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A ETUDE DU CYCLE CELLULAIRE PAR CYTOMETRIE EN FLUX et la voie courte serait guidée par la capacité à éliminer le résidu 5'dRp Lorsque l' Enfin, environ 20 des patients XP souffrent de troubles neurologiques dès le début du kit MicroBC Assay Protein quantification (Interchim, Montluçon, France)

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Guide du

débutant:

Cytométrie en flux

2|Page

Lightning

Introduction

paraître desthèmessu ivant:

Lescomposantsdebaseducytomètreenflux

LesavantagesdeLightningͲLink

enjuste30secondes En marquéesave u leurintégration. les

Lacytométrieenfluxetsesapplications

AnalyseADN/CycleCellulaire Viabilitécellulaire

Proliférationcellulaire Fluxintracellulaireionique(ex.Ca 2+ Phénotypagemulticolore(surfacecellulaire) Phénotypagemulticolore(intracellulaire)

Oxidationdemonocytes Phagocytosedemonocytes

Oxidationdeneutrophiles Phagocytosedeneutrophiles

AnalyseMicrobiologique Trafficcellulaire

médiationcomplémentaire Triageparmorphologie(DLFetDLL)et/ou caractéristiquesfluorescents.

Graceaucyto

d'analyse dech

3|Page

Lightning

Le cytomètreenflux-Composantsdebase qu' acoustiqueestenco ursdedéveloppement. précis limites ducytomètrequevousutilisez. de délivreles coïncidents'). e laplupartdes utilisateurs désavantage. permet

51, 454,488,514nm),aukrypton(488,

Le systèmeoptique laser lumineuseestunlaserdeco uleurbleuequiestconcentrégrâceà

4|Page

Lightning

émis

parcescellules. i cationdelatailledes cellules. a sseͲbasnelaissentpasserquelalumière destubesphotomultiplicateurs(TPM)po denouvellest e chnologies.

Analyse

desdonnées instrumentàconditionquele s donnéesaientétécollectéesdansleformat.fcs(flowcytometrystandard). peuvent caract

JasonBoland,UniversityofSheffield)

Lessignauxsontcollectésparl'ensemble

desdé tecte ursetétudiéspourfournirdes informationssurlescaractéristiques fluorescentesdelapopulationcellulaire encoursd'analyse.Enplusdepermettre dedéterminersiunecertainepopulation cellulaireréagitavecuneprobe fluorescente,lacytométrieenfluxpeut fournirdeprécieusesdonnéessur l'intensité dsignal,etdoncuneindication delaquantitédeprobesco njuguéesàvos

5|Page

Lightning

adaptables comportaienthabituellementqu 'u nseullaseretnepouvaientdétecterque5paramètres(dispersion g ueursd'ondeaulieude3).Cesavancées ont derésultatssignifica

1. Indicedecoloration:l'indicedecolorationestunparamè

tre mesurerdesparamètresàco ncentration faible.

2. ChevauchementSpectral:Unchevauchementspectralseproduitlorsquelesignallumineuxémitpart

d'éliminer detelrésultatsensu (supposant estconn inhabit qu'éliminer ut devenirunvraichallengelorsquelenombre defluorochromesaugmente.

3. Contrôlesappropriés:Pourassurerlebondéroulementd'uneanalyseparcytométrieenflux,ilest

immunoglob s largement

6|Page

Lightning

4. Provenanceetdisponibilitédesréactifs:lenombredeproduitsetfournisseurspourlacytométrieen

LightningͲLink

et

Leprocéd

éLightningͲLink

rend suivant:(LightningͲLink video).Leprocédéchimique "Rapid»qu i comprendtouslesavantagesdeLightningͲLink®,maisayantenpluslebénéficedeproduiredes decytomètresenflux fluxdecon cevoir primaires: secondairesestsouventunproblème.

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Lightning

Label

LightningͲ

LinkProduct

Absorbance

Max(nm)

Emission

Max(nm)

Extinction

Coefficient

(cm 1 M 1

Emission

Colour

Stokes

Shift

DyLight®350320Ͳ0010 35343215,000Blue79

AMCA712Ͳ0010 35344219,000Blue89

Atto390349Ͳ0010 39047924,000Blue89

DyLight®405321Ͳ0010 40042030,000Blue20

PerCP718Ͳ0010 482677380,000Red195

PerCP/Cy5.5763Ͳ0010 482700N/ARed218

PE/Cy5760Ͳ0010 488670N/ARed182

DyLight®488322Ͳ0010 49351870,000Green25

Fluorescein310Ͳ0010 49452073,000Green26

Atto488350Ͳ0010 50152390,000Green22

RͲPhycoerythrin(RͲPE)703Ͳ0010 5355752,000,000Orange40

PE/TexasRed767Ͳ0010535615N/ARed80

PE/Atto594768Ͳ0010535627N/ARed92

PE/Cy5.5761Ͳ0010535694N/ARed159

PE/Cy7762Ͳ0010535776N/AFarRed241

Rhodamine311Ͳ0010 54457694,500Orange32

Cy3340Ͳ0010 550570150,000Orange20

DyLight®550323Ͳ0010 562576150,000Orange14

Atto565351Ͳ0010 563592120,000OrangeͲRed29

FluoProbes®594790Ͳ0010 59161692,000Red25

DyLight®594324Ͳ0010 59361880,000Red25

TexasRed714Ͳ0010 59561580,000Red20

Atto633353Ͳ0010 629657130,000Red28

APC/Cy5.5764Ͳ0010633694N/ARed61

APC/Cy7765Ͳ0010633776N/AFarRed143

DyLight®633325Ͳ0010 638658170,000Red20

Cy5342Ͳ0010 643667250,000Red24

Allophycocyanin

(APC)705Ͳ0010 650670700,000Red20

DyLight®650326Ͳ0010 652672250,000Red20

FluoProbes®647H362Ͳ0010 653674250,000Red21

Cy5.5782Ͳ0010 675694250,000Red19

DyLight®680327Ͳ0010 682715140,000Red33

Atto700751Ͳ0010 690725120,000Red35

DyLight®755328Ͳ0010 754776220,000FarRed22

DyLight®800329Ͳ0010 770794270,000NearInfrared24

Résumé

dudébutantvousainspiré,no us vousencourageonsàapprofondirvosconnaissancesenconsultantles ressourcescitéesciͲdessous.

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Lightning

Bibliographiesetressources

Cytometry1990,11:323Ͳ332.

555.

05 ,67A:61-67

wiki.denovosoftware.com/ http://www.chromocyte.comquotesdbs_dbs31.pdfusesText_37