Purification de protéines : principes et méthodes
Purification de protéines : principes et méthodes. OBJECTIFS. - Connaître les différentes techniques de chromatographie pour la purification des protéines.
Polycopié du Cours: Techniques dextraction de purification et de
L'extraction d'une protéine à partir d'un tissu commence par la destruction de l'organisation cellulaire par des méthodes mécaniques chimiques ou par l'action
Chap. 5 : Purification des protéines
Biochimie des Protéines. Licence STS Biologie- 5.1 Les différentes étapes de la purification ... 5.3.3 Détecter la présence d'une protéine particulière.
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Le choix de la méthode de purification d'une protéine donnée dépendra des propriétés spécifiques de cette protéine (pH isoélectrique masse moléculaire
Techniques dextractions et de caractérisations dune protéine.
d'une culture de cellules 3 méthodes sont possibles: La solubilité peut-être utilisée pour purifier certaines protéines car certaines sont solubles.
Présentation PowerPoint
Purification des protéines recombinantes. 1. Détermination de la concentration en protéine. Les méthodes les plus utilisées sont l'absorption en UV et
Purification des protéines
très courant de doser la protéine à purifier après chaque étape. Il faut donc posséder une méthode de dosage. (enzymatique immunologique
Thuy Diem Trinh Lam Purification et caractérisation de la protéine
6.0 Méthode de dépistage de l'activité enzymatique . 7.0 Purification de protéines par chromatographie . ... Bergey's manual of systematic bacteriology.
1-Isolement des protéines.pdf
Isolation des protéines. A. Méthodes de solubilisation. - La première étape dans la purification des protéines: les dissoudre dans une phase liquide.
Biochimie des protéines et purification
l'acquisition de méthodes ou de savoir-faire applicables à condition que les éléments sur lesquels ils doivent s'exercer soient fournis à l'étudiant.
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La méthode la plus utilisée pour changer la concentration en sels d'une solution protéique est la dialyse Dans une dialyse les protéines dans une
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Techniques de purification des protéines Techniques fondamentales utilisées pour étudier les protéines 1 Introduction et généralités sur la chromatographie
[PDF] Chap 5 : Purification des protéines
5 : Purification des protéines 5 1 Les différentes étapes de la purification 5 2 Planification 5 3 Essai 5 3 1 Critères 5 3 2 Détecter la présence de
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Une des méthodes se prêtant le mieux à de gros volumes est la précipitation différentielle au sulfate d'ammonium C'est pourquoi on l'utilise très souvent
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Si la protéine est à extraire d'un tissus ou d'une culture de cellules 3 méthodes sont possibles: A partir du tissus entier: On choisit un matériel tissulaire
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Purification de protéines : principes et méthodes OBJECTIFS - Connaître les différentes techniques de chromatographie pour la purification des protéines
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L'EXTRACTION DES PROTEINES ALIMENTAIRES Méthodes propriétés et utilisations des concentrats et isolats protéïques Denis LORIENT
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Purification et caractérisation de la protéine codée par le gène bx/A de Streptomyces lil'idans Mémoire présenté pour 1 'obtention du grade de
Comment on purifie une protéine ?
Lorsque la température approche des 60°C, l'agitation atomique devient telle que les liaisons les plus faibles, comme les liaisons hydrogène, se rompent. La protéine se déroule et devient une longue chaîne d'acides aminés : c'est la dénaturation.Comment dénaturer une protéine ?
Les protéines ont un coefficient de sédimentation défini par leur taille, leur forme et leur densité. On peut donc les séparer par ultracentrifugation sur des coussins ou des gradients de sucrose ou d'autres substances.Comment séparer les protéines ?
On pourra utilement calculer : - Le taux global de purification, qui est égal à l'AS mesurée à la fin de toutes les étapes, divisée par celle de départ. Ici, le taux global de purification est égal à 7000 / 20 = 350.
Purification des protéines recombinantes
Dr. MEDOUKALI
République Algérienne Démocratique et PopulaireUniversité Frères MentouriConstantine 1
Faculté des sciences de la nature et de la vie
Département de Biochimie et de Biologie Moléculaire et CellulaireBiochimie Option Biochimie appliquée
Purification des protéines recombinantes
Pour suivre une purification,
1. Détermination de la concentration en protéine
deprotéines. interférences.Purification des protéines recombinantes
1. Détermination de la concentration en protéine
LaspectrophotométrieUV
-Mesureà280nm. deuxacidesaminésdanslaprotéine. -Mesureà205nm. de. cuvettesdequartztrèspropres.Purification des protéines recombinantes
1. Détermination de la concentration en protéine
La fluorimétrie
-On peut utiliser la fluorescence intrinsèque de la protéine en utilisant la fluorescence des tryptophanes avec
une excitation à 280 nm et une émission à 340 nm.Purification des protéines recombinantes
1. Détermination de la concentration en protéine
Lesméthodescolorimétriques
-Lecuivre dede1mg/ml). protéineenbleu.Lasensibilitéestdede100µg/ml.
Purification des protéines recombinantes
1. Détermination de la concentration en protéine
Lesméthodescolorimétriques
-Lescolorants (bleu). principalement,leurliaisonestpeuforte.Purification des protéines recombinantes
1. Détermination de la concentration en protéine
Lesméthodescolorimétriques
mercapéthanol)Purification des protéines recombinantes
2. Solubilisation des protéines
Extraction des protéines cellulaires
Pour aboutir à la purification d'une protéine, il faut tout d'abord préparer l'extrait qui contient cette protéine.
Si la protéine est intracellulaire, on doit passer par une étape de solubilisation : on casse les cellules et on
libère les protéines en solution. Pour casser les cellules, on a à notre disposition différentes méthodes : -choc osmotique-lyse des parois par méthode enzymatique, on utilise par exemple le lysosymepour dissoudre la paroi des
bactéries Gram+. -homogénéiseurpotter. -choc par pression (French Press) -ultrasons -billes de verre (pour les levures)Purification des protéines recombinantes
2. Solubilisation des protéines
Extraction des protéines cellulaires
Pour aboutir à la purification d'une protéine, il faut tout d'abord préparer l'extrait qui contient cette protéine.
Parfois les protéines sont membranaires et il est difficile de les solubiliser.On peut alors utiliser un détergent qui, par interactions hydrophobes, va solubiliser la protéine.
Mais il faut faire attention car un détergeant trop fort peut inactiver la protéine Après séparation par ultrafiltration ou centrifugation, on obtient un extrait clarifié.Purification des protéines recombinantes
2. Solubilisation des protéines
Extraction des protéines cellulaires
dessusde80C.Purification des protéines recombinantes
2. Solubilisation des protéines
filtrationsurfiltrede0,45µm.Purification des protéines recombinantes
2. Solubilisation des protéines
3. difficilevoirimpossible.Purification des protéines recombinantes
3. La concentration des protéines
Par précipitation
ionique(saltingout). lesmoléculesd'eau. estsuffisante,ilyaprécipitation.Purification des protéines recombinantes
3. La concentration des protéines
Par précipitation
solubilitédansl'eauà20C).Purification des protéines recombinantes
3. La concentration des protéines
Par filtration
Purification des protéines recombinantes
3. La concentration des protéines
Par filtration
Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
On peut utiliser deux grands types de méthodes pour séparer les protéines, la chromatographie Certaines méthodes seront utilisées pour purifier vérifier la pureté de la solution.Purification des protéines recombinantes
La chromatographie
4. La séparation des protéines
La chromatographie est une technique de séparation qui utilise une colonne contenant un supportqui possède plusieurs propriétés (Il existe différents types de supports : cellulose, sephadex.).
Ondistingueplusieursétapes
2.Chargedelasolutionprotéique
Purification des protéines recombinantes
utiliséestungelacrylamide. initialiséeetonobtientunpolymère. concentrationdel'acrylamide. enacrylamideet bisacrylamidededépart.4. La séparation des protéines
Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
Dialyse
dépourvudesels. plusimportants(30,50ou100kDa).Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
Filtrationsurgel
changerletampon.Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
Ultrafiltration
moléculairesde1à100kDa. taille.Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
Ultracentrifugation
analytique.Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
SipH SipH>pI,lamoléculeestnégative.
Onutiliselachromatographie.
support. Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
desgroupementsionisables. prochesenséquenced'acidesaminés. Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
fonctiondeleurtailleetdeleurcharge. Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
interagiraveclesprotéineshydrophobes. ((NH4)2SO4à1M). quisolubiliselesinteractionshydrophobes. Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
Siteactif
l'onchercheàpurifier. -Exempledechromatographieavecdestag: Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
Modificationposttraductionnelle
fixéesurunecolonne. sucredanslaphasemobile. Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
quotesdbs_dbs29.pdfusesText_35
SipH>pI,lamoléculeestnégative.
Onutiliselachromatographie.
support.Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
desgroupementsionisables. prochesenséquenced'acidesaminés.Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
fonctiondeleurtailleetdeleurcharge.Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
interagiraveclesprotéineshydrophobes. ((NH4)2SO4à1M). quisolubiliselesinteractionshydrophobes.Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
Siteactif
l'onchercheàpurifier. -Exempledechromatographieavecdestag:Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
Modificationposttraductionnelle
fixéesurunecolonne. sucredanslaphasemobile.Purification des protéines recombinantes
4. La séparation des protéines
Séparation selon la taille
Séparation selon la charge
Séparation selon la taille et la charge
Séparation par des colorants
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