[PDF] [PDF] Support du TD Microbiologie pour Etudiants L2pdf - Université

[PDF] TECHNIQUE DISOLEMENT

type de colonie L'isolement peut être réalisé par épuisement, en étalant le produit initial à la o Isolement sur boîte de Pétri o Isolement sur gélose inclinée

[PDF] TECHNIQUE DISOLEMENT

Pour réussir un isolement, il faut donc parvenir à disperser suffisamment les cellules o Isolement sur boîte de Pétri o Isolement sur gélose inclinée

[PDF] Travaux pratiques de microbiologie générale - Faculté des Sciences

La gélose nutritive, milieu solide, est la base de tous les milieux d'isolement et n' est en fait qu'un bouillon solidifié par l'agar-agar ( Milieux solidifiés inclinés

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s'utiliser de plusieurs façons : gélose inclinée en tubes à essai, culot en tube B- Milieux d'isolement ; ils peuvent être, suivant les techniques envisagées et les 

[PDF] Les techniques densemencements et les examens macroscopiques

Déterminer l'intérêt d'un isolement * Savoir décrire les caractères macroscopiques en milieu liquide et sur gélose inclinée solide * Savoir décrire une colonie 

[PDF] Techniques densemencement et disolement bactérien

L'ensemencement se fait par une piqure centrale (expliquer la technique) 6 Technique d'ensemencement dans un tube à gélose inclinée + un culot Elle consiste 

[PDF] TP 2- Les techniques densemencement et disolement bactérien

4 / Ensemencement en stries dans un tube à gélose inclinée ➢ Prélever la semence (l'inoculum) à l'aide d'une anse ou d'une pipette Pasteur ➢ Prendre un  

[PDF] III — Milieux de culture et ensemencements

Les premiers auteurs pipettent 0,1 ml d'une dilution donnée sur la sur- face de la gélose; puis en inclinant la plaque successivement dans tous les sens, ils tentent  

[PDF] Consulter

par le fabricant - Conserver la gélose TSAYE inclinée au réfrigérateur jusqu'à leur utilisation isolement sur gélose sélective si nécessaire incubation

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Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 1

TD 1 : Les différents types de

milieux de culture.

Un milieu de culture est une préparation au sein de laquelle des microorganismes peuvent se multiplier,

du microorganisme

étudié.

On classe les milieux de culture :

1. Selon leur consistance :

) Milieu liquide : par un trouble ou des dépôts et des voiles superficiels. Exemple : bouillon nutritif BN, Bouillon trypticase soja (TSB), Brain-Heart Infusion Broth

) Milieu solide : On obtient les milieux solides en ajoutant un agent gélifiant à un milieu liquide.

Le gélifiant le plus utilisé est -agar

60 °C tout en étant liquéfiable par ébullition, auquel cas, il reste en surfusion (liqui

Les milieux solides contenant généralement 1.5-2% (15-20 g.L-1 en tubes à essai, culot en tube droit ou couche mince en boites de pétri. la croissance des microorganismes se traduit par la formation des colonies exemple Gélose nutritive GN, Gélose trypticase soja (TSA), gélose Mac Conkey,

Gélose Muller-Hinton etc.

) Milieu semi-solide : contenant 0.5-0.75 (5-7,5 g.L-1hugh et Leifson, viande

2. Selon leur composition :

) On distingue 2 types de milieux : ) Les milieux complexes ou empiriques : De composition complexe, mal définie, ils peuvent être -d'origine animale : lait, sérum, bouillon et gélose nutritive, gélatine, etc. Tryptycase soja, gélose au Chocolat, gélose au sang, etc.

) Les milieux synthétiques ou définis : dans lesquels tous les composants sont connus

uelques-uns : Citrate de Simons, Citrate de Christensen,

Urée-Tryptophane.

3. Selon leur utilisation : On distingue en général 4 types principaux de milieux :

A- Milieux de-base ; appelés aussi milieux usuels non sélectifs, on regroupe sous ce vocable tous les

milieux ne contenant aucune molécule inhibitrice. Ils sont en général de préparation assez simple et

généralement peu coûteuse, ces milieux contiennent une base nutritive constituée de molécules azotées

(acides aminés, molécules organiques de de produit vivante

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 2

(animale, végétale, mycélienne) comme les peptones, les extraits de viande ou de levure exemple gélose et

Bouillon nutritif, gélose et Bouillon Muller-Hinton .

B- Milieux d'isolement ; ils peuvent être, suivant les techniques envisagées et les bactéries en cause

soit ;

Des milieux non sélectifs enrichis ils sont obtenus en incorporant à un milieu de base adéquat des

liquides ou suspensions riches en molécules organiques diverses : du sang, d

améliorées par dénaturation thermique des constituants, en particulier pour le sang. Ils permettent la

pousse de nombreux germes exigeants ou très exigeants. Les plus utilisées sont les géloses au sang frais

au milieu de base peut avoir plusieurs buts : apporter des facteurs de croissance nécessaire au micro-

organisme étudié.

Des milieux sélectifs, destinés à favoriser la croissance d'une ou plusieurs espèces bactériennes

-organismes. Pour cela on ajoute des éléments qui

inhibent la croissance des micro-organismes indésirables comme le chlorure de sodium à forte

concentration, le thiosulfate de sodium, le cristal violet ou certains antibiotiques, etc.Les éléments

ajoutés sont sélectionnés selon les caractéristiques du micro-organisme recherché. Ces milieux sont

utilisés pour l'analyse d'un prélèvement polybactérien.

Exemples de milieux sélectifs :

milieu S-S : il ne permet la croissance que des Salmonelles (Shigella s'y développe moins vite : environ 48 à 72 heures avant d'obtenir une culture exploitable). Milieu de Sabouraud : il permet la pousse des mycètes (Candida). gélose Kanamycine - Vancomycine, dite "Kana-Vanco" ou KV : elle empêche la pousse des

bactéries à Gram positif (action de la vancomycine) et de la plupart des entérobactéries (action de

la Kanamycine). Sur ce milieu, poussent préférentiellement des bactéries anaérobies strictes.

Milieux différentiels

Le milieu de culture dit différentiel ou milieu d'identification indicateur permet de distinguer deux types

de microorganismes se développant dans un même milieu. Ce type de milieu met en évidence certaines

caractéristiques biochimiques des microorganismes (principalement l'aptitude à dégrader un substrat)

en présence d'indicateur(s) de la réaction chimique : des indicateurs colorés de pH ou d'oxydo-réduction

(tel que le rouge neutre, rouge de phénol, l'éosine ou le bleu de méthylène).

Exemple Gélose Mac conkey : La gélose Mac Conkey est un milieu sélectif et différentiel au même

temps utilisé pour l'isolement des entérobactéries. En effet, elle contient des agents sélectifs qui

freinent le développement des bactéries à Gram positif: cristal violet et sels biliaires. Il est également

L'orientation de l'identification qui est basée sur l'utilisation du lactose,

repérable grâce à 1 indicateur de pH (rouge neutre) les colonies de E coli apparaissent en rouge, car ce

sont des lactoses + tandis que les autres colonies lac apparaissent incolores.

La Gélose Chapman (MSA), milieu sélectif des staphylocoques qui différencie la fermentation du

mannitol permettant une orientation entre autres vers Staphylococcus aureus.

Le milieu hugh et Leifson est un milieu semi-solide qui permet de déterminer la voie métabolique

empruntée par les différentes espèces bactériennes oxydative ou fermentative, il permet aussi de

déterminer "la voie d'attaque du glucose". Le milieu viande foie -solide, ce milieu est principalement utilisé dans longs

Dr. Khadir Abdelmounaim,

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tubes fins " tube de prévôt » pour la détermination du type respiratoire des micro-organismes, mais aussi

pour la culture de germes anaérobies stricts telles que les Clostridium).

Le Mannitol-Mobilité-Nitrate est un milieu semi-solide de culture caractérisé par l'utilisation

de mannitol et de Nitrate et permet la mise en évidence (ou non) de la mobilité bactérienne.

Milieux chromogènes ou discriminants

Ce milieu peut être sélectif ou non. Son principe repose sur la présence d'un ou plusieurs substrats (s)

couplés (s) à une molécule chromogène. Lorsque ce substrat est métabolisé par une enzyme bactérienne

spécifique, le chromogène associé prend une couleur particulière (il devient un chromophore)

directement lisible sur la colonie. Si l'enzyme n'existe que chez une espèce bactérienne donnée,

l'identification est immédiate. Exemple gélose MRSA-ID qui permet de détecter directement les souches

de Staphylococccus aureus résistantes à la méticilline.

Principaux ingrédients des milieux de cultures

Constituants Caractéristiques Fonction

Extraits de viandes.

A partir de tissus animaux sélectionnés (à froid : macération; à chaud: infusion, extraits de viandes).

Source de protéines peu

dégradées, glucides, sels minéraux, vitamines hydrosoluble. (vitamine B).

Peptone

(pancréatine, pepsine, trypsine, papaïne) sur des matières protéiques (viande, caséine, oligopeptides.

Hydrolysats

protéines. chlorhydriques sur des ions minéraux.

Agar-agar ou gélose

de polysaccharides (agarose 70% et agaropectine 30%). A 90°C se dissout dans température elle forme un gel transparent +/- solide.

Solidifier

cultures. les milieux de Produits biologiques Sang, sérum, lait, gélatine, pomme de terre, etc. molécules diverses organiques

Base minérale

Macroéléments ioniques (Na+, K+, Mg2+,

Ca2+, Cl-, PO4-2, SO4-2, HCO3-

Microéléments ioniques ou oligoéléments (Fe, Co, Ti, Zn, Cu, B, Se, Mo, V, W, Mn.)

Apportent

électrique,

osmotique, fonctionnement enzymatique.

Eau distillée.

a) Exemple 1 : gélose nutritive

Constituant Quantité Fonction

Peptone 5g

Extrait de viande 1g

Extrait de levure 2g

Chlorure de sodium 5g

Agar-agar 15g

pH final à 25°C : pH 6,8± 7

Dr. Khadir Abdelmounaim,

TD Microbiologie, L2, Département de Biologie, Université Oran1, Ahmed Ben Bella 4 a) Exemple 2 : Hajna Et Kligler

Constituant Quantité Fonction

Peptone 15 g

Extrait de viande 3 g

Extrait de levure 3 g

Peptone pepsique de viande 5 g

Glucose 1 g

Lactose 10 g

Rouge de phénol 25 mg

Chlorure de sodium 5 g

Sulfate ferreux 0,2 g

Thiosulfate de sodium 0,3 g

Agar-agar 15 g

Exercice :

Un microbiologiste veut faire préparer une gélose dite de Müller-Hinton. Cependant, dans son

1) quel est cet ingrédient ?

2) Combien de grammes doit-il ajouter pour la ?

3) Parmi les constituants des milieux de culture, les extraits de levures et les peptones ;

a. Comment peut-on obtenir ces composés ? b. de quoi sont-ils constitués ?

Dr. Khadir Abdelmounaim,

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TD N° 02

des bactéries et croissance bactériennequotesdbs_dbs2.pdfusesText_4