrobacter
-[-]-ProvidenciaEdwardsiella
+ + - ou (+)VIBRIONACEAEL.D.C. O.D.C. A.D.H.L. malonatica-+-V. cholerae
L. amalonatica- + (+) ou -VibrioNAG
Y. enterocolitica- [+] -V. parahaemolyticus
+d-Y. pseudotuberculosis---V. alginolyticus
Y. pestis
---V. anguillarum--+E. aerogenes++-A. hydrophila--[+]
K. pneumoniae+--A. salmonicida---
K. oxytoca+--P. shigelloïdes+++
K. ozaenaed--
K. rhinoscleromatis---
7- PERFORMANCES / CONTRÔLE QUALITE DU TEST
Aspect du milieu prêt à l'emploi : limpide violette.Les performances culturales du milieu L.D.C. - O.D.C. - A.D.H. sont contrôlées à l'aide des souches suivantes :
8- CONTRÔLE QUALITE DU FABRICANT
Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception
des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité
et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de
chaque lot est conservée par le fabricant.9- LIMITES D'UTILISATION
Si un résultat paraît positif (milieu violet) dans le cas des bacilles à métabolisme fermentatif, il faut s'assurer qu'il y a
effectivement eu croissance dans le tube (milieu trouble).Ce milieu n'est pas recommandé dans la recherche de la lysine décarboxylase pour les genres Klebsiella et Enterobacter.
En cas de difficulté d'interprétation, le tube suspect doit être comparé à un tube témoin. Toute trace de coloration violettedans le
milieu peut être assimilée à un résultat positif.Il est indispensable de procéder à partir de cultures pures et fraîches sous peine de faux résultats.
Il est nécessaire de faire des tests complémentaires pour une identification d'espèce de la souche isolée.
10-REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1.EWING W.H., DAVIS B.R. and EDWARDS P.R., Pub. Health. Lab., 1960, 18, 77-83.
2.FALKOW S., Amer. J. Clin., 1958, 29, 589-600
3.MOELLER V., Acta. Path. Microbiol. Scand., 1955, 36, 158-172.
4.RICHARD C., Ann. Inst. Pasteur, 1968, 114, 425-430.
3Pseudomonadaceae L.D.C. O.D.C. A.D.H.
P. aeruginosa
P. fluorescens
P. putida
P. pseudomallei
P. mallei
P. stutzeri
P. pseudoalcaligenes- - + faible
B. cepacia+d -
X. maltophilia+- -
P. acidovorans---
P. diminuta---
P. vesicularis---
Autres bactéries Gram (-) aérobies stricts L.D.C. O.D.C. A.D.H.Alteromonas putrefaciens-+-
Alcaligenes
Flavobacterium - - -
Xanthomonas
Acinetobacter lwoffi---
Acinetobacterglucidolytica- - - ou (+)
SOUCHES RÉSULTAT DE LA CULTURE EN 24 H à 37°CL.D.C. O.D.C. A.D.H.
Shigella sonnei- ATCC 25931 - + -
Pseudomonas aeruginosa- ATCC 27853 - - +
Klebsiella pneumoniae- ATCC 13883 + - -
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
12/2004
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
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