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LaQuantificationRelativeLa

Quantification

Relative

LightCycler

Roche Applied Science

1

LightCyclerRocheApplied Science

Real

Time,fluorescence

r based Real Time, fluorescence based quantitativePCR:asnapshotof currentproceduresandpreferences •93laboratoires 21
p a y sd'Euro p e

Australie

CanadaetÉtatsͲUnis

/pyp,,

Roche Applied Science

2

Analysed'expressiongénique

i

ButsetPr

Ͳrequ

i s

éidd/difféèéi

p r i o d e d etempset ouentre diffé rentssyst mesexp r i mentaux.

PréͲrequis:

Mesuresprécisesetreproductibles

Mesures

précises et reproductibles

Démarcheanalytiquerigoureuse

Roche Applied Science

3

QuantificationRelativeQuantification

Relative

Qtitéd'ARNdéfédl'é h till

fé Q uan tité d'ARN d er

éfé

rence d ans l'é c h an till on

Leratiorelati

f estunevaleurnormalis equicorrigepourla

Roche Applied Science

4

Paramètresetimpacts

Échantillon

DNA/RNA cDNA* Produit

Purification

desANPréparationdes

échantillonsReverse

transcription*Amplification Detection

Méthodede

Preparation

Stabilitéet

Méthode

d'extraction

Pureté

Variabilité

Efficacité

RT

EnzymeEfficacité

PCR

EnzymeMéthodede

détection

Linéaritéde

l'essai

Stabilité

et conservation desAN

Variabilité

Conservation

l'essai

Roche Applied Science

5 *RTapplications

RealTimePCRReal

Time PCR

Échantillon

SOURCESDEVARIABILITÉ:

Échantillonage

Échantillonage

Conservationduspécimen

Roche Applied Science

6

IsolationdesAcidesnucléiques

Méthode/Variabilité(rendement):

ͲMéthodessurcolonnes(HighPure)

Méthodes

basées sur particules magnétiques (Dynal) rMéthodesautomatisées (MagNAPureCompactetMagNAPureLC)

Roche Applied Science

7

Présenced'inhibiteurs

ADNcdil1:20

estla conditionquidld onne l es meilleurs résultats!!!

Roche Applied Science

8

Paramètresetimpacts

Échantillon

DNA/RNAcDNA*Produit

Purification

desANPréparationdes

échantillonsTranscription

Inverse*Amplification Detection

Méthodede

Preparation

Stabilitéet

Méthode

d'extraction

Pureté

Variabilité

Efficacité

RT

EnzymeEfficacité

PCR

EnzymeMéthodede

détection

Linéaritéde

l'essai

Stabilité

et conservation desAN

Variabilité

Conservation

l'essai

Roche Applied Science

9 *RTapplications

RealͲTimeqPCRRTiiR

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