[PDF] Activité protéolytique de souches de lactobacilles

Université Pierre et Marie Curie - F2School

• Donner des exemples de cinétiques à deux substrats, ou avec coenzyme libre • Etudier la vitesse d’une réaction enzymatique en fonction du pH ou de la température • Etudier les variations de l’énergie libre du complexe enzyme-substrat au cours des phases de la réaction enzymatique

M1 Chimie des biomol ecules (2019, v2), Cin etique enzymatique

Interactions médicamenteuses et cytochromes P450

Tableaux des substrats, des inhibiteurs et des inducteurs Les substrats, les inhibiteurs et les inducteurs des cytochromes P450 les plus significatifs en clinique sont regroupés dans les 3 tableaux figurant sur la carte plastifiée jointe Ils constituent une mise à jour des versions publiées précédemment (10-11) L’utilisation de deux

Utilisation clinique de l étude des interactions - Edimark

Cela implique la présence d’au moins deux sites (ex :CYP 3A) Ce type de cinétique enzymatique est difficile à distinguer dans une représentation hyperbolique de Michaelis-Menten Il est La Lettre du Pharmacologue - Volume 14 - n° 5 - mai 2000 115 A DPC Utilisation clinique de l’étude des interactions médicamenteuses G Danan*, G

Interactions médicamenteuses et cytochromes P450

Tableaux des substrats, des inhibiteurs et des inducteurs Les substrats, les inhibiteurs et les inducteurs des cytochromes P450 les plus significatifs en clinique sont re-groupés dans les 3 tableaux joints sur la carte plastifiée Ils constituent une mise à jour des versions publiées pré-cédemment (10-11) L’utilisation de deux teintes

La myéloperoxydase des neutrophiles, une enzyme de défense

deux noyaux pyrroles, trois liaisons cova-lentes avec des acides aminés de la protéine: deux groupes méthyles modifiés sont liés respective-ment à un résidu aspartate (Asp94) et à un résidu glutamate (Glu242) Ces deux liaisons sont com-munes à toutes les peroxydases de mam-mifère (figure 1) La troisième liaison se forme entre le

Interactions avec les nouveaux antirétroviraux

viroc et l’étravirine (en ATU de cohorte) À ce jour, ces quatre nouveaux antirétroviraux disponibles sont indi - qués chez les patients en échec Chez ces patients, le traitement comprendra au moins deux molécules actives, appartenant à deux classes différentes, sélec-tionnées en fonction du profil génotypique des virus

Activité protéolytique de souches de lactobacilles

acidifiant (à 44·C et en cycle thermique), et sur leurprofil biochimique déterminé à J'aidedes ga-leries API 50 CH (Bouton, 1992) Les souches sont conservées à -80·C dans un milieu synthé-tique M17 ou MRS (selon qu'il s'agisse de strep-tocoques ou de lactobacilles), additionné de gly-cérol stérile à la concentration de 15 (v/v)

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Lait(1993)73,265-279

©Elsevier/INRA

Articleoriginal

1.Validationsurminifromagesdestechniques

delaboratoire yBouton*,PGuyot*,ADasen,RGrappin

INRA,BP89,39801PolignyCedex,France;

etcellesobservéessurfromages;6 protéolyse show 266
yBoutonetal teolysls

INTRODUCTION

productionagricoledeszonesdeplateaux etdemontagnedeFranche-Comté.Avec uneproductionannuellede38000tréali- (oufruitières),ilseplaceaupremierrang desfromagesd"appellationd"origine dits"sauvages",avecapportoccasionnel defermentscommerciaux.Lagrandeva- mièreetdestechniquesdefabrication,as- sociéeaumanquedemaîtrisedes duit.Parailleurs,danslecontexteécono- miqueactuel,leComtédoitprouversa organoleptiquesqueparsonattachement auterroir,justifiantsonappellationd"ori- decréerunecollectiondesoucheslocales quesetorganoleptiques,pourêtreutili-

Comté.

Onsaitquelaprotéolyseestleméca-

nismeleplusimportantdelaplupartdes fromages,carilaffecteàlafoislatexture etlaflaveur(Fox,1989).Orleslevains lactiques,s"ilsabaissentlepHdumilieuen ganoleptiquesdesfromagesenlibérant dessystèmesenzymatiques,enparticulier pauxphénomènesdel"affinage(Thomas delaprésureetcelledelaplasmine,les quesjouentunrôlefondamentaldansles importantestactuellementbiendécrit (Desmazeaud,1990).Deuxcatégories grosetmoyenspeptides,etlespeptidases matiqueaussicomplexe,onpeutavoirre- courssoitàdestechniquesquimesurent drolyse,soitenmesurantuneactivitépro- ouendopeptidase,sursubstratssynthéti- quesousurdifférentescaséines. formationdegroupements-NH2libres,a actifstelsquel"ortho-phthaldialdehydeou oPA(Obergetal,1991),l"acide2,4,6trini- trobenzènesulfoniqueouTNBS(McKellar,

1981;Rollemaetal,1989).Lachromato-

graphieliquidehauteperformanceaégaie- protéolytiquedesouches(Obergetal,

1990).Pourmesurerdemanièrespécifi-

Souchesdelactobacillesetprotéolyse267

couplésàdesgroupementspara- nitroanilideou~-naphtylamide(ElSodaet

Desmazeaud,1982;CholetteetMcKellar,

1990).Sicestechniquespermettentde

quedessouchescultivéessurlaitoumi- lieusynthétique,qu"enest-ildanslefro- fromage?

Aucoursdecetravail,nousavonsdonc

etleniveaudeprotéolysedesfromages levainssurlescaractéristiquesphysico- chimiquesetsensoriellesduComté.Pour mesurerlaprotéolyse,deuxtechniques demiseenœuvresurculturesdesouches etsurfromages:ledosagedesgroupe- mentsaminés(-NH2)quiestunemesure globaledelaprotéolyse,parl"acide2,4,6 trinitrobenzènesulfonlque(TNBS),etune mesured"activitépeptidasiquelargement répanduechezlesbactérieslactiques (BouillanneetDesmazeaud,1980;Meyer etal,1989;KhalidetMarth,1990),l"activi- téleucine-aminopeptidasique(Lap)sur substratspécifique(Ieucine-paranitro- anilide).

Danscepremierarticle,aprèsunepré-

sentationdestechniquesutiliséespour

évaluerlepotentielprotéolytiquedes

souches,nouscompareronslesrésultats obtenussurmilieulaitousynthétiqueaux résultatsobtenussurminifromages.L"in- physico-chimiquesetsensoriellesdu

Comtéseradonnéedansunsecondar-

ticle.MATÉRIELETMÉTHODES

Souchesdebactérieslactiques

vementdeslevainsthermophilsssauvageset decettecollection;ils"agitde45souchesdeL he/veticus,5souchesdeLde/brueckiisubsp /actiset2souchesdeSsalivariussubspther- mophilus(S69etS48)..Nousdisposonssurces leriesAPI50CH(Bouton,1992).Lessouches tiqueM17ouMRS(selonqu"ils"agissedestrep-

10%(BouillanneetDesmazeaud,1980).

d"unesouchedelactobacillesetd"uneoudeux souchesdestreptocoques),afind"assurerune l"activitéprotéolytique.

Fabricationsfromagères

dansunateliercomprenant4minicuves.Cha- 268
yBoutonetal ensemencéeavecunesoucheouuneassocia- souchequivariaitentrefromages,l"ensemble identique.Lacomparaisonphysico-chimique desfromages(extraitsec,teneurenNaCIet cessusdefabricationdesfromages(coagula- moyennede103UFC/ml. membraneétantrespectivementde1,4urnet ralementobservéssontvoisinsde99,5%.La mencementenlevainsthermophiles(addition de0,12%destreptocoqueset0,08%delacto- bacillesenassociationdesoucheset0,10%en deBerridge,afind"obteniruntempsdeprise

INRA,BrevetFr88-00803).

tantependant25min.Lesoutiragesefaitpar unesaumuresaturéeenNaCl,d=1190,pH quement(Cardenasetal,1991aetb);tout maines(humiditérelative>94%).

Dosagedel"activitéprotéolytique

Dosagedesgroupementsaminés

àl"aideduTNBS

Surculturesdesouches

debactérieslactiques

McKellar(1981).VingtmldelaitG(Prolait,

1%(v/v)soitenviron2106UFC/ml,sontincu-

dium0,1mol/l,pH9,5et400IIIdesolutionde

TNBSà100Ilg/ml(SigmaP2297).Après1h

solutionsdeglycinede0,01à0,5mmol/l.

Souchesdelactobacillesetprotéolyse269

turesmèrescomposantcetteassociation.

Surfromages

delaméthodedeKuchrooetFox(1982).Les convertiengd"azote,pour100gd"azotetotal (-NH 2 thodeKjeldahl.

Déterminationdel"activité

leucine-aminopeptidasique

Surculturesdesouches

debactérieslactiques techniquedeRabieretDesmazeaud(1973)à streptocoquesou8hpourleslactobacilles; danslecasdesassociationsdesouches,l"en- bancede3,à650nmcorrespondantàune manDU64).Pourchaquesouche,4tubes bance=3);900lddetamponphosphatedeso- dium0,05molli,pH=7et50J.lldesubstrat(6,5 mgdeL-Ieucine-p-nitroanilide,SigmaL9125,

Surfromages

510-molliensubstratetde10%endiméthyl-

formamide(Lindenetal,1982).À0,5mlde bérépargdefromageetparheure.

Fidélitédesmesures

1985).

TechniqueTNBS

souche(7échantillons). 270
yBoutonetal voisinsde0,01meqgly/ldelait,saufautemps correspondentdesCVde2%,pourdes moyennes~0,500meqgly/ldelait.LesCVde quiseraretenupourcomparerlessouches entreelles.

TechniqueLap

coqueset7lactobacilles). riationde14,6%estdumêmeordredegran- deurqueceluiobtenupourlamesuredesgrou- pementsaminésparlatechniqueduTNBS aprèsuneincubationde8h.

Traitementsdesrésultats

partirdulogicielStaHTCF(Version4,1987)de rages. l"analyseencomposantesprincipalesouACP (Zourarietal,1991).Lacomparaisondelapro- declasserlessouchesentreelles;ceclasse- tantentrelesdifférentesmoyennes.

RépétabilitéReproductibilité

TNBSIN=7)LapTNBSIN=7)Lap

IN=B)IN=10)

T2T4T6TBT24T2T4T6TBT24

x s boutde2,4,6,8et24hd"incubation.

Souchesdelactobaciliesetprotéolyse271

RÉSULTATSETDISCUSSION

Caractérisationetchoixdessouches

L"ACP,réaliséeàpartirdesmesures

TNBSetLap,apermisdeclasserles50

souchesdelactobacillessurlabasede niques(r=0,04).Lesaxes1et2expli- quent100%delavariance;laprojection dunuagedepointssurunplanestprésen- variablesLapetTNBS;lessouches116,

111,57,75et72sontcellesquiprésen-

souches131,85,9,139et90sontcelles 139
131

113quiontdesvaleursdeLapfaibles(5,5à

12,7Ilgp-nitroaniline/h).

Delamêmemanière,desgroupesde

entresouchesmoyennesetsouches faiblesousouchesmoyennesetsouches fortesn"estpastoujoursaisée.Ilressort quelessouches16,42,40et27sont cellesquiprésententaveclessouches90,

72et75lesvaleurslesplushautes(3,65à

sesituentlessouches85,131,123,99,

137et113présentantlesvaleurslesplus

quotesdbs_dbs12.pdfusesText_18