TD 4b: PCR - Institut national de la recherche agronomique
Quantifier l’ADN: la PCR quantitative 96 Replicates -1 00E-01 4 00E-01 9 00E-01 1 40E+00 1 6 11 16 21 26 31 36 Cycle Number Analyse temps réel Analyse point Final
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efficacité (calcul de AE): réactions de Q-PCR ( en triplicats) sur des dilutions en série (1/5 ou 1/10) d’un ADN ontenant la séuen e mati e à amplifie (ADN génomiue de préférence: non nécessaire de connaitre la concentration de la séquence matrice dans cet ADN): AE doit être proche de 2
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PCR en temps réel – Démarche scientifique Paramètres et impacts Échantillon DNA/RNA cDNA* Produit Purification des AN Préparation des échantillons Reverse transcription* Amplification Detection • Méthode de Preparation Stabilitéet • Méthode d‘extraction • Pureté Variabilité • Efficacité RT • Enzyme • Efficacité PCR
Rappel Détermination des conditions (amorces, t°C d
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PCR quantitative en temps réel et PCR digitale
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LA PCR QUANTITATIVE 2 – ASPECT PRATIQUE • Précautions et risques biologiques • Mise en place d’un projet de quantification : les points à considérer • Les équipements : thermocycleurs, circuit PCR, Nanodrop, bio analyseur • Les consommables • Les kits • Protocoles et optimisation
Mesurer la maladie résiduelle dans les LAL
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Structure et organisation de lADN (Acide désoxyribonucléique)
II B Structure secondaire : La Double Hélice: l’ADN est formé de 2 haines enroulées l’une autour de l’autre pour former une double hélice La partie sucre- phosphate onstituant le squelette est située à l’extérieur de
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