LE GENIE GENETIQUE ET LE CLONAGE DADN
Il faut alors indiquer qu'à cette étape certains plasmides sont refermés sans aucune molécule d'ADN étrangère. I. 1. 4. Transformation des cellules. Dans l'
5.le clonage.pdf
Cette étape d'insertion d'un fragment d'ADN dans un vecteur repose sur l'utilisation d'outils et de techniques de biologie moléculaire permettant la
Génie Génétique
Le clonage moléculaire consiste à l'insertion d'une séquence d'ADN dénommé insert dans un vecteur approprié puis son COSMIDE: ETAPE D'EMCOMPAQUETAGE 1.
TD : clonage/ADN recombinant
Comment définir un schéma de clonage? Page 3. Couper: les enzymes de restriction. Page 4
GENIE GENETIQUE
Etapes de clonage et construction des Banques génomiques et d'ADN Techniques de criblage des clones d'intérêt par hybridation avec une sonde.
LE CLONAGE HUMAIN À BUT REPRODUCTIF Document présenté
9 juin 2003 FIGURE 1 : LES DIFFÉRENTES ÉTAPES DU CLONAGE PAR TRANSPLANTATION NUCLÉAIRE ... PDF/WHA51/ear10.pdf (page consultée le 1 mai 2003). OMS 1999.
Mise au point sur le clonage des gènes la préparation et lutilisation
Le clonage du fragment choisi est obtenu en faisant proliférer la cellule transformée suivant les Les étapes de la synthèse et du clonage de l'ADN.
3: Clonage dun gène dans un plasmide
Le clonage moléculaire est une des bases du génie génétique. Il consiste à insérer un fragment d'ADN (dénommé insert) dans un vecteur approprié comme un
Contribution à lidentification et au clonage du gène de résistance
11 sept. 2007 Lors d'une réaction incompatible la réaction de défense de la plante passe par trois phases. La première étape est la reconnaissance de l'agent ...
Production de Protéines Recombinantes
Étapes d'une production de protéine recombinante. D ifférentes étapes de la traduction procaryote . ... Vecteurs de clonage et l'analyse des vecteur .
[PDF] clonagepdf - Faculté des Sciences de Rabat
Un vecteur de clonage courant est le plasmide bactérien L'ADN du plasmide est coupé par une enzyme de restriction et lié in vitro au fragment d'ADN
[PDF] 5le clonagepdf - Méthodologie et termes techniques
Le clonage désigne principalement le processus de multiplication d'un organisme d'une cellule souche ou d'un gène en grand nombre d'exemplaires identiques
[PDF] LE GENIE GENETIQUE ET LE CLONAGE DADN
Les différentes étapes passent par : la construction d'une banque d'ADN I 1 Préparation d'une banque d'ADN à l'aide d'enzymes de restriction : banque
[PDF] Génie Génétique - univ-ustodz
1 Vecteur de clonage : renferme une origine de réplication et permet de cloner un segment d'ADN ou un gène qui y est intégré
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Définition du clonage: Multiplication in vitro d'un organisme d'une cellule souche ou d'un gène en grand nombre d'exemplaires identiques
[PDF] AFR/RC55/14 Page 1 INTRODUCTION 1 Le mot clonage est un
17 jui 2005 · Un clone est un organisme qui est la copie génétique d'un organisme existant Le clonage peut s'opérer naturellement; par exemple des clones
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Etapes de clonage et construction des Banques génomiques et d'ADN omplémentaires Planche 1 : carte de restriction du plasmide pBR322
[PDF] 3: Clonage dun gène dans un plasmide - BiOutils
Cette sélection bleu/blanc est un moyen très pratique de sélectionner les colonies qui contiennent le plasmide avec insert Page 2 PROTOCOLE 1) Digestion Les
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1 Le principe du clonage 2 Les bases du clonage de l'ADN clonage peut être divisée en plusieurs étapes comme suit (Figure 13) (Winter et al 2000 ;
[PDF] Mise au point sur le clonage des gènes la préparation et lutilisation
1 DNA is cut using restriction enzymes and bound to another DNA fragment 1) Le procédé de clonage de gènes s'appuie sur quatre étapes biochimiques et
Quelles sont les différentes étapes du clonage ?
Étapes du clonage moléculaire
la digestion de l'ADN avec des enzymes de restriction ; la ligation de l'ADN à un vecteur d'insertion ; la transformation de l'organisme hôte (comme une bactérie) avec le vecteur d'insertion ; la sélection et la vérification de la présence de la séquence d'ADN clonée.Comment sélectionner les clones recombinants ?
deux gènes de résistance, l'un à l'ampicilline, l'autre à la tétracycline peuvent servir de marqueurs pour sélectionner aisément les clones transformés par des plasmides recombinés.Quelles sont les caractéristiques d'un vecteur de clonage ?
PROPRIÉTÉS DES VECTEURS DE CLONAGE
Réplication autonome et indépendante de l'ADN de la cellule hôte. 2. Petite taille: pour permettre l'insertion de grand fragment d'ADN étranger 3. Présence de gènes de sélection: sélection des cellules hôtes qui ont intégré un vecteur.- L'insertion du fragment d'ADN dans le plasmide doit inactiver le gène de résistance au deuxième antibiotique. Les bactéries transformées par les plasmides recombinants sont donc résistantes au premier antibiotique (ampicilline) et sensibles au deuxième antibiotique (tétracycline).
TD : clonage/ADN recombinant
Définition du clonage:
Multiplication in vitro
d'un organisme, d'unecellule souche ou d'ungène , en grand nombre d'exemplaires identiquesLes techniques de l'ADN
recombinantBut: isoler des fragments d'ADN de génomes
complexes et les recombiner dans des génomes plus petits et faciles à manipuler età analyser.
• Des outils de bricolage: utilité des enzymes • Structure des vecteurs de clonage en fonction de leurs hôtes • Comment définir un schéma de clonage?Couper: les enzymes de restriction
Enzymes de restriction
AluI AG/CT
Arthrobacter luteus
CfoI GCG/C
Clostridium formicoaceticum
EcoRV GAT/ATC
Escherichia coli B946
EcoRI G/AATTC
Escherichia coli RY13
EcoRII /CCWGG
Escherichia coli R245
SfiI GGCCNNNN/NGGCC
Streptomyces fimbriatus
Coller: la ligase
Copier: les polymérases
Marquer: kinase
Eviter l'auto-ligation:
phosphataseSynthèse à partir d'ARN:
Reverse transcriptase
Les vecteurs de clonage
et leurs hôtesHôte = bactérie
Hôte = levure
Hôte = cellule d'insecte
ou oeuf de XénopeHôte = bactériophage -une molécule capable d'accepter un ADN étranger - une molécule capable de se répliquer dans un hôte - une molécule possédant des marqueurs de sélectionExemple: Plasmide
Schéma d'une manipulation de
clonage typeSchéma d'une manipulation de
clonage typeLes stratégies de clonage:
1. Sélectionner les clones recombinants
Insertion dans un autre gène de résistance aux antibiotiquesLes stratégies de clonage:
1. Sélectionner les clones recombinants
Insertion dans la partie LacZa de l'opéron lactoseComplémentation d'une souche
bactérienne possédant une mutation dans le gène LacZLes stratégies de clonage:
1. Sélectionner les clones recombinants
Insertion dans la partie LacZa de l'opéron lactoseLe 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-b-D
galactoside (X-Gal) est clivé par la - galactosidase pour donner une substance bleue insoluble et en présence d'IPTG (colonies bleues)Si on introduit un ADN étranger dans le
polylinker, on détruit la grille de lecture: pas de -galactosidase active (colonies blanches)Les stratégies de clonage:
2. Eviter la recircularisation du vecteur
Clonage directionnelDéphosphorylation du vecteur • Bouts collants possibles • Clonage directionnel possible si 2 enzymes différentes • Possibilité d'utiliser des enzymes à extrémités compatibles • Addition de bouts collants • Ajout de nucléotides en 3' par la terminal transférase • Liaison de bouts francs • Digestion par la nucléase S1 • Utilisation de l'ADN ligase de T4Les stratégies de clonage:
3. Faire en fonction des possibilités
• 1ère méthode: - Clonage du génome entier: banque de gènes - Détection du gène par hybridation moléculaire ou PCR - Proba de trouver une séquence donnée dans une collection de N transformants: P = 1 - (1-f) N f: fraction du génome effectivement clonée dépend de la taille du fragment et de la complexité du génomeLes stratégies de clonage:
4. Comment cloner un gène particulier?
• 2ème méthode: - Repérer le gène par hybridation moléculaire (Southern) - Récupérer le fragment repéré sur le gel d'agarose et le cloner dans un vecteurLes stratégies de clonage:
4. Comment cloner un gène particulier?
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