PRÉPARATION DE TISSUS POUR INCLUSION ET COUPE
COUPE PARAFFINE. Nous prenons les échantillons déjà fixés et en cassette dans l'alcool. À préparer avant tout prélèvement : - Les tissus seront fixés
Aperçu des principales colorations histologiques et intérêt pour le
Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant des bains) l'épaisseur de coupe du tissu (trimming adéquat). Chaque étape ...
PREPARATION DUNE LAME HISTOLOGIQUE
prélevée est rigide en présence de paraffine solide dans l'espace intracellulaire de chaque cellule composant le tissu. OU. 7. Confection des coupes
Actualisation de la technique complète des coupes à la paraffine
Certains techniciens ajoutent parfois de la cire d'abeille car elle confère à la paraffine une souplesse qui améliore la facilité de coupe et l'adhérence de la
Microscopie Paraffine en pastilles Histosec® en pastilles Histosec
Les coupes fines de telle sorte forment la condition pour que le tissu puisse être analysé dans un microscope à immersion. Matériel d'echantillons. Matériel
TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
Dans certains cas on utilise d'autres milieux d'inclusion (celloïdine
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
e) Coupe (Microtomie). Le passage du bloc de paraffine dans un microtome Éliminer la paraffine en passant les lames dans des bains de toluène ou de xylène.
08.03.006 f2.0 Sectionnement des tissus enrobés de paraffine et d
1 juin 2012 Les coupes tissulaires sont montées sur des lames pré-refroidies en retournant la lame avec un petit angle par-dessus la coupe comme s'il s' ...
UNE MÉTHODE DIMPRÉGNATION ARGENTIQUE RAPIDE SUR
Nous avons eu du succès avec une méthode très rapide pour coupes à la paraffine dont voici les diverses étapes: 1. Débarassez la coupe de 10 /i de la paraffine
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
LES COUPES. Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d'obtenir des tranches de section (coupes histologiques) de 2 à 5
Microtomie et préparation de coupes en paraffine
Le Leica Paraffin Tape-Transfer SystemTM est recommandé pour obtenir des coupes à partir de blocs difficiles pour lesquels la fixation le traitement ou l'
PRÉPARATION DE TISSUS POUR INCLUSION ET COUPE
COUPE PARAFFINE. Nous prenons les échantillons déjà fixés et en cassette dans l'alcool. À préparer avant tout prélèvement : - Les tissus seront fixés
Aperçu des principales colorations histologiques et intérêt pour le
Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d'obtenir des sections (coupes histologiques) de 3 à 5 microns d'épaisseur. Les
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
3- Déshydratation (Alcool et Toluène). ? 4- Inclusion (paraffine
08.03.006 f2.0 Sectionnement des tissus enrobés de paraffine et d
1 jui. 2012 Les coupes tissulaires sont montées sur des lames pré-refroidies en retournant la lame avec un petit angle par-dessus la coupe comme s'il s' ...
TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
étapes successives : fixation inclusion
Présentation PowerPoint
une coupe suffisamment fine d'un bloc de tissu en paraffine pour être observée « in fine » sur lame au microscope. La coupe est une étape fondamentale.
FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
prélevée est rigide en présence de paraffine solide dans l'espace intracellulaire de chaque cellule composant le tissu. OU. 7. Confection des coupes
Préparation des tissus : information générale
Préparation des tissus : information générale. Tissus inclus dans la paraffine. - Technique solidifiant les tissus et permettant de confectionner des coupes
UNE MÉTHODE DlMPRÉGNATION ARGENTIQUE RAPIDE SUR
SUR COUPES A LA PARAFFINE DU TISSU NERVEUX DE Débarassez la coupe de 10 µ de la paraffine par la méthode usuelle c'est-à-dire xylol/alcool.
Actualisation de la technique complète des coupes à la paraffine
qui améliore la facilité de coupe et l’adhérence de la pièce au bloc de fixation (avec mon vieux micro-tome les résultats sont nettement améliorés) Paraffine : 100 g - cire d’abeille : 5 g L‘imprégnation Le remplacement de l’alcool par la paraffine doit se faire lentement
Coupes à la Paraffine
NIST Technical Series Publications
Quels sont les différents types de paraffines ?
Il existe différentes qualités de paraffines qui se différencient par leur point de fusion. Le Paraplast est une paraffine synthétique qui imprègne bien les pièces. Régler la température du bain de paraffine en fonction de ce point de fusion (45-70°) La durée de l'inclusion dépend de la taille de la pièce .
Comment faire des coupes en paraffine ?
Pour les échantillons enrobés en paraffine, les coupes obtenues sont d’abord placées dans un bain-marie (dépliement du tissu) puis retirées de l’eau, placées sur une lame et mises à sécher. Stockage : Température ambiante Equipements disponibles sur la plateforme : 2 RM2245 (Leica) & 1 HM350 (MMFrance) Microtomes à congélation
Quelle est l'épaisseur d'une coupe ?
L'épaisseur de ces coupes se situe aux alentours de 4 µ . A cette épaisseur, la résistance des tissus à la pression de l'arête de l'instrument coupant n'est pas suffisante et entraîne des détériorations qui rendent inexploitables les observations qui en résultent.
Quelle est la différence entre l’alcool et la paraffine ?
NB : Il faut se souvenir que si l‘alcool a déjà servi plusieurs fois, la partie inférieure du flacon contient un alcool moins titré. LA PARAFFINE du commerce se présente souvent en granulés, et son point de fusion est toujours pré-cisé (entre 45 et 70°). Le Paraplast est une paraffine de synthèse qui imprègne bien les pièces.
Plateforme d'Histologie _ IRIC
Les colorations histologiques:
colorations de routine et colorations spécialesLES ETAPES
depuis le prélèvement jusqu'au bloc d'uneautopsie.Lafixationapourbutslaconservationdes
structuresetledurcissementdestissus. estlaparaffine.Commelaparaffineesthydrophobe,le
paraffinefondue(inclusion). estincluse.LES ETAPES
depuis le prélèvement jusqu'au blocCirculation du tissu
imprégnation à la paraffine ÉtapesRéactifsDurée (min)Température (ºC)1Fixateur200< 40
2Éthanol 50%2045
3Éthanol3045
4Éthanol4045
5Éthanol4045
6Éthanol5045
7Éthanol 100%5045
8Toluène4545
9Toluène4545
10Toluène4545
11Paraffine6060
12Paraffine6060
13Paraffine6060
LES ETAPES
depuis le bloc jusqu'à la lame colorée micronsd'épaisseur. lanuità40-45°Cou1Hmax60°C). -LaplupartdestissussonttransparentsLES ETAPES DE LA COLORATION
-Déparaffinage (toluène / xylène -éthanol) -Hydratation -Colorationà proprement dit (routine ou spéciale) -Déshydratation (éthanol)Éclaircissement (toluène / xylène)
xylène.Le pathologiste et le choix des colorations
serainstitué. unevisionglobaledelamorphologiedestissus (noyau,cytoplasmeetcollagène).Départements de
Pathologie
Ayez les bons outils de
travail !!!Seule une bonne
utilisation de contrôles adéquats permet d'obtenir des résultats explicables et reproductibles en histologie.Facteurs influant la distribution des colorants
dans les tissus et la qualité de la lame en général matérield'analyse.Les colorations de routine (topographiques)
H&E différentséléments. ReinPoumon
Les colorations de routine (topographiques)
H&E distincteLesNucleolesdevraientêtreviolacés.
Microscopic Quality Control of Hematoxylin and EosinPolymorphonucléaire
Plasmocytes
Muqueuse colique
Les colorations de routine (topographiques)
HPS Hématoxyline Phloxine Safran (milieu francophone) cytoplasmeJGH,HMR,SacréCoeurbienquefrancophones
demandentleHE.Colorant /
SolvantTemps
Xylène 5'00''
Xylène5'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
Lavage0'20''
Lavage1'00''
Hématoxyline0'55''
Lavage0'20''
Lavage0'20''
Bicarbonate
Sodium 0.5%0'20''
Lavage0'15''
Lavage3'30''
Éosine0'45''
ETOH 95%0'30''
ABS ETOH0'40''
ABS ETHO2'40''
Xylène2'00''
Xylène2'00''
Xylène2'00''Colorant /
SolvantTemps
Xylène 3'00''
Xylène3'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
Lavage0'10''
Lavage0'40''
Hématoxyline0'50''
Lavage0'25''
Bicarbonate
Sodium 0.5%0'12''
Lavage0'15''
Lavage3'00''
Phloxine0'15''
Lavage0'18''
ETOH 95%0'30''
ABS ETOH0'30''
ABS ETHO0'45''
Safran5'00''
ABS ETOH0'45''
ABS ETHO0'45''
ABS ETOH0'45''
Xylène0'45''
Xylène0'45''
Xylène1'00''
Les colorations spéciales
standard. etc).Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
systèmenerveuxcentral.Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Trichrome de Masson
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Cette méthode est très populaire. Utile dans l'étude de la pathologie du coeur (infarctus), foie (cirrhose ) , rein (fibrose glomérulaire) La plupart des recettes colore en rouge la kératine et les fibres musculaires, en bleu ou vert le collagène et l'os, en rouge-clair ou rose les cytoplasmes, et en noir les noyaux de cellules.Résultats:
Noyaux, chromatine et nucléole..............bleu foncé à noir Globules rouges..............................................................rougeArtère
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Trichrome de Masson
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Cette méthode est très populaire. Utile dans l'étude de la pathologie du coeur (infarctus), foie (cirrhose ) , rein (fibrose glomérulaire) La plupart des recettes colore en rouge la kératine et les fibres musculaires, en bleu ou vert le collagène et l'os, en rouge-clair ou rose les cytoplasmes, et en noir les noyaux de cellules.Résultats:
Noyaux, chromatine et nucléole..............bleu foncé à noir Globules rouges..............................................................rougeDéparaffiner et réhydrater
Mordancer au Bouin 1H 56
CRefroidir et laver 20mn
Hematox. Weigert filtrée
LaverBiebrich scarlet fuchsine acide 2mn
LaverAc. Phosphomolibdique-phosphotungstique 10mn
Bleu aniline 30
-40 secRincer
Acide acétique 1%
Déshydrater, monter
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Elle est parfois demandée en pathologie cardiovasculaire.MOVATT
Noyaux ...................................................................bleu à noir Cytoplasme .....................................................................rouge Collagène et fibres réticulaires-....................jaune verdatre Fibrine ...............................................................rouge intense Mucine et substance de fond..........................bleu limette OsLes colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Elle est parfois demandée en pathologie cardiovasculaire.MOVATT
Noyaux ...................................................................bleu à noir Cytoplasme .....................................................................rouge Collagène et fibres réticulaires.....................jaune verdâtre Fibrine ...............................................................rouge intense Mucine et substance de fond..........................bleu limetteDéparaffiner et réhydrater
Bleu Alcian 15mn
Laver 5mn
Alcool alcalin 1H
Laver 15mn et rincer
Hématoxyline 12
-15 mn Rincer et différencier dans chlorure de fer 2% 30sThiosulfate sodium 1mn
LaverCrocéine scarlet -ac. Fuchsine 2mn
Rincer à l'eau distillée pls fois
Rincer Acide acétique 0.5%
5% Ac. Phosphotungstique aqueux 2X 5mn
Rincer Acide acétique 0.5%
Rincer ds 3 bains ETOH abs.
Safran 10mn
Déshydrater, monter
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Coloration de Verhoeff
Elle met en évidence le réseau de fibres
élastiques.
Cette coloration est utile dans le cadre des diagnostics de lésions dégénératives congénitales ou acquises (vergetures, élastose solaire), de vasculite (peut être demandée pour mettre en évidence la limitante élastique des vaisseaux), d'artérite temporale. Cette méthode est basée sur la coloration des fibres élastiques par l'hématéine combinée à l'iode et au chlorure ferrique.Résultats:
Noyaux......................................................................gris à noir Fibres élastiques..............................................................noir Cytoplasme......................................selon contre-coloration Globules rouges.............................. selon contre-coloration Collagène..........................................selon contre-coloration PeauLes colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Coloration de Verhoeff
Elle met en évidence le réseau de fibres
élastiques.
Cette coloration est utile dans le cadre des diagnostics de lésions dégénératives congénitales ou acquises (vergetures, élastose solaire), de vasculite (peut être demandée pour mettre en évidence la limitante élastique des vaisseaux), d'artérite temporale. Cette méthode est basée sur la coloration des fibres élastiques par l'hématéine combinée à l'iode et au chlorure ferrique.Résultats:
Noyaux......................................................................gris à noir Fibres élastiques................................................................noir Cytoplasme......................................selon contre-coloration Globules rouges.............................. selon contre-coloration Collagène..........................................selon contre-colorationDéparaffiner et réhydrater
Hématéine Verhoeff 30mn coupesnoir
Rincer à l'eau distillée pls fois
Différencier au chlorure ferrique 2%
Laver rapidement
ETOH 95%
Rincer
Colorer au Van Gieson ou Éosine
Déshydrater, monter
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
La Réticuline
(exemple:architecturefolliculaire). constituantlesquelette),lamoelleosseuse (myélofibrose).Résultats
Poumon
vaisseauPlèvre
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
La Réticuline
(exemple:architecturefolliculaire). constituantlesquelette),lamoelleosseuse (myélofibrose).Résultats
Déparaffiner et réhydrater
Rincer à l'eau distillée
Ac. Périodique 0.25% mordancer 15mn
Eau distillée
Solution Hortega 10
-15mn 40CEau distillée + Ammoniaque 1% agiter
Formol 1%
Rincer
Chlorure or 0.2%
Rincer
Thiosulfate de sodium 5% 1mn
LaverContre
-colorer rouge nucléaire ou phloxine (0.1% alum sulfate) 5mnquotesdbs_dbs11.pdfusesText_17[PDF] huile de paraffine
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