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Principes et utilisations de base du microscope

Son fonctionnement est le suivant: l'objectif 'Ob' donne de l'objet une image réelle agrandie Cette image intermédiaire est reprise par l'oculaire 'Oc' qui en donne une image virtuelle à l'infini finalement observée par l'œil Le grossissement global du microscope est le produit du grossissement de l'oculaire par le grandissement de l



Le microscope optique : cours - Prof Innovant

- Une technique simple pour mesurer un angle optique ? est de fabriquer un "oeil fictif" constitué d'une lentille convergente et d'un écran placé à la distance focale de cette même lentille: - Par une méthode de votre choix placer l'objet dans le foyer objet de la première lentille



LE MICROSCOPE OPTIQUE

moyen simple et pratique de régler l'éclairage du microscope défini par August Köhler un spécialiste allemand des microscopes Cette méthode présente plusieurs avantages pratiques : 1 Reproductibilité des conditions d'observation; 2 Répartition homogène de la lumière dans le champ; 3 Exploitation maximale de l'O N de l'objectif; 4



Fiche méthode : Utilisation d’un microscope optique

Fiche méthode : Utilisation d’un microscope optique Un microscope pemet d’obseve les objets invisibles à l’œil nu (micoscopiues) Etre autonome au petit objectif Savoir passer du petit au moyen objectif sans demander l’autorisation Interdiction de passer au gros objectif Niveau Objectifs attendus



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2-1 La microscopie optique Le microscope optique permet d’observer les cellules qui sont généralement des corpuscules incolores et translucides L’unité de mesure communément utilisée en microscopie est le micron ou le micromètre = 10-6m le nanomètre 1 nm = 10-9m = 10 Angströms 2-1-1 Description d’un microscope

Qu'est-ce que le microscope optique ?

Le microscope optique permet d’observer au niveau cellulaire des êtres vivants ou des échantillons fixes (coupes de tissus). Il est utilisé en science des matériaux, ainsi qu’en géologie. Les tissus sont colorés afin de les voir clairement. Les colorations de Gram sont utilisées pour déterminer si les bactéries ont été manipulées correctement.

Comment fonctionne le microscope électronique ?

L’objet est bombardé par un faisceau d’électrons. Le microscope électronique utilise des lentilles électrostatiques et des lentilles magnétiques pour former l’image. Le ME révèle l’ultrastructure des cellules eucaryotes et permet une observation plus poussée de la structure procaryote.

Quels sont les avantages d’un microscope optique ?

Elle consiste à grossir l’image optique d’un objet de petites dimensions en utilisant un microscope optique. Cet appareil utilise des lentilles optiques pour former l’image en contrôlant le faisceau lumineux et pour illuminer l’échantillon. Elle permet l’observation de la structure globale des cellules eucaryotes.

Comment utiliser un microscope ?

6ème Découvrir l’utilisation du microscope et connaître le nom des différentes parties. Régler correctement la luminosité, savoir passer du petit (rouge) au moyen objectif (jaune) avec l’autorisation du professeur. Interdiction de passer au gros objectif (bleu). Interdiction de passer au gros objectif.

1. Microscope photonique

Chapitre. 1Imagerie cellulaire

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L"étude de la structure et du fonctionnement de la cellule a nécessité la mise au pointd"outils et de techniques appropriés.Cen"est qu"au XII siècle, avec l"intervention dumicroscope, que lescellulessont devenues visibles. Par la suite, pendant plusieurs années,toutes nos connaissances sur les cellules ont été découvertes grâce à cet instrument.Lamicroscopie est un ensemble de techniques permettant d'obtenir une image des structuresbiologiques. Le principe est dans tous les cas le même : une onde est envoyée sur lapréparation ou émise par la préparation. Cette onde est captée par un objectif qui la concentreet passe par un oculaire qui crée une image observable. Cetteimage est soit observée à l'œilnu, soit photographiée,soit enregistrée par caméraet stocké sur ordinateur pour retraitement.Aujourd'hui la microscopie est divisée en deux grands groupes, différents par la nature de laparticule élémentaire impliquée :lemicroscope optique ou photonique etle microscopeélectronique.1. Microscope photoniqueUn certain nombre de microscopes ayant chacun des montages optiques spéciaux ont étémisau point. Ces dispositifs permettent d"augmenter considérablement la qualité desobservations.Parmi ces microscopes:1.1.Microscope optique en lumière transmiseLemicroscope optique en lumière transmise permet d"étudier les cellules fixées etcolorées. Un objet éclairé en lumière transmise est examiné à traversun système optiquecomposéd"un premier système de lentilles, l"objectif, de très courte focale, et d"un deuxièmesystème de lentilles, l"oculaire, qui donne une image virtuelle de cettedernière. L"imagefinale se forme au niveau de l"œil ou d"un appareil photographique associé au microscope(Figure. 1).La puissance d"un microscope est définie par le produit du grandissement del"objectif par la puissance de l"oculaire. Son grandissement étant au maximum de 1000. Cettenotion importante doit être complétée par celle de pouvoir séparateur, qui détermine la qualitéoptique réelle de l"appareil. Celui-ci est défini comme la distance minimale séparant deuxpointsduplan objetdont lemicroscopedonnedes imagesdistinctes.Dans les meilleuresconditions, le pouvoir séparateur du microscope photonique atteint sa limite théorique, qui estcomprise entre 0,2 et 0,3?m.Il est possible de l"employer:

Chapitre. 1Imagerie cellulaire

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iEn lumière réfléchie: l"éclairage est vertical, éclairant l"objet de haut en bas; lalumière réfléchie par l"objet est transmise à l"œil de l"observateur par le système optique dumicroscope.iEn fond noir: l"éclairage est latéral, le fond de la préparation est obscur; seules lesparticules qui diffractent les rayons lumineux en direction de l"oculaire s"illuminent. Lesrayons lumineux n"atteignent pas l"objectif lorsque la préparation est dépourvue de structure.Lorsque la préparation contient des particules, la lumière est diffractée et certains rayonstraversent le système optique du microscope.

Figure.1:Principe de fonctionnement dumicroscope en lumière transmise(Jean-Claude et Roland,2005).1.2.Microscope polarisantLe microscopepolarisant est un microscope photonique ordinaire pourvu de deuxfiltres: l"un est placé entre la lumière et l"objet, l"autre dans l"oculaire. Les filtres étantcroisés, la lumière ne parvient pas à l"œil de l"observateur: mais lorsque les particules oudesstructures sont anisotropes, elles apparaissent brillantes et se détachent sur le fond sombre. Cemicroscope est surtout utilisé en cristallographie. Dans l"étude des cellules, il donne desimages de toutes structures dont les molécules sont orientées,tels les fuseaux de division

Chapitre. 1Imagerie cellulaire

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(microtubule s) , les pa ro is des cel lules végéta les (ce llulose ), l es fibres musculaires striées(myofibrilles de myosine et d"actine)...(Figure. 2)

Figure.2:Principe de fonctionnement dumicroscope polarisant(Caronet al.,2007).1.3.Microscope à contraste de phaseSon principe repose sur l"amplification des contrastes naturels en mettant à profit lesdifférences d"indices de réfraction entre les organites ; différences qu"il transformeendifférences d"intensités de lumières qui sont alors visibles à l"œil. La base de cettetransformation repose sur les interactions entre les ondes lumineuses : on parled"interférences.Ce type de microscope est largement utilisé pour l"observation decellulesvivantes, en culture(Figure. 3).

Chapitre. 1Imagerie cellulaire

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Figure.3:Comparaison des images obtenues avecun microscope photonique ordinaire (a) etunmicroscope à contrastede phase(b). Coupes transversales de tubules rénal de mammifères(Jean-Claude et Roland,2005).1.4.Microscope à fluorescenceLemicroscope à fluorescencepermet de voir les molécules qui émettent des photons delongueur d"onde déterminée après excitation par une source lumineuse.Ce microscope estsemblable à un microscope optiqueordinaire, en dehors du fait que la lumière incidente passeà travers deux jeux de filtres. Le premier filtrela lumière avant qu"elle n"atteignel"échantillon, ne laissant passer que les longueurs d"onde qui excitent le colorant fluorescentparticulier utilisé. Le second bloque cette lumière et ne laisse passer que les longueursd"ondes émises lors de la fluorescence du colorant. Les objets colorés apparaissent en couleurvive sur fond sombre(Figure. 4).1.5. Microscope confocal à balayageCe microscopeest un microscope à fluorescence dont la source lumineuse est un rayonlaser. Ce rayon est focalisé sur un plan précis à une profondeur particulière de l"échantillon, etseule la fluorescence émise par ce plan précis peut sortir du détecteur, et être incluse dansl"image. On obtient une image précise en deux dimensions du plan sur lequel la mise au pointa été faite-une coupe optique. Il est ainsi possible d"observer une cellule ou une structureplan par plan. Une série de coupe optique à différentes profondeurs permet de construire uneimage en trois dimensions(Figure. 5).

Chapitre. 1Imagerie cellulaire

7 Figure.4:Principe de fonctionnement du microscope à fluorescence(ThomasetWilliam, 2004).

Figure.5:Principe de fonctionnement dumicroscope confocal à balayage(Maillet et Lemullois, 2006).2.Microscope électroniqueLe microscope électronique est beaucoup plus récent par rapport au microscope optique.Le principe de fonctionnement d'un microscope électronique ressemble un peu à celui d'unmicroscope optique sauf qu"au lieu des photons ce microscopefonctionneavec des électronsle faisceau est produit et accéléré par un canon à électrons (cat hode e t anode percée).

Chapitre. 1Imagerie cellulaire

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Chapitre. 1Imagerie cellulaire

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11. Câble haute tension. 2. Cathode. 3.Condensateur. 4. Objet à étudier. 5. Objet à étudier. 6. Objectif.6. Projecteur. 7. Fenêtre d"observation. 8. Ecran Fluorescent. 9. Plaques photographiques.Figure.6:Principe de fonctionnement dumicroscope électronique à transmission(Maillet et Lemullois, 2006).

Figure.7:Colonie deStaophylococcus aureusobservée enmicroscope électroniqueàbalayage(Jean-Claude et Roland, 2005).

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