FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
PREPARATION D'UNE LAME HISTOLOGIQUE -. OBJECTIFS SPECIFIQUES : ? Décrire les étapes de prise en charge d'un prélèvement histologique humain.
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique. Pour l'étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs
TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
diverses (préparation des échantillons) que l'on applique au matériel. étapes successives : fixation inclusion
MODULE 1 – Introduction Comment préparer un prélèvement de
Dans cette vidéo nous allons parler d'aspects plus techniques liés à l'histologie. Savez-?vous comment on obtient une lame histologique comme celle-?ci?
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
Le plus souvent le matériel histologique (= cellules contenues dans un tissu) est fixé
Aperçu des principales colorations histologiques et intérêt pour le
permettant d'obtenir des sections (coupes histologiques) de 3 à 5 microns d'épaisseur. http://www.dako.com/08066_12may10_webchapter15.pdf.
Préparation des tissus : information générale
Plateforme d'Histologie IRIC – Local 3440. Préparation des tissus : information générale. Tissus inclus dans la paraffine.
HISTOLOGIE
3.1 Préparation des échantillons pour la microscopie électronique à transmission (ou MET) Figure 1.2 Préparation des coupes histologiques en paraffine.
La technique Prélèvement
Il est indispensable de fixer un prélèvement avant analyse histologique Le bloc est coupé en fines tranches de 3 à 4 ?m. Technicien.
PRÉPARATIONS MICROSCOPIQUES
72100 Histologie: Cellules animales et division cellulaire Les bois coupe transversale
Chapitre II : Méthodes d’étude de la cellule TD N°2
Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus Une fois obtenu ce prélèvement doit immédiatement être immergé dans un
FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE PREPARATION D’UNE LAME
fixer à une molécule (antigène) de la coupe histologique Ces anticorps produits chez l’animal à partir de la protéine purifiée est couplé à: une enzyme (peroxydase) qui catalyse une réaction avec production de couleur un marqueur (fluorophore) le plus souvent fluorescent On parle alors d’immunofluorescence
Les colorations histologiques - Université Paris-Saclay
Le plus souvent le matériel histologique est fixé inclus coupé et coloré afin de pouvoir l’observer au microscope Le matériel peut être prélevé par biopsie ou provenir d’une pièce opératoire ou d’une autopsie La fixation a pour buts la conservation des structures et le durcissement des tissus Elle doit se faire
1 Méthodes d'études en histologie - editions-ellipsesfr
B La congélation permet la conservation de pièces histologique qui pourront servir plusieurs années après encore à des études moléculaires et enzymatiques C Une coupe et une coloration par l’hématéine éosine safran (HES) peuvent être réalisées sur un bloc de tissu fixé par le liquide de Bouin inclus en
FICHE DE TD D’HISTOLOGIE : TISSU OSSEUX & OSSIFICATION
Titre : Coupe Histologique transversale montrant un os compact (système Haversien) Coloration : Os déshydraté traité à l’encre de Chine Interprétation: Il s’agit d’une section transversale d’un os compact montrant des ostéones ou systèmes de canaux haversiens ainsi que des lamelles interstitielles
![Les colorations histologiques - Université Paris-Saclay Les colorations histologiques - Université Paris-Saclay](https://pdfprof.com/Listes/17/47824-17Lescolorationshistologiques.pdf.pdf.jpg)
Plateforme d'Histologie _ IRIC
Les colorations histologiques:
colorations de routine et colorations spécialesLES ETAPES
depuis le prélèvement jusqu'au bloc d'uneautopsie.Lafixationapourbutslaconservationdes
structuresetledurcissementdestissus. estlaparaffine.Commelaparaffineesthydrophobe,le
paraffinefondue(inclusion). estincluse.LES ETAPES
depuis le prélèvement jusqu'au blocCirculation du tissu
imprégnation à la paraffine ÉtapesRéactifsDurée (min)Température (ºC)1Fixateur200< 40
2Éthanol 50%2045
3Éthanol3045
4Éthanol4045
5Éthanol4045
6Éthanol5045
7Éthanol 100%5045
8Toluène4545
9Toluène4545
10Toluène4545
11Paraffine6060
12Paraffine6060
13Paraffine6060
LES ETAPES
depuis le bloc jusqu'à la lame colorée micronsd'épaisseur. lanuità40-45°Cou1Hmax60°C). -LaplupartdestissussonttransparentsLES ETAPES DE LA COLORATION
-Déparaffinage (toluène / xylène -éthanol) -Hydratation -Colorationà proprement dit (routine ou spéciale) -Déshydratation (éthanol)Éclaircissement (toluène / xylène)
xylène.Le pathologiste et le choix des colorations
serainstitué. unevisionglobaledelamorphologiedestissus (noyau,cytoplasmeetcollagène).Départements de
Pathologie
Ayez les bons outils de
travail !!!Seule une bonne
utilisation de contrôles adéquats permet d'obtenir des résultats explicables et reproductibles en histologie.Facteurs influant la distribution des colorants
dans les tissus et la qualité de la lame en général matérield'analyse.Les colorations de routine (topographiques)
H&E différentséléments. ReinPoumon
Les colorations de routine (topographiques)
H&E distincteLesNucleolesdevraientêtreviolacés.
Microscopic Quality Control of Hematoxylin and EosinPolymorphonucléaire
Plasmocytes
Muqueuse colique
Les colorations de routine (topographiques)
HPS Hématoxyline Phloxine Safran (milieu francophone) cytoplasmeJGH,HMR,SacréCoeurbienquefrancophones
demandentleHE.Colorant /
SolvantTemps
Xylène 5'00''
Xylène5'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
Lavage0'20''
Lavage1'00''
Hématoxyline0'55''
Lavage0'20''
Lavage0'20''
Bicarbonate
Sodium 0.5%0'20''
Lavage0'15''
Lavage3'30''
Éosine0'45''
ETOH 95%0'30''
ABS ETOH0'40''
ABS ETHO2'40''
Xylène2'00''
Xylène2'00''
Xylène2'00''Colorant /
SolvantTemps
Xylène 3'00''
Xylène3'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
Lavage0'10''
Lavage0'40''
Hématoxyline0'50''
Lavage0'25''
Bicarbonate
Sodium 0.5%0'12''
Lavage0'15''
Lavage3'00''
Phloxine0'15''
Lavage0'18''
ETOH 95%0'30''
ABS ETOH0'30''
ABS ETHO0'45''
Safran5'00''
ABS ETOH0'45''
ABS ETHO0'45''
ABS ETOH0'45''
Xylène0'45''
Xylène0'45''
Xylène1'00''
Les colorations spéciales
standard. etc).Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
systèmenerveuxcentral.Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Trichrome de Masson
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Cette méthode est très populaire. Utile dans l'étude de la pathologie du coeur (infarctus), foie (cirrhose ) , rein (fibrose glomérulaire) La plupart des recettes colore en rouge la kératine et les fibres musculaires, en bleu ou vert le collagène et l'os, en rouge-clair ou rose les cytoplasmes, et en noir les noyaux de cellules.Résultats:
Noyaux, chromatine et nucléole..............bleu foncé à noir Globules rouges..............................................................rougeArtère
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Trichrome de Masson
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Cette méthode est très populaire. Utile dans l'étude de la pathologie du coeur (infarctus), foie (cirrhose ) , rein (fibrose glomérulaire) La plupart des recettes colore en rouge la kératine et les fibres musculaires, en bleu ou vert le collagène et l'os, en rouge-clair ou rose les cytoplasmes, et en noir les noyaux de cellules.Résultats:
Noyaux, chromatine et nucléole..............bleu foncé à noir Globules rouges..............................................................rougeDéparaffiner et réhydrater
Mordancer au Bouin 1H 56
CRefroidir et laver 20mn
Hematox. Weigert filtrée
LaverBiebrich scarlet fuchsine acide 2mn
LaverAc. Phosphomolibdique-phosphotungstique 10mn
Bleu aniline 30
-40 secRincer
Acide acétique 1%
Déshydrater, monter
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Elle est parfois demandée en pathologie cardiovasculaire.MOVATT
Noyaux ...................................................................bleu à noir Cytoplasme .....................................................................rouge Collagène et fibres réticulaires-....................jaune verdatre Fibrine ...............................................................rouge intense Mucine et substance de fond..........................bleu limette OsLes colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Elle est parfois demandée en pathologie cardiovasculaire.MOVATT
Noyaux ...................................................................bleu à noir Cytoplasme .....................................................................rouge Collagène et fibres réticulaires.....................jaune verdâtre Fibrine ...............................................................rouge intense Mucine et substance de fond..........................bleu limetteDéparaffiner et réhydrater
Bleu Alcian 15mn
Laver 5mn
Alcool alcalin 1H
Laver 15mn et rincer
Hématoxyline 12
-15 mn Rincer et différencier dans chlorure de fer 2% 30sThiosulfate sodium 1mn
LaverCrocéine scarlet -ac. Fuchsine 2mn
Rincer à l'eau distillée pls fois
Rincer Acide acétique 0.5%
5% Ac. Phosphotungstique aqueux 2X 5mn
Rincer Acide acétique 0.5%
Rincer ds 3 bains ETOH abs.
Safran 10mn
Déshydrater, monter
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Coloration de Verhoeff
Elle met en évidence le réseau de fibres
élastiques.
Cette coloration est utile dans le cadre des diagnostics de lésions dégénératives congénitales ou acquises (vergetures, élastose solaire), de vasculite (peut être demandée pour mettre en évidence la limitante élastique des vaisseaux), d'artérite temporale. Cette méthode est basée sur la coloration des fibres élastiques par l'hématéine combinée à l'iode et au chlorure ferrique.Résultats:
Noyaux......................................................................gris à noir Fibres élastiques..............................................................noir Cytoplasme......................................selon contre-coloration Globules rouges.............................. selon contre-coloration Collagène..........................................selon contre-coloration PeauLes colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Coloration de Verhoeff
Elle met en évidence le réseau de fibres
élastiques.
Cette coloration est utile dans le cadre des diagnostics de lésions dégénératives congénitales ou acquises (vergetures, élastose solaire), de vasculite (peut être demandée pour mettre en évidence la limitante élastique des vaisseaux), d'artérite temporale. Cette méthode est basée sur la coloration des fibres élastiques par l'hématéine combinée à l'iode et au chlorure ferrique.Résultats:
Noyaux......................................................................gris à noir Fibres élastiques................................................................noir Cytoplasme......................................selon contre-coloration Globules rouges.............................. selon contre-coloration Collagène..........................................selon contre-colorationDéparaffiner et réhydrater
Hématéine Verhoeff 30mn coupesnoir
Rincer à l'eau distillée pls fois
Différencier au chlorure ferrique 2%
Laver rapidement
ETOH 95%
Rincer
Colorer au Van Gieson ou Éosine
Déshydrater, monter
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
La Réticuline
(exemple:architecturefolliculaire). constituantlesquelette),lamoelleosseuse (myélofibrose).Résultats
quotesdbs_dbs32.pdfusesText_38[PDF] schéma de la peau détaillé
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