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La préparation doit être propre avant toute observation Colorer le noyau - En brun avec l'eau iodée [toxique pour la cellule] un ou plusieurs globules réfringents 

[PDF] Ttechniques de coloration pour étudier la cellule - Tribu

TECHNIQUES DE COLORATION POUR ETUDIER LA CELLULE Méthodes de coloration des cellules d'un prélèvement ou d'une coupe de tissus

[PDF] cytologie

Des techniques de coloration ou de révélation “chimiques” peuvent éventuellement être utilisées modifications de l'objet étudié qu'elles entraînent inéluctablement (altération du L'examen vital (l'examen de cellules ou tissus vivantes):

[PDF] Chapitre : METHODES DETUDE DE LA CELLULE

permet d'observer des cellules vivantes sans coloration donc sans qu'il y ait eu de Ou bien on fait passer l'eau de l'état liquide à l'état solide = technique de cependant en histologie lorsqu'il s'agit d'étudier des groupements cellulaires 

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La coloration permet de renforcer le contraste des cellules et de leurs constituants La coloration des coupes se fait par différents types de colorants ou méthodes 

[PDF] Cours de Biologie Cellulaire CHAPITRE IV METHODES - E-learning

Afin d'étudier des structures on utilise un certain nombre de techniques : préparation des coupes fines, coloration négative, ombrage métallique, cryodécapage etc Il est utilisé en biologie, pour observer les cellules, les tissus,

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développées pour étudier les divers aspects de la cellule : La microscopie est un ensemble de techniques permettant d'obtenir une image des *Le bleu de Trypan, qui ne peut pénétrer dans des cellules vivantes, mais qui colore les

[PDF] Méthodes détude de la cellule Chapitre II :

technique préparatoire de l'échantillon approprié à l'objectif Prélèvement de l' organe à étudié Coloration chimique : augmenter les contrastes naturels

[PDF] LES METHODES DETUDE DE LA CELLULE

de techniques appropriés qui ont été perfectionnés au fur et à mesure du temps et le microscope électronique qui utilise des électrons pour étudier l'objet gauche) et avec un microscope à contraste de phase (à droite) Matériel non coloré

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MĠthodes d'Ġtude de la cellule

Chapitre II :Conçu par

Mme F. Foukrache

Objectif 1͗ Citer les instruments d'obserǀation des cellules

Objectif 2: Nommer les techniques utilisées.

Objectif 3͗ Associer l'instrument d'obserǀation et la l'objectif recherchĠ.Objectifs principaux

Objectif 1 :éé

Objectif 2

Objectif 3

Objectif 4éé'é

1-Le microscope photonique à fond clairObjectifs spécifiques

A -Les microscopes photoniques

Echelle des dimensions dans le monde du vivant

hommeObjectif 1 : Définir la notion de pouvoir séparateur Notion de pouvoir séparateur = limite de résolution rapprochés , il est égal à 0,2mm ¾Organismes de taille plus petite Invisibles ¾NĠcessitĠ d'utiliser des instrumentsdestinés à observer de petits fournit une image agrandie

Ces instruments = les microscopes 0,2mmVil humainObjectif 1 : Définir la notion de pouvoir séparateur

Echelle des dimensions dans le monde du vivant0,2 mm

0,2 µm

2 ÅP S du MO

P S du METP S de

Cuff 1760Les premiers microscopes optiques

1751
Objectif 2 : Donner le principe de fonctionnement du microscope photonique à fond clair Principe de la transmission des photonsObjectif 2 : Donner le principe de fonctionnement du microscope photonique à fond clair Le M O est un système optique à lentillesdont le but est d'obtenir une image agrandiede l'Ġchantillon ă obserǀer ͗

L'objectif à image agrandie inversée

L'oculaire à image agrandie virtuelle

Objectif 2 : Donner le principe de fonctionnement du microscope photonique à fond clair

Observation par transmission

Lentille

oculaire

Lentille

Objectif

Lentille condenseur

Source de

lumière=photons

Source

d'Ġclaire ment milieuPorte objetObservation

Faisceau

de photons= lumière blancheLentilles en verreLame de verreLentilles oculaire en verrePrincipe de fonctionnement du M O objectifs de grossissement

Lentilles

(objectif) en verre

Résultat : image en couleurréfringentObjectif 2 : Donner le principe de fonctionnement du

microscope photonique à fond clair la microscopie photonique Description structurale des tissus et des cellules ;

Epithélium

intestinalTaille , Forme cellulaire et tissulaire

Tissu musculaire

cardiaqueEpithélium de l'ĠpididymeForme et position des noyaux

Épithélium de

la trachée cellule nerveuse

Frottis sanguin

humain

Paramécie

organisme microscopie photonique microscopie photonique

Objectif 4 étapes préparatoires 'é

PrĠlğǀement de l'organe ă ĠtudiĠ .Les étapes de la technique histologique: Fixation chimique : figer (conserver )les structures cellulaires Déshydratation : enleǀer l'eau intracellulaire . Inclusion: imprégner le tissu dans la paraffine Microtomie :obtenir des coupes de l'ordre de 2-10µm Coloration chimique : augmenter les contrastes naturels faibles ( images colorées )

Procédé de la technique histologique

123 4
5 6

Observation de la préparation

au microscope photonique

Le grossissement G total du microscope

égal au produitdu grossissement de

l'objectif par le grossissement de l'oculaire

G total с G de l'objectif y G de l'oculaire

Objectif 1 : Donner le principe de fonctionnement du microscope optique à fluorescence. Objectif 2: Déterminer les domaines de son utilisation.

Objectif 3: Définir un fluorochrome ou fluomarqueur .2 -Le microscope photonique à fluorescenceObjectifs spécifiques

Objectif 4 : Citer des exemples de fluomarqueurs utilisés (fluorescéine, rhodamine ) Objectif 5 : Citer des exemples de composés cellulaires détectables en microscopie à fluorescence. Le MP à fluorescence = MO qui détecte une lumière fluorescente La fluorescence est la propriété physique de certaines molécules d'Ġmettre une lumiğre( dite lumière de fluorescence) de longueur d'ondesupérieure ă la longueur d'onde de la lumière d'edžcitationObjectif 1 : Donner le principe de fonctionnement du microscope optique à fluorescence Décomposition du Spectre de la lumière visible

Ultra -

violetInfra - rouge Chaque couleur du spectre visible correspond à une longueur d'onde dĠterminĠe Objectif 1 : Donner le principe de fonctionnement du microscope photonique à fluorescence

Interaction lumière --

fluorochromeLumière d'edžcitationLumière d'Ġmission

Rhodamine Formation de l'image

fluorescenteObjectif 1 : Donner le principe de fonctionnement du microscope photonique à fluorescence Optique simplifiée du microscope à fluorescence

Oculaire

ObjectifCe type de microscope, permet de visualiser la fluorescenceémise par les marqueurs fluorescents introduits dans l'échantillon à

étudier.Donc un jeu de filtres est

indispensable Objectif 1 : Donner le principe de fonctionnement du microscope photonique à fluorescence

2 lampes Lampe

ordinaireObservation par transmission

Lampe à

vapeur de mercureObservation de la fluorescence

1 Filtre

va excitée(absorbée)le fluorochrome

1 filtre

d'Ġmission Sélectionne la longueur d'onde émisespar le fluorochrome Un miroir dichroïqueRéfléchi la longueur d'onde incidente vers la préparation Le MO à fluorescence est équipé de : 1 2 3 6

Trajet de la lumière qui éclaire

l'Ġchantillon( lumiğre d'edžcitation ) et de la lumiğre transmise ă l'oculaire(lumière d'Ġmission ) Objectif 1 : Donner le principe de fonctionnement du microscope photonique à fluorescence 13

2Objectif 1 : Donner le principe de fonctionnement du

microscope photonique à fluorescence Objectif 2 : Définir un fluorochrome ou fluo marqueur ƒChaque molécule fluorescente (fluorochrome ) a des lumière d'excitationéé 'è'Ġdite lumière de fluorescence.

Exde fluorochromesééè

FluorochromesRhodamine Fluorescéine DAPI

Lumière

d'edžcitation vert bleu UV

Lumière

d'Ġmission rouge vert bleu Objectif 3 : citer des exemples de fluorochromes

Les marqueurs fluorescents les plus courants

Observation

en utilisant le jeu de filtres spécifiques à la rhodamineObservation en utilisant le jeu de filtres spécifiques à la fluorescéine Objectif 4 ͗ DĠterminer les domaines d'application de la microscopie à fluorescence ƒTechnique essentielle dans le diagnostic clinique (par exemple, immunologie, pathologie, microbiologie, cytogénétique) et les environnements de rechercheƒEtudier au niveau cellulaire et moléculaire les structures biologiques, leur fonctionnement et leurs interactions ( division cellulaire, motilité, transport, sécrétion, communication neuronale, etc.).ƒLe microscope en fluorescence permet de visualiser des objets qui sont naturellement fluorescents (chlorophylle ,vitamine A...), ou des molécules rendues fluorescentes pour mieux les observer et

éventuellement suivre leur parcours .

Pour induire la fluorescence , les molécules

fluorescentes ( fluorochromes ) sont liées à des ACqui vont se fixer spécifiquement sur les molécules recherchées (AG ) selon le principe de la réaction immunitaire AC -AG ce qui rendra facile la détection des complexes AG -AC Application de la technique de fluorescence marquage .Objectif 4 ͗ DĠterminer les domaines d'application de la microscopie à fluorescence AC

AGLumiğre d'edžcitationAC

AGLumiğre d'Ġmission

Lumiğre d'edžcitation

Lumiğre d'Ġmission Objectif 4 ͗ DĠterminer les domaines d'application de la microscopie à fluorescence

1-Détecter et Suivre la fluidité des protéines membranaires

(expérience de Fry -EDIDIN P .35 )

Résultats : déplacement des

protéines par diffusion latérale dans le plan membranaire . Objectif 5: Citer des exemples de composés cellulaires détectables en microscopie à fluorescence.

2 -Détecter , localiser , quantifier des protéines cellulaires

comme les hormones, récepteurs, , lesprotéines du

Distribution des

éléments du

cytosquelette dans le hyaloplasme d' une cellule eucaryoteObjectif 4 ͗ DĠterminer les domaines d'application de la microscopie à fluorescence

Mitose observée au microscope à

fluorescence en utilisant plusieurs fluorochromes

Répartition des éléments du

cytosquelette dans des cellules en division (microfilamentsd'actines en

vert , microtubules en rouge )2 -Détection, localisation et quantification de protéines cellulaires (hormones,

microscopie à fluorescence

Répartition des éléments du

cytosquelette dans des cellules nerveuses

Marquage de structures

intracellulaires ( noyau en bleuquotesdbs_dbs14.pdfusesText_20