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Quelle la méthode la plus efficace pour dénombrer les bactéries ?
En surface ou en masse, la technique de dénombrement consiste à couler une gélose en boîte de Petri pré-fournie ou choisie selon la bactérie que l'on étudie.Comment dénombrer les bactéries ?
Le dénombrement des bactéries repose sur le principe selon lequel une colonie se forme par divisions d'un seul micro-organisme. Compter les colonies en marquant chaque colonie sur le fond de la boîte avec un marqueur indélébile. Pour des raisons de sécurité, ne jamais ouvrir la boîte.Comment dénombrer les germes revivifiables ?
Principe. La recherche et le dénombrement des germes REVIVIFIABLES se réalise à deux températures différentes afin de cibler à la fois les micro-organismes à tendance PSYCHROPHILES soit à 20°C et ceux franchement MÉSOPHILES soit 37°C.- Formule du calcul du poids de LEVURE dans le cas d'un dosage à 1.8 %. Avec notre exemple cela donne: 12.375 kg de farine X 1.8 = 223 g de levure.
Dr. KHERRAZ-CHEMLAL Djazia
Pollution marine et continentale et impacts pour les L3 HBMC. Le Dénombrement Bactérien (Méthodes directes) (TP 1)Le dénombrement bactérien est donner le nombre de bactéries par unité de volume, très souvent
par ml de culture analysée. Différentes applications du dénombrement bactérien : - : ex : Le nombre de bactéries existant dans un échantillon -E : Déterminer le nombre de bactéries par gramme de sol peutrenseigner sur sa fertilité, spécialement les bactéries intervenant dans les cycles bio-géo-
- Le dénombrement des bactéries dans une urine fection urinaire ou pas, grâce à une comparaison à des seuils à ne pas dépasser seuils (Tableau de Merlin) - Le dénombrement de certaines bactéries(coliformes fécaux, streptocoques fécaux) renseigne sur la qualité microbiologique du milieu
étudié et son degré de pollution.
Méthodes de dénombrement :
Méthodes directes :
*Le comptage direct des cellules :Se de Thoma ou Malassez
des lames munies ensions bien déterminées). * Epifluorescence : observées au microscope en lumière UV. Cette méthode permet de compter sélectivement lesbactéries vivantes fluorescentes à une couleur différente des cellules mortes. Cette technique a
des inconvénients du fait que la couleur des cellules peut changer avec le pH du milieu par exemple. *Compteur de particules : Cet appareil réalise automatiquement le dénombrement des particules ou cellules en suspension dans une sol passage à travers un orifice calibré. 2 Pour notre séance de TP nous allons effectuer un dénombrement direct des cellules de levure de boulanger Saccharomyces cerevisiae en utilisant des cellules de comptage à savoir cellule de Thoma et Malassez. 3Cellule de Malassez sous microscope
Pour obtenir une numération proche de la réalité, il est important de : ne pas rayer le quadrillage lors du nettoyage de la cellule, bien monter la lamelle sur la cellule, énumérer correctement, comme décrit ci-dessous,A . Principe
On dépose, entre cellule et
dans le quadrillage (volume précis) les éléments voulus. On ramène le résultat obtenu en
éléments par litre de liquide.
Bien laisser sédimenter les particules à énumérer avant le comptage. 4 B. Si on prévoit un nombre élevé de cellules Diluer le liquide à analyser : à 1/2 ou 1/5 ou 1/10 ou plus, dans du sérum physiologique. Ne pas oublier de multiplier le résultat du comptage par la dilution.C. Avant de charger la cellule :
Placer une lamelle sur la cellule : pour la cellule de Malassez : lamelle plane, poser la cellule sur une surface bien horizontale, "coller" la lamelle sur la cellule, en humectant les deux bords de celui-ci avec un petit chiffon humide propre et essoré,faire glisser la lamelle sur la largeur de la cellule et vérifier la bonne adhésion " cellule -
lamelle". D. Introduire le liquide à analyser dans la cellule : homogénéiser le liquide à analyser (ou sa dilution),énumérer, grâce à une pipette Pasteur. La goutte ne doit pas déborder dans les rigoles de la
de la cellule.Attendre au moins 5min
sédimenter).Compter les éléments cellulaires
Avant de faire le comptage :
is aussi pour vérifier que les cellules à compter sont réparties de façon homogène partir de la suspension réhomogénéisée ; x40 pour effectuer le comptage Pour les éléments chevauchent les lignes, comptez tous ceux qui chevauchent les lignes à gauches et en haut. Ne comptez aucun élément qui chevauche les lignes à droite et en bas. 5Hématimètre avec levures sous microscope
On dénombre les cellules dans dix carrés choisis au hasard et on fait une moyenne (n) exemple :
Carré1 : 12 cellules, C2 : 10 cellules, C3 :9 cellules, Carré 4 : 8 cellules, Carré 5 :12Cellules,
carré 6 : 15, Carré 7 : 10, carré 8 : 13, carré 9 :11, et carré 10 : 17 On fait une moyenne (n) : 12+10+9+8+12+15+10+13+11+17=117/10=11,7 On applique la formule pour la cellule de MalassezN= n x 105 cellules/ml
Donc pour notre exemple le nombre de cellules de levures et de 11,7 x 105 cellules/ml 6Pour la cellule de Thoma :
N= n x 4 x 106 cellules/ml
Nettoyage après usage : cellule et lamelle:
Immersion
essuyage : linge fin ou papier absorbant non pelucheux (genre " Sopalin ») sans frotter, laisser sécherquotesdbs_dbs10.pdfusesText_16[PDF] calcul election professionnelle
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