Introduction : 1- Définition : 2- Principe physique du microscope
C'est la microscopie à fluorescence. Le microscope photonique utilisent un flux ondulatoire de particules (FP) non chargées les photons
TP 1 Optique - Imagerie - Microscopie photonique
Une application pratique et manipulation. I La microscopie photonique : •. Définition : Microscope utilisant comme source lumineuse la lumière blanche.
1. Microscope photonique
Aujourd'hui la microscopie est divisée en deux grands groupes différents par la nature de la particule élémentaire impliquée : le microscope optique ou
Fiche 1 : Les méthodes dobservation
l'utilisation des microscopes. - Les microscopes optiques (photoniques) permettent l'observation des cellules mortes ou vivantes. Le microscope le plus
Microscopie Photonique
Sur un microscope optique le grossissement maximum utilisé est d'environ 1200. Page 74. Grandissement / Grossissement. • On parle de grossissement pour une
I. ETUDE MORPHOLOGIQUE
Microscopie photonique ou optique Résolution : Distance minimale entre deux points ... Définition : conservation du prélèvement dans.
Chapitre 1- Les méthodes détude en biologie cellulaire
- Les microscopes optiques (photoniques) permettent l'observation des cellules mortes ou vivantes. Le microscope le plus courant utilise la lumière visible. Il.
Observation et dénombrement du phytoplancton marin par
26 oct. 2015 Observation et dénombrement du phytoplancton marin par microscopie optique photonique ... 4 Termes et définitions .
Anatomie et fonctionnement du microscope optique}}
L'objectif de ce cours est de fournir les bases de la microscopie photonique en s'appuyant sur quelques connaissances simples en optique.
CONNAITRE LE MICROSCOPE
Le microscope est un instrument d'optique qui permet de grossir des objets jusqu'à 1500 fois. Néanmoins on ne peut observer que des objets très minces qui.
Microscope objectives - Photoniques
microscope objective as a fundamen-tal component in the laboratory is an optical component that demands continuous R&D efforts motivated by the development of new imaging and microscopy techniques as well as the specific end-users’ requirements REFERENCES [1]Wikipedia Albert Van Helden; Sven Dupré; Rob van Gent (2010)
Optics and photonics — Operation microscopes
Optics and photonics — Operation microscopes — Part 1: Requirements and test methods 1 Scope This document specifies requirements and refers to test methods for operation microscopes used for observation during surgical operation and treatment of patients It does not apply to accessories e g photographic cameras
Definitions of the Parts of the Microscope - ualbertaca
Some microscopes have an annular condenser which is a plate under the stage that can be rotated The plate consists of holes of different diameter As the plate is rotated the different holes click into place blocking out different amounts of light Other microscopes have an iris diaphragm with a lever that opens and closes the
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This is a German standard that has been adopted internationally as an optical standard used in most quality microscopes The focal tube length of a DIN standard microscope objective is 160mm A typical DIN standard microscope objective lens has 20 1mm diameter threads
What is a basic introduction to microscopy?
Introduction to Microscopy, its different types in optical and electron based microscopy. Also presentation involved working principles of Optical, SEM & TEM microscope with their components working description. All microscope deeply discussed about the contrast, application, advantages & disadvantages.
What is the meaning of the word microscope?
The word microscope is a originated from two Greek words – micros : meaning small, skopos: meaning watcher thus, microscope is a tool, which enables us to view very small objects, by magnifying the image of the small object.
What is the focal tube length of a Din microscope objective?
The focal tube length of a DIN standard microscope objective is 160mm. A typical DIN standard microscope objective lens has 20.1mm diameter threads. RMS ("Royal Microscope Society"), which had a longer tube length 170mm and 20.32mm thread. Most DIN optics are interchangeable.
What is a microscopic object?
Objects are said to be microscopic when they are too small to be seen with the unaided eye—they need to be magnified (enlarged) for the human eye to be able to see them. This includes human cells and many other types of cells that you will be studying in this class.
Past day
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TP 1Optique - Imagerie - Microscopie photonique
Présentation générale des outils...
Documentation sur les colorants...
Objectif de la séance : connaître les principes de la microscopie et des champs proches.A connaître
Le microscope photonique.
Le fond noir
Le contraste de phase et sa variante à contraste interdifférentielLe microscope inversé et ses applications
Le microscope à fluorescence.(lumière à UV)Le microscope confocal
Les colorants
Une application pratique et manipulation.
I La microscopie photonique
· Définition : Microscope utilisant comme source lumineuse la lumière blanche · Principe : Source lumineuse: ampoule autrefois à filament dont l"émission dépend de latempérature de chauffage (lumière jaune aux faibles intensités), actuellement elles
comportent un gaz qui donne une lumière blanche quelle que soit la température. Il existe un diaphragme associé. Condenseur: système optique concentrant le faisceau lumineux sur l"objet Objet: doit être transparent pour pouvoir être analyse en lumière transmise Objectif: Système optique d"analyse de l"objet ayant un grandissement, une ouverturenumérique et un chromatisme. L"ouverture numérique d"un objectif traduit sa capacité à
enregistrer les rayons les plus extrêmes issus d"un point de l"objet. Sa valeur est fonction de l"indice de réfraction du milieu traverse et de l"angle:Ouverture numérique : ON = n ( sin.alpha )
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A savoir :
· Dans l"air n=1 et le demi angle maximum est 72°: ON=0,95 · Dans l"huile à immersion n=1,515 et le demi angle est 67,5 (courte focale et diamètre réduit de la lentille): ON=1,4Tableau des distances de travail des objectifs:
(Valeurs approchées pour un tube de 160 mm)OBJECTIF FOCALE Distance de Travail *
4 X 40 mm 27 mm 30 mm
10 X 16 mm 6 mm
40 X 4 mm 0.5 mm
60 X 2.6 mm 0.15 mm **
100 X 1.6 mm 0.35 mm 0.12 mm
* Sources Olympus et Nachet ** Une lamelle couvre objet mesure déjà 0.16 à 0.17 mm d'épaisseur !Applications Anatomie pathologique. Bactériologie. Cytogénétique. Hématologie. Parasitologie
Virologie.
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Sur la monture des objectifs on peut rencontrer les symboles suivantsLa marque du fabriquant.
Nachet Zeiss Leitz etc
· Le Grossissement en nombre de fois Ex : 100 x * · L'ON (Ouverture Numérique) ou ouv (ouverture) o NA (Numerical Aperture) o A ou Ap (Aperture) · La longueur de tube en mmm 160 170 210 ou bien le symbole infini.· Type d'immersion
o I,H H oel oil dans l'huile o Gly dans la glycérine o W eau dans l'eau· Épaisseur de lamelle
o 0 ou 0,17 ou 2· Correction géométrique
o Plan Pl Objectifs plans· Correction chromatique
o Achromatique o Semi apochromatique Semi-apo Fl Fluo Néofluar Fluotar Fluo-plan Pl-Fl Ultrafluar o Apochromatique Apo et Apochromat Planapo Apoplan· Objectifs spéciaux
o GF objectif à grand champ o Iris objectif à diaphragme o Cor Korr o Pol P objectif pour polarisation o Ph Phaco objectif de phase o Epi M objectif pour épiscopieEpiplan objectif plan pour épiscopie
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II Le fond noir
A compléter pendant la séance.
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IV Le microscope inversé.
· Définition Microscope optique adapté a la culture de cellule.· Principe Les composants sont les mêmes que pour le microscope ordinaire mais ceux-ci sont
disposes de haut en bas à partir de la source lumineuse à l"inverse de l"habitude d"ou le nom du microscope.· Application : Culture de cellule in vitro
Quels sont les objectifs du microscope du laboratoire ?BTSA 1 M55
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V Le microscope à fluorescence
· Définition Microscope dont la source lumineuse est une lampe émettant un rayonnement très intense
(il existe plusieurs intensités de sources lumineuse) sélectif qui est sélectionné par un
filtre dit d"excitation· Principe
Source lumineuse ultraviolette adaptée sur un microscope conventionnel.· Schéma
Certaines substances ont la propriété, lorsqu"elles sont éclairées par des lumières de courte
longueur d"onde, d"émettre une lumière de longueur d"onde plus élevée. C"est la fluorescence. En
microscopie, cette propriété est utilisée pour visualiser certaines structures. En général, les
radiations ultra violettes ou bleues sont utilisées pour l"excitation et l"observation se fait dans le
visible. Certains objets sont naturellement fluorescents: on parle de fluorescence primaire oud"autofluorescence. D"autres objets peuvent acquérir une fluorescence par imprégnation de
colorants fluorescents appelés fluorochromes: c"est la fluorescence secondaire. Les pigments chlorophylliens font partie des substances autofluorescentes. Ils fournissent desobservations faciles et spectaculaires en passant d"une couleur verte en lumière naturelle à une
couleur rouge en fluorescence.BTSA 1 M55
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Une application très importante en biologie : Immunofluorescence: On utilise des fluorochromes marquant soit des anticorps ( immunochimie ) soit dessondes nucléiques ( hybridation moléculaires ) Fluorescence spontanée: lipides, pigments (
vitamine A = fluorescence verte ) Fluorescence induite : Acide phosphorique et vitamine A = fluorescence rouge Fluorescence induite par le formol des amines biogènes par constitution d"un cycle supplémentaire.Immunofluorescence
· Définition : utilisation d"anticorps marqués par un fluorochrome dont le produit est stable et peut être stocké· Amplification:
Deux couches
, trois couches· Applications
Immunofluorescence sur coupes de tissus congelés: microscope à fluorescence utilisant une lampe à vapeurs de mercure Mise en évidence des dépôts extracellulaires: Ig ( immunoglobulines ), C ( complément ), Fibrine, amylose, dépôts de chaînes légères d"immunoglobulines Etude des constituants de la matrice extracellulaire Des applications biomédicales en néphrologie et en dermatologieBTSA 1 M55
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La lampe à vapeur de mercure? cf diaporama
Quelques fluorochromes classés selon leur longueur d"onde d"émission · DAPI ( ADN ) ---------------------------------------------- · AMCA ( proteines ) ------------------------------------ ---- · Hoechst 33258 ( ADN ) ----------------------------- -- ---· FITC / DTAF ( proteines )
· Cy 3
· B-Phycoérythrine (proteines )
· R-Phycoérythrine ( proteines )
· XRITC ( proteines )
· Lissamine Rhod-B
· Texas Red (proteines )
· R-Phycocyanine (proteines )
· Quantum Red
· Cy 5 ( proteines )
Autres
Iodure de propidium (ADN )
Bromure d"ethidium ( ADN )
Quinacrine
Rhodamine
Bleu Evans
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VI Le microscope confocal :
A compléter en recherche personnelle.
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VII Les colorants. Pour information et support bibliographique "Matière colorée mise en contact avec un support se fixe sur ce support de façon durable en lui communiquant de la couleur" o Le chromophore est le support de la couleur et l"auxochrome est le site de fixationFamilles chimiques des colorants
Nitrés
Monoazoiques
Diazoiques
Sels de Tetrazolium
Triphenylméthane
Xanthéne
Quinoneimine
Polycycliques
Naturels
Fluorochromes
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Principe
Les molécules colorées peuvent se fixer sur les tissus soit par simple affinité tinctoriale ( colorations signalétiques ) , soit à la suite d"une réaction chimique ( colorations histochimiques et histoenzymologiques )· Cibles des colorants
· Nucléaire
o Bleu : Hemalun , Hematoxyline o Rouge : Kernechtrot ( rouge nucléaire ) o Vert : Vert de methyle· Cytoplasmique : Eosine
· Tissu conjonctif :
Safran Vert lumière Bleu d"aniline Rouge sirius· Tissu élastique : Orcéine
· Démasquage des cibles : puis dépôt d"argentRéticuline
Granules cytoplasmiques : grimelius
· Identification de composants chimiques
Histochimie
Histoenzymologie
· Immunochimie
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