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LE GENIE GENETIQUE ET LE CLONAGE DADN

Il faut alors indiquer qu'à cette étape certains plasmides sont refermés sans aucune molécule d'ADN étrangère. I. 1. 4. Transformation des cellules. Dans l' 



5.le clonage.pdf

Cette étape d'insertion d'un fragment d'ADN dans un vecteur repose sur l'utilisation d'outils et de techniques de biologie moléculaire permettant la 



Génie Génétique

Le clonage moléculaire consiste à l'insertion d'une séquence d'ADN dénommé insert dans un vecteur approprié puis son COSMIDE: ETAPE D'EMCOMPAQUETAGE 1.



TD : clonage/ADN recombinant

Comment définir un schéma de clonage? Page 3. Couper: les enzymes de restriction. Page 4 



GENIE GENETIQUE

Etapes de clonage et construction des Banques génomiques et d'ADN Techniques de criblage des clones d'intérêt par hybridation avec une sonde.



LE CLONAGE HUMAIN À BUT REPRODUCTIF Document présenté

9 juin 2003 FIGURE 1 : LES DIFFÉRENTES ÉTAPES DU CLONAGE PAR TRANSPLANTATION NUCLÉAIRE ... PDF/WHA51/ear10.pdf (page consultée le 1 mai 2003). OMS 1999.



Mise au point sur le clonage des gènes la préparation et lutilisation

Le clonage du fragment choisi est obtenu en faisant proliférer la cellule transformée suivant les Les étapes de la synthèse et du clonage de l'ADN.



3: Clonage dun gène dans un plasmide

Le clonage moléculaire est une des bases du génie génétique. Il consiste à insérer un fragment d'ADN (dénommé insert) dans un vecteur approprié comme un 



Contribution à lidentification et au clonage du gène de résistance

11 sept. 2007 Lors d'une réaction incompatible la réaction de défense de la plante passe par trois phases. La première étape est la reconnaissance de l'agent ...



Production de Protéines Recombinantes

Étapes d'une production de protéine recombinante. D ifférentes étapes de la traduction procaryote . ... Vecteurs de clonage et l'analyse des vecteur .



[PDF] clonagepdf - Faculté des Sciences de Rabat

Un vecteur de clonage courant est le plasmide bactérien L'ADN du plasmide est coupé par une enzyme de restriction et lié in vitro au fragment d'ADN



[PDF] 5le clonagepdf - Méthodologie et termes techniques

Le clonage désigne principalement le processus de multiplication d'un organisme d'une cellule souche ou d'un gène en grand nombre d'exemplaires identiques 



[PDF] LE GENIE GENETIQUE ET LE CLONAGE DADN

Les différentes étapes passent par : la construction d'une banque d'ADN I 1 Préparation d'une banque d'ADN à l'aide d'enzymes de restriction : banque 



[PDF] Génie Génétique - univ-ustodz

1 Vecteur de clonage : renferme une origine de réplication et permet de cloner un segment d'ADN ou un gène qui y est intégré



[PDF] TD : clonage/ADN recombinant - inra

Définition du clonage: Multiplication in vitro d'un organisme d'une cellule souche ou d'un gène en grand nombre d'exemplaires identiques 



[PDF] AFR/RC55/14 Page 1 INTRODUCTION 1 Le mot clonage est un

17 jui 2005 · Un clone est un organisme qui est la copie génétique d'un organisme existant Le clonage peut s'opérer naturellement; par exemple des clones 



[PDF] GENIE GENETIQUE - ISBST

Etapes de clonage et construction des Banques génomiques et d'ADN omplémentaires Planche 1 : carte de restriction du plasmide pBR322



[PDF] 3: Clonage dun gène dans un plasmide - BiOutils

Cette sélection bleu/blanc est un moyen très pratique de sélectionner les colonies qui contiennent le plasmide avec insert Page 2 PROTOCOLE 1) Digestion Les 



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1 Le principe du clonage 2 Les bases du clonage de l'ADN clonage peut être divisée en plusieurs étapes comme suit (Figure 13) (Winter et al 2000 ;



[PDF] Mise au point sur le clonage des gènes la préparation et lutilisation

1 DNA is cut using restriction enzymes and bound to another DNA fragment 1) Le procédé de clonage de gènes s'appuie sur quatre étapes biochimiques et 

  • Quelles sont les différentes étapes du clonage ?

    Étapes du clonage moléculaire
    la digestion de l'ADN avec des enzymes de restriction ; la ligation de l'ADN à un vecteur d'insertion ; la transformation de l'organisme hôte (comme une bactérie) avec le vecteur d'insertion ; la sélection et la vérification de la présence de la séquence d'ADN clonée.

  • Comment sélectionner les clones recombinants ?

    deux gènes de résistance, l'un à l'ampicilline, l'autre à la tétracycline peuvent servir de marqueurs pour sélectionner aisément les clones transformés par des plasmides recombinés.

  • Quelles sont les caractéristiques d'un vecteur de clonage ?

    PROPRIÉTÉS DES VECTEURS DE CLONAGE
    Réplication autonome et indépendante de l'ADN de la cellule hôte. 2. Petite taille: pour permettre l'insertion de grand fragment d'ADN étranger 3. Présence de gènes de sélection: sélection des cellules hôtes qui ont intégré un vecteur.
  • L'insertion du fragment d'ADN dans le plasmide doit inactiver le gène de résistance au deuxième antibiotique. Les bactéries transformées par les plasmides recombinants sont donc résistantes au premier antibiotique (ampicilline) et sensibles au deuxième antibiotique (tétracycline).
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Dr ABDI Meriem

Géniegénétique, Licence 3 Biochimie

COURS 5:

CLONAGE ET VECTEURS DE CLONAGE

République Algérienne Démocratique et Populaire Université des Sciences et de la Technologie dOran Mohamed BOUDIAF Département de Génétique Moléculaire et Appliquée

CLONAGE MOLECULAIRE

obtenirplusieurscopies. vecteur.

CLONAGE MOLECULAIRE

1.UnVecteurCirculaire

Linéaire

2.UneCellulehôteProcaryote

Eucaryote

3.UnfragmentADNgénomique

ADNcomplémentaire

ÉLÉMENTS NÉCESSAIRES

CLONAGE MOLECULAIRE

cerevisiae. plusieurscopiesduvecteurrecombiné.

CLONAGE MOLECULAIRE

CLONAGE MOLECULAIRE

CATEGORIES DE VECTEURS

ouungènequiyestintégré.

VECTEUR DE CLONAGE

CHOIX DU VECTEUR DE CLONAGE

Lechoixvecteurdeclonagedépendde:

PROPRIÉTÉS DES VECTEURS DECLONAGE

1.Réplication autonome et hôte.

2. Petite taille:étranger

3. Présence de gènes de sélection:sélection des cellules hôtes qui ont intégré un vecteur.

PROPRIÉTÉS DES VECTEURS DECLONAGE

4. Présence de sites de restriction localisés dans les gènes de sélection:permet de

sélectionner les cellules hôtes qui ont intégré un vecteur recombinant.

5. Stabilité: maintient sans modification dans la cellule hôte, quel que soit le nombrede

division.

VECTEURSHOTEINSERT (Kb)

1.PlasmidesBactérie10

2.Phage lambdaBactérie25

3. CosmideBactérie45

4.YAC (yeast artificial chromosome)Levure1000

5.BAC (bacterial artificial chromosome)Bactérie300

EXEMPLES DE VECTEUR DE CLONAGE

MoléculedADNdoriginebactérienne

1. LES PLASMIDES

1. LES PLASMIDES

1. LES PLASMIDES

Ildesplasmidessuivants:

ColE1

RSF2124

pSC101

LES PLASMIDES

Desplasmidesartificiels.

LES PLASMIDES pBR

lamplicilline. surlesdeuxgènesderésistance.

Ontunetaillequiavoisine2,6Kb.

LES PLASMIDES pUC

Polylinker

pUC 9ACGCCAAGCTTGGCTGCAGGTCGACGGATCCCCGGGAATTCACTG

Polylinker

dupolylinker.

LES PLASMIDE pUC

2.LES PHAGES

membraneentourantunADNsimplebrinde6,4kb.

2.LES PHAGES

Découvert par E.M. Lederbergen 1950.

Deux parties sont individualisées dans le phage lamba:

1. La tête du virus: Elle renferme lADN viral (ADN double brin de 48 kb).

2. La queue du virus: Elle permet la fixation du virus sur la cellule hôte bactérienne.

lunecomplémentaireàlautre. Leurs association donne une structure circulaire à lADN dans la cellule hôte.

PHAGES Ȝ

PHAGES Ȝ

intégré se recombine avec le chromosome bactérien. L'intégration peut ensuite entraîner soit une réponse lysogénique, soit une réponse lytique. Une réponse lysogéniquepas toujours de conséquence sur la vie de la cellule.

PHAGES Ȝ

PHAGES Ȝ

delabactérieinfectée.

PHAGES Ȝ

COSMIDE

leurADNcirculairecequipermettraaucosmide empaquetédanslatêteviruslambda.

Intègreenviron40kbétranger.

COSMIDE

COSMIDE: ETAPE DEMCOMPAQUETAGE 1

latêteduphagelambda. restriction. coupésaveclamêmeenzyme. antibiotiques,codésparleplasmide. YAC

Chromosomeartificielconstruitinvitro

Peutporterdesinsertsallant2000kb.

régulatrices. YAC

UnvecteurYACcontient:

3-DessitesderestrictionSmaIetBamHI

4-Unmarqueurdesélectionà(AmpR)

CLONAGE DANS UN VECYEUR YAC

Une digestion par BamHIet EcoRIlibère trois

fragments : lun contient h+, ARS et CEN ainsi quun télomère, le second contient u+ et un télomère et le troisième uniquement h+. Ces fragments de tailles différentes peuvent être séparer par électrophorèse sur gel dagarose

CLONAGE DANS UN VECYEUR YAC

extrémitéscohésivescompatibles. BAC sontactuellementpresqueplusutilisés.

LesBACsontdesADNcirculaires,commeun

chromosomebactérien,dontde réplicationestissuedesexuelF bactérienne). BAC

LevecteurBaccontient:

1-OriS:originederéplicationdeF.

correcteduplasmidedanslescellulesfilles.

3-LegènerepEcodederéplicationde.

blanc/bleu

5-CmRplasmidiquecodelarésistanceau

chloramphénicol.quotesdbs_dbs29.pdfusesText_35
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