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Purification de protéines : principes et méthodes

Purification de protéines : principes et méthodes. OBJECTIFS. - Connaître les différentes techniques de chromatographie pour la purification des protéines.



Purification des protéines

très courant de doser la protéine à purifier après chaque étape. Il faut donc posséder une méthode de dosage. (enzymatique immunologique



Chap. 5 : Purification des protéines

Biochimie des Protéines. Licence STS Biologie- 5.1 Les différentes étapes de la purification ... 5.3.3 Détecter la présence d'une protéine particulière.



Techniques dextractions et de caractérisations dune protéine.

aucune méthode d'extraction n'est nécessaire. La solubilité peut-être utilisée pour purifier certaines protéines car certaines sont solubles.



Untitled

Dès à présent la purification de protéines à l'échelle industrielle Le choix de la méthode de purification d'une protéine donnée.



Polycopié du Cours: Techniques dextraction de purification et de

L'extraction d'une protéine à partir d'un tissu commence par la destruction de l'organisation cellulaire par des méthodes mécaniques chimiques ou par l'action 



Présentation PowerPoint

Purification des protéines recombinantes. 1. Détermination de la concentration en protéine. Les méthodes les plus utilisées sont l'absorption en UV et 



Innovations-Protéines-Prod 1

Les nouvelles méthodes d'extraction et de clarification la purification



Thuy Diem Trinh Lam Purification et caractérisation de la protéine

7.0 Purification de protéines par chromatographie . 6.0 Mise au point des méthodes de purification .



Production de Protéines Recombinantes

Méthodes pour purifier les protéines. • Précipitation: concentration par des solvants ou des sels (sulfates d'ammonium ou de sodium). • Purification: 



[PDF] Chap 5 : Purification des protéines

5 : Purification des protéines 5 1 Les différentes étapes de la purification 5 2 Planification 5 3 Essai 5 3 1 Critères 5 3 2 Détecter la présence de 



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La méthode la plus utilisée pour changer la concentration en sels d'une solution protéique est la dialyse Dans une dialyse les protéines dans une 



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Cette méthode met à profit l'existence de zones hydrophobes discrètes à la surface des protéines La matrice contenue dans la colonne contient des groupes



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Une des méthodes se prêtant le mieux à de gros volumes est la précipitation différentielle au sulfate d'ammonium C'est pourquoi on l'utilise très souvent 



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Purification de protéines : principes et méthodes OBJECTIFS - Connaître les différentes techniques de chromatographie pour la purification des protéines



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Si la protéine est à extraire d'un tissus ou d'une culture de cellules 3 méthodes sont possibles: A partir du tissus entier: On choisit un matériel tissulaire 



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Méthodes d'étude des protéines Contenu de la matière : 1 Méthodes d'extraction et de purification 2 Méthodes de dosage 3 Méthodes d'études 



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La chromatographie en phase liquide est une méthode physico-chimique basée sur des différences d'interactions Les molécules des produits à séparer (solutés) 



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L'EXTRACTION DES PROTEINES ALIMENTAIRES Méthodes propriétés et utilisations des concentrats et isolats protéïques Denis LORIENT



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Utiliser les propriétés des protéines pour expliquer les principes des méthodes de purification Justifier le choix d'une méthode en fonction du cahier des 

  • Comment purifier une protéine ?

    Lorsque la température approche des 60°C, l'agitation atomique devient telle que les liaisons les plus faibles, comme les liaisons hydrogène, se rompent. La protéine se déroule et devient une longue chaîne d'acides aminés : c'est la dénaturation.
  • Comment dénaturer une protéine ?

    On pourra utilement calculer : - Le taux global de purification, qui est égal à l'AS mesurée à la fin de toutes les étapes, divisée par celle de départ. Ici, le taux global de purification est égal à 7000 / 20 = 350.
  • Comment calculer le taux de purification ?

    L'enzyme présente dans l'extrait enzymatique sera purifiée en utilisant une ou plusieurs techniques de purification successives et/ou complémentaires : précipitation, chromatographiques, fractionnement liquide-liquide.

AXE 12 - Biologie moléculaire et biochimie

Purification de protéines : principes et méthodes

OBJECTIFS

- Connaître les différentes techniques de chromatographie pour la purification des protéines

- Être capable de choisir et de mettre en Suvre la (les) méthode(s) appropriée(s) pour la purification de

protéines d intérêt - Savoir utiliser des automates pour la purification des protéines - Savoir analyser la qualité et doser les protéines purifiées

PUBLIC

Techniciens, ingénieurs, chercheurs souhaitant surproduire des protéines en vue d études biochimiques,

biophysiques et/ou structurales

PREREQUIS

Connaissances de base en biochimie des protéines

Les moins initiés pourront suivre le stage "Du gène à la protéine" avant de participer à ce stage.

PROGRAMME

Cours (7 h)

- Introduction sur les caractéristiques physico-chimiques des protéines - Lyse bactérienne : méthodes et choix du tampon - Purification des protéines : principes et méthodes

Travaux pratiques (18 h)

- Purification sur automate d une protéine recombinante à partir d un culot bactérien par 2 stratégies

différentes

- Suivi de la purification par gel de polyacrylamide en conditions dénaturantes (SDS-PAGE) et Western-blot

- Dosage de la protéine purifiée par la méthode de Bradford et par spectrométrie UV - Analyse des résultats Pendant la formation, du temps sera consacré à des discussions avec les stagiaires autour des

problématiques qu'ils rencontrent ou ont rencontrées dans la production / purification de protéines et

des solutions possibles à envisager.

EQUIPEMENTS

- 4 automates de purification (2 AKTA Pure et 2 AKTA Purifier, GE Healthcare) - 2 spectrophotomètres (Varian Cary 50 et DeNovix DS-11)Environnement scientifique et technique de la formation

Institut de biologie intégrative de la

cellule http://www.i2bc.paris-saclay.fr

RESPONSABLES

Valérie CAMPANACCI

Ingénieure de recherche

UMR 9198

Mélanie CHENON

Ingénieure d'études

UMR 9198

LIEU

GIF-SUR-YVETTE (91)

ORGANISATION

3,5 jours

De 3 à 8 stagiaires

MÉTHODES PÉDAGOGIQUES

- Alternance de cours (7 h) et de travaux pratiques (18 h) - TP en sous-groupes de 4 stagiaires maximum avec 1 intervenant par sous-groupe

COÛT PÉDAGOGIQUE

1600 Euros

À L'ISSUE DE LA FORMATION

Evaluation de la formation par les

stagiaires

Envoi d une attestation de formation

DATE DU STAGE

Réf. 21 222 : du lundi 17/05/21 à 09:00

au jeudi 20/05/21 à 12:00

cnrs formation entreprises - Tél. : +33 (0)1 69 82 44 55 - Email : cfe.contact@cnrs.fr - http://cnrsformation.cnrs.fr

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