[PDF] Chromatographie en phase liquide haute pression HPLC High





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  • Quel est le principe de la chromatographie HPLC ?

    Le principe de la HPLC est, comme pour les autres variantes de chromatographie, d'utiliser les différences de propriétés physico-chimiques de différents composés pour les séparer. Un liquide, l'éluant, constitue la phase mobile, qui va entraîner plus ou moins facilement les molécules du mélange.
  • Comment lire un chromatogramme HPLC ?

    La quantification des composé analysés en HPLC se base sur les pics visibles sur le chromatogramme. Le paramètre utile pour la quantification est soit l'aire du pic, soit la hauteur du pic. De manière générale, la quantification est préférée en utilisant l'aire du pic plutôt que sa hauteur.
  • Quand utiliser l HPLC ?

    L'HPLC est l'une des techniques les plus employées dans les laboratoires d'analyses chimiques. Elle permet l'identification, la séparation et le dosage de composés chimiques dans un mélange. Sa grande précision permet la recherche de traces et il est possible de la coupler à un spectromètre de masse.
  • La CCM se déroule en trois étapes : préparation de la cuve, préparation de la plaque, et élution. Un cuve de chromatographie se compose de la cuve et d'un couvercle.
Chromatographie en phase liquide haute pression HPLC High

Version 09/2013 Page 1 sur 4

HPLC

Autres désignations

Chromatographie en phase liquide haute

pression

Anglais

LHHHHH

HPLC

High Performance (or High Pressure) Liquid

Chromatography

Applications médicales

Utilisation principale

onyme anglo-saxon, le seul utilisé) a de multiples applications dans de nombreux domaines, seule son utilisation en biologie nous intéressera, elle permet : - en biochimie, .

- en hématologie, la reconnaissance et quantification des hémoglobines anormales, et le diagnostic de la

drépanocytose, des alpha et béta thalassémies de type hétérozygote ou monozygote. - en toxicologie, la mise en évidence et le dosage des substances - en pharmacologie, le dosage de nombreux médicaments pour un suivi efficace du traitement. - en hydrologie, dans le domaine de la potabilité des eaux dest dosage des principaux anions : (biochimie, hématologie, toxicologie,).

Principe de fonctionnement

colonne. Les constituants du mélange, étant inégalement retenus par la phase fixe de la colonne, se déplacent à des

vitesses différentes. Ils sont élués, en sortie de colonne, les uns après les autres et donc séparés. Un détecteur couplé

délivrant la phase mobile sous des pressions de 20 à 150 bars), silice de différentes granulométries, un détecteur (UV-visible, réfractométrie, fluorimétrie, ou spectrom

Version 09/2013 Page 2 sur 4

Pour plus de clarté, voir le schéma ci-dessous.

Options et versions disponibles sur le marché

Selon les applications , les versions disponibles sur le marché sont

très nombreuses, avec des choix de modules variés tels les pompes dont la pression délivrée varie de 20 à 150 bars,

les injecteurs manuels ou automatiques (la majorité), les fours à température variable, les détecteurs

dizaine de types). Il faut ajouter un outil informatique avec son logiciel.

000 Euros à plus de 200 000 Euros.

Cependant on trouve sur le marché de 000

Euros.

Structures adaptées

Ces appareils sophistiqués et onéreux doivent être réservés à des structures importantes : hôpitaux, CHU,

grosses cliniques.

Consommables et accessoires à prévoir

Désignation Fourchette de prix

Les solvants utilisés soit seuls soit en mélanges sont très différents selon la technique et nous citerons quelques exemples parmi un choix très vaste :

Les colonnes de chromatographie ont une

Méthanol : 25 Euros/l

Ethanol : 55 Euros/l

Cyclohexane : 50 Euros/l

DMSO : 100 Euros/l

Acétonitrile : 75 Euros/L

Colonnes de silice de 400 à 600 Euros/pièce

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durée de vie limitée. Elles peuvent être alors vidées, nettoyées et rechargés avec le support ad hoc prévoir, telles des connecteurs divers, des

Entretien

des résultats. impérativement les préconisations du constructeur.

Maintenance

Niveau de formation requis

jours. Encore faut-il avoir

de bonnes bases pour en profiter. Dans le cas contraire, il existe des formations approfondies, sur une dizaine de

interprétation des chromatogrammes.

Maintenance

Il faut suivre à la lettre le cahier de maintenance donné par le fournisseur, avec la maintenance journalière,

hebdomadaire, mensuelle, avec visite du fournisseur au moins annuellement. Il faut de plus savoir changer les

Utilisation

Niveau de formation requis

Le personnel utilisateur (biologiste, ingénieur, technicien de laboratoire) doit avoir suivi une forma

habilitée. cteur. Port de gants obligatoire pour la protection du personnel. Pièce climatisée, courant stabilisé et ondulé 220 V (ou 110) 50 Hertz.

Acheminement

Volume 3 à plusieurs m3

Poids entaine.

Précautions particulières Mise en caisse, de préférence par le fournisseur.

Personnes ressources

^= Personnes ressources :

Version 09/2013 Page 4 sur 4

André BAYLE, Biologie Sans Frontières : mca.bayle@orange.fr Louis BERNY, Biologie Sans Frontières : louis.berny@sfr.fr Roger LATER, Biologie Sans Frontières : r.later@wanadoo.fr

E-mail de B.S.F. courrier@bsf.asso.fr

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REMARQUES

Cette fiche n'est mise à disposition qu'à titre informatif et ne constitue en aucun cas un mode d'emploi. Pour

obtenir des renseignements supplémentaires sur un modèle précis de matériel, adressez-vous directement au

fabricant concerné. Vous pouvez également contacter les personnes ressources dont les coordonnées sont

indiquées en fin de fiche t de BSF et ne peut aucunement être considéré comme reflétant le point de vue -infos matériel développée et validée par le groupe de travail " le matériel médical dans les actions de coopération internationale

Humatem. Cette série est en accès libre sur les sites www.humatem.org et www.biologiesansfrontieres.org.

Fiche réalisée dans ůĞĐĂĚƌĞĚƵƉƌŽŐƌĂŵŵĞĚ͛ĂĐƚŝŽŶ " Renforcement des outils de coopération et structuration du dialogue entre les acteurs du don de matériel médical :

ƉŽƵƌƵŶĞĂŵĠůŝŽƌĂƚŝŽŶĚĞƐƉƌĂƚŝƋƵĞƐĚĂŶƐůĞƐƉƌŽũĞƚƐĚ͛ĂƉƉƵŝăů͛ĠƋƵŝƉĞŵĞŶƚĚĞs structures de santé des pays en développement » - DCI-NSA/2009/205-811. Ce

programme est cofinancé par:quotesdbs_dbs2.pdfusesText_3
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