Cours microbiologie clinique chapitre l’antibiogramme[PDF] droites parallèles dans l espace
[PDF] deux droites parallèles ? un même plan sont parall
[PDF] parallélisme dans l'espace exercices corrigés
[PDF] jean racine iphigénie acte 5 scène 2 analyse
[PDF] exo7 groupes exercices
[PDF] structure de groupe exercices corrigés
[PDF] rdm exercices corrigés pdf
[PDF] groupe helsinki
[PDF] cours de mesure electrique et electronique pdf
[PDF] exercice mesure electrique
[PDF] accumulateur au plomb corrigé
[PDF] mesure des angles d'un quadrilatère quelconque
[PDF] propriété trapèze
[PDF] cours rdm genie mecanique pdf
Tests de sensibilité des bactéries
aux antibiotiques : principe et applications en antibiothérapieDr. N. BENAMROUCHE, Dr. F. HENNICHE
FacultĠ de mĠdecine d͛Alger
Cours de Microbiologie pour les étudiants de 3emeannéeObjectifs
Définir la bactériostase, la bactéricidie, la CMI et la CMBDéfinir l'antibiogramme
Définir les trois catégories cliniques : S, I ou R Décrire succinctement les diverses méthodes de détermination de l͛antibiogramme, de la CMI, de la CMB et de l͛association d͛antibiotiƋues DĠcrire le principe et l͛intĠrġt des tests rapides DĠfinir les indications des associations d͛antibiotiƋues DĠcrire les mĠthodes de dosage d͛antibiotiƋue, de dĠtermination de pouvoir bactériostatique et de pouvoir bactéricide de liquide biologiqueRappel sur les critères de prescription
d͛une antibiothĠrapie Aǀant la prescription d͛un traitement antibiotiƋue, le clinicien doit répondre à un certain nombre de Ƌuestions concernant l͛indication et le choidž de l͛antibiotiƋue, l͛utilisation d͛une mono ou bithĠrapie, la ǀoie d͛administration ă utiliser et en dernier le choix des tests microbiologiques permettant de juger de l͛efficacitĠ de l͛antibiotiƋue prescrit.Une prescription correcte et judicieuse doit
répondre aux 4 critères énumérés ci-dessous:Rappel sur les critères de prescription
d͛une antibiothĠrapieInfection bactérienne
Le clinicien s͛aidera d͛arguments cliniƋues ou cliniƋues et bactĠriologiƋues en se basant sur les rĠsultats du laboratoire et notamment l͛identification du germe responsable de l͛infection.
La connaissance de l͛ĠpidĠmiologie des agents ĠtiologiƋues des infections ainsi que de leur sensibilité aux antibiotiques permettent de guider vers un choidž d͛antibiotiƋue adaptĠ.
Choidž de l͛antibiotiƋue
Doit tenir compte du germe pathogène, du foyer infectieux, de la présence d͛une pathologie sous jacente (immunodĠpression, diabğte).
Le laboratoire intervient pour identifier le germe, apprécier sa sensibilité audž antibiotiƋues (antibiogramme, CMI) et Ġtudier l͛efficacitĠ d͛une antibiothĠrapie (dosage sĠriƋue, Ġtude des associations d͛antibiotiƋue).
Rappel sur les critères de prescription
d͛une antibiothĠrapieL͛administration de l͛antibiotiƋue
Les modalitĠs d͛administration des antibiotiƋues nĠcessitent des connaissances sur la pharmacocinétique des antibiotiques, doivent aussi tenir compte du type d͛infection (localisĠe ou dissĠminĠe) et du terrain du patient.
Le suivi du traitement antibiotique
Il est nécessaire et permet de juger de son efficacité et de sa toxicité. Le laboratoire intervient en effectuant des dosages pour juger si les doses sont toxiques comme il intervient pour juger de l͛efficacitĠ en dosant l͛antibiotiƋue et en recherchant le pouǀoir bactĠriostatiƋue et bactĠricide d͛un liƋuide biologiƋue (sĠrum, LCR͙).
Bactériostase et bactéricidie
Les interactions bactérie-antibiotique peuvent se traduire soit par un ralentissement de la croissance bactérienne (bactériostase), soit par un effet létal de l͛antibiotiƋue (bactĠricidie).La bactériostase est quantifiée par la CMI
(concentration minimale inhibitrice) et la bactéricidie par la CMB (concentration minimale bactéricide).Les tests de sensibilité
L͛antibiogramme
La méthode utilisée est la méthode de diffusion en gélose avec des disques.Le principe du test consiste ă utiliser des disƋues en papier buǀard imprĠgnĠs d͛une concentration fidže d͛antibiotiƋue.
Ces disƋues sont dĠposĠs ă la surface d͛une gĠlose inoculĠe par une suspension bactĠrienne contenant une quantité fixe de bactéries (inoculum bactérien).
Après une incubation à 35°pendant 18-24 heures, il s͛Ġtablit un gradient de concentration entre la culture bactĠrienne et la diffusion du disƋue et Ƌui s͛edžprime par un diamğtre d͛inhibition de la culture. La concentration d͛antibiotiƋue en bordure de la zone d͛inhibition correspond ă la CMI de l͛antibiotiƋue pour la souche ĠtudiĠe.
Le diamğtre de la zone d͛inhibition est mesurĠ en mm et des courbes de concordance diamètre-CMI sont réalisées. Ces courbes sont construites pour chaque antibiotique à partir d͛Ġchantillons reprĠsentatifs des diffĠrentes espğces bactĠriennes.
Un contrôle de qualité est nécessaire (souches de référence=souches témoin). Ce contrôle permet de ǀalider l͛antibiogramme notamment la ƋualitĠ du milieu et celle des disƋues utilisés.
Les tests de sensibilité
Antibiogramme. Méthode par diffusion,
faculté de pharmacie et de médecine de Franche-comté acces.inrp.fr/.../index_htmlLes tests de sensibilité
La mesure de ce diamètre permet de classer la bactérie après comparaison des diamètres à une table dans 3 catégories: Sensible (S), Intermédiaire (I) ou Résistant (R).
Ces catégorisations cliniques sont définies en comparant les résultats obtenus en CMI avec des concentrations critiques définies en fonction des concentrations sériques obtenues après des posologies usuelles. Grâce aux courbes de concordance, aux concentrations critiques correspondent des diamètres critiques.
Sensible(S): signifie que la probabilité de succès thérapeutique est forte, à condition que les autre paramğtres pharmacologiƋues (diffusion au site de l͛infection), todžicologiƋue et clinique soient pris en compte.
Résistant(R)͗ signifie Ƌue le risƋue d͛Ġchec thĠrapeutiƋue est grand ƋuelƋue soit le traitement.
Intermédiaire (I)͗ signifie Ƌue l͛action de l͛antibiotiƋue se situe dans la zone d͛incertitude Ƌui ne peut pas prĠdire du succğs ou de l͛Ġchec thĠrapeutiƋue.
La réponse S/I/R est suffisante dans la majorité des infections. Les aǀantages de l͛antibiogramme sont: sa rapidité et sa reproductibilité.Les inconvénients de ce test sont͗ l͛Ġtude de la bactériostaseuniquement, le manque de prĠcision, l͛absence de dĠtection de certaines rĠsistances telles Ƌue certaines ɴ-lactamases, la rĠponse ne tient pas compte du site de l͛infection mais seulement des concentrations sĠriƋues pour des posologies usuelles et d͛interprĠtation pouǀant ġtre compledže.
Les tests de sensibilité
Les tests rapides (mise en Ġǀidence d͛une ɴ-lactamase)Ce test est complĠmentaire ă l͛antibiogramme et obligatoire pour certaines espèces bactériennes (Haemophilus, Neisseriagonorrohae).
Il est dit test à la nitrocéfine, celle-ci est une céphalosporine chromogène qui scindée par une ß-lactamaselibère une substance chromogène (colorée).
Ce test à pour principe de déposer une colonie sur un disque imprégné de nitrocéfine, lorsƋu͛il y a production de ɴ-lactamasepar la bactérie, il y a apparition d͛une coloration rouge sur le disƋue. Edžemple: Haemophiluset Neisseriagonorrhoae.
Ce test est complĠmentaire ă l͛antibiogramme il a l͛aǀantage de permettre de donner une réponse rapide au clinicien.
Les tests de sensibilité
MĠthodes de dĠtection de la production de ɴ-lactamase,A. Philippon; www.microbes-edu.org
Les tests de sensibilité
Techniques de diagnostic moléculaire
Ces techniques consistent à mettre en évidence les gènes codant pour la résistance aux antibiotiques.
Les techniƋues utilisĠes sont l͛hybridation aǀec des sondes nuclĠiƋues ou l͛amplification par PCR
(polymérase chainreaction).Elles sont utilisées pour:
-RĠsistance ă l͛oxacillinechez Staphylococcusaureuspar la mise en évidence du gène mecA
-Résistance aux glycopepetideschez Enterococcussp.par la mise en évidence des gènes vanA,vanBet vanC.
L͛intĠrġt de ces techniƋues est la dĠtection rapide des rĠsistances en 3 ă 4 heures, elles sont spĠcifiƋues
et sensibles. Elles complètent les méthodes phénotypiques et présentent un intérêt pour les bactéries à
croissance lente ( exemple Mycobacteriumtuberculosis, Legionella) ou difficilement cultivables(Mycoplasma, Chlamydia). Elles peuvent être appliquées directement sur les produits pathologiques et
permettent d͛obtenir une rĠponse plus rapide, notamment en cas d͛infection sĠǀğre.Limites : elles peuvent détecter des gènes de résistance non exprimés par la bactérie. C'est-à-dire Ƌu͛on
peut détecter un gène de résistance alors que la bactérie a un phénotype sensible. Elles ne permettent
pas la dĠtection de nouǀeaudž mĠcanismes de rĠsistance, ă la diffĠrence de l͛antibiogramme ͨclassique»
qui évalue la relation bactérie-antibiotique et qui permet de détecter un nouveau mode de résistance.
Les tests de sensibilité
Etude des concentrations minimales inhibitrices (CMI)Méthode par dilution
CMI͗ c͛est la plus faible concentration d͛antibiotiƋue Ƌui inhibe une culture ǀisible ă l͛ƈil. Elle dĠfinit la bactériostase.
Principe du test: consiste à mettre un inoculum bactérien fixe (105UFC/ml) dans une sĠrie de dilution de l͛antibiotiƋue (gamme de concentration en progression géométrique de raison 2). Un tube sans antibiotique servira de témoin. Elle se pratique en milieu liquide (en tubes ou en microplaques) ou en milieu solide (dans ce cas, l͛antibiotiƋue est incorporĠ dans la gĠlose; chaque boîte de Petricorrespond ă une concentration donnĠe d͛antibiotiƋue; il est possible de tester plusieurs souches déposées sous forme de spot sur la même série de boîtes).
La CMI est déterminée puis comparée à un tableau pour classer la bactérie dans l͛une des catĠgories S, I ou R.
Avantage: technique précise, donne un résultat quantitatif en mg/l ou en ʅg/ml. Utile pour les antibiotiques ayant les meilleures CMI dans les infections sévères ou quand les foyers infectieux sont peu accessibles.
Inconvénient: technique longue, lourde et coûteuse.Les tests de sensibilité
Interaction bactérie-hôte: bactériostase,A. Philippon; www.microbes-edu.org
Interaction bactérie-hôte: antibiotique,
A. Philippon; www.microbes-edu.org
Les tests de sensibilité
Gamme de concentrationDétermination de la CMI par dilution en milieu liquideA. Philippon, www.microbes-edu.org
Les tests de sensibilité
Méthode par diffusion
Pour alléger cette technique, de fines bandelettes de plastique inerte et non poreudž imprĠgnĠes d͛un gradient prĠdĠfini de concentrations croissantes d͛antibiotiƋue sont utilisĠes. Les bandelettes E-Tests®(bioMérieux) et MICE®Tests (Oxoid) sont commercialisĠes. La techniƋue d͛ensemencement est identiƋue ă celle de l͛antibiogramme.
La bandelette est mise sur la surface de la gélose. Après une incubation à 35°pendant 18-24 heures, une ellipse d͛inhibition symĠtriƋue centrĠe le long de la bandelette se forme. La lecture de la CMI est effectuĠe au point d͛intersection de l͛ellipse d͛inhibition et de la bandelette.
Intérêt: infections sévères ou pour certains germes tels Streptococcuspneumoniae, étude de la sensibilité des staphylocoques et entérocoques aux glycopeptides, germes à croissance lente, etc.
Avantages͗ CMI plus prĠcise Ƌu͛aǀec les disƋues.Inconvénient: coût élevé.
Les tests de sensibilité
E-test,
A. Philippon; www.microbes-edu.org
Les tests de sensibilité
Détermination automatisée de la CMI
Certains automates utilisĠs pour l͛Ġtude de la sensibilitĠ audž antibiotiques rendent des résultats en CMI. Des galeries contenant une gamme de concentration par antibiotique sont inoculées avec une suspension de la bactérie à étudier. Aprğs incubation dan l͛automate, des CMI seront dĠterminĠes. Trois automates permettent de déterminer les CMI: le Phoenix (BectonDickinson), le Vitek2 (bioMérieux) et le Microscan (Siemens).Les tests de sensibilité
Etude de la concentration minimale bactéricide (CMB) CMBLa CMB est la plus faible concentration de l͛antibiotiƋue bactĠricide cΖest-à-dire Ƌui lyse les bactĠries (ч0,01й de survivants). Elle définit la bactéricidie.
Principe du test: consiste à dénombrer le nombre de bactéries survivantes à partir de la dilution de l͛antibiotiƋue correspondant ă la CMI.
Une gamme de concentration d͛antibiotiƋue est rĠalisĠe comme pour la dĠtermination de la CMI. Le mġme jour, une numĠration de l͛inoculum de dĠpart (tube tĠmoin sans antibiotiƋue) est effectuĠe en rĠalisant 4 dilutions de 10 en 10 qui seront chacune ensemencées en strie sur une gélose. Après incubation à 35°C pendant 18 h, les colonies seront dĠnombrĠes et le nombre d͛UFC (unitĠ formant colonie) ă la dilution 1ͬ10000 correspondra ă 0,01й de l͛inoculum de dĠpart. Aprğs 18 h d͛incubation ă 35°C, tous les tubes qui ont une concentration d͛antibiotiƋue ш ă la CMI seront repiƋuĠs sur gĠlose en stries. Aprğs 18 h d͛incubation ă 35°C, les colonies prĠsentes sur chaƋue strie sont comptĠes et comparĠes ă la numĠration de l͛inoculum de dĠpart. La CMB est la plus faible concentration d͛antibiotiƋue pour laƋuelle le nombre de colonies bactĠriennes est ч au nombre de colonies prĠsentes sur la dilution de l͛inoculum de dĠpart (ч0,01й).
Un antibiotique est dit bactéricide lorsque la valeur de sa CMB est proche de celle de la CMI (rapport CMB/CMI <2).
Un rapport CMBͬCMI х32 indiƋue Ƌue l͛antibiotiƋue est bactĠriostatiƋue ou s͛il s͛agit d͛un antibiotiƋue habituellement considéré comme bactéricide; la souche est dite tolérante.
Indication͗ infection graǀe telle Ƌue l͛endocardite infectieuse.Les tests de sensibilité
Détermination de la CMB par dilution,
A. Philippon; www.microbes-edu.org
Interaction bactérie-hôte: bactéricidie,
A. Philippon; www.microbes-edu.org
Les tests de sensibilité
Cinétique de bactéricidie
Consiste en un dénombrement dynamique au cours du temps de bactéries surǀiǀantes ă partir de bouillons contenant l͛antibiotiƋue ă Ġtudier.
Inconvénients: méthode lourde.
Etude des associations des antibiotiques
Une association d͛antibiotiƋues est indiƋuĠe pour: -Elargir le spectre. -Obtenir une synergie.-Augmenter l͛effet bactĠricide lors d͛infections sĠǀğres (endocardites, bactĠriĠmies, arthrites, infections sur matĠriel͙).
-Couvrir une infection polymicrobienne. -Les infections à bactérie multirésistante(BMR). -Eǀiter l͛apparition de mutants rĠsistants. -diminuer la durée de traitement.Les tests de sensibilité
Pouvoir bactéricide et cinétique de bactéricidiedes associationsPrincipe:
MĠthode en milieu liƋuide utilisant des disƋues d͛antibiotiƋues de charge connue. Ces antibiotiƋues sont testĠs sur la bactĠrie responsable de l͛infection.
Association de plusieurs antibiotiƋues 2 ă 2, plusieurs associations d͛antibiotiƋues sont testĠes y compris l͛association aǀec laƋuelle le patient est traitĠ.
L͛inoculum bactĠrien est calibrĠ et est ensemencĠ dans chaƋue tube contenant l͛association des antibiotiƋues.
Tous les tubes sont incubés pendant 18H, avec des repiquages sur milieu solide après 2H, 4H, 6H et 18H.
Ces différents milieux solides sont incubés pendant 18H. Ensuite on procède à la numération des bactéries survivantes. Un inoculum témoin est utilisé.
Une association est dite bactĠricide si le nombre de bactĠries surǀiǀantes est ч ă 0,01й de l͛inoculum de dĠpart. Elle est prĠcoce si la bactéricidieest observée à partir de 2H.
Une association est dite synergique si le nombre de bactéries survivantes est < à 0,01й de l͛inoculum de dĠpart.