FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
PREPARATION D'UNE LAME HISTOLOGIQUE -. OBJECTIFS SPECIFIQUES : la confection des coupes histologiques comporte alors 3 étapes :.
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique. Pour l'étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs
TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
diverses (préparation des échantillons) que l'on applique au matériel. étapes successives : fixation inclusion
MODULE 1 – Introduction Comment préparer un prélèvement de
Dans cette vidéo nous allons parler d'aspects plus techniques liés à l'histologie. Savez-?vous comment on obtient une lame histologique comme celle-?ci?
PREPARATION DUNE LAME HISTOLOGIQUE
Service d'Histologie & Embryologie. 1ère année de médecine. Module d'Histologie. Berrada S.M.. 1. - PREPARATION D'UNE LAME HISTOLOGIQUE -.
Réalisation dune coupe de racines et schéma dhistologie végétale
préparations histologiques de racines jeunes. ? Réalisation d'une coupe de racines coloration au carmin-vert d'iode : protocole. • Réaliser des coupes
Segmentation des Coupes Histologiques Osseuses Par la Ligne de
Résumé: La coupe histologique osseuse est une lame qui présente la structure interne de l`os a l`échelle microscopique. Le screening (étape de lecture d'une
MEMOIRE DE FIN DETUDES
1 juil. 2017 Figure 33 : coupe histologique du tissu pulmonaire atteindre l'hydatide ... Techniques de préparation des coupes histologiques…………………...27.
Préparation des tissus : information générale
Plateforme d'Histologie IRIC – Local 3440. Préparation des tissus : information générale. Tissus inclus dans la paraffine.
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
Le plus souvent le matériel histologique (= cellules contenues dans un tissu) est fixé
Chapitre II : Méthodes d’étude de la cellule TD N°2
Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus Une fois obtenu ce prélèvement doit immédiatement être immergé dans un
Coupes histologiques - HISTOMICS
fixer à une molécule (antigène) de la coupe histologique Ces anticorps produits chez l’animal à partir de la protéine purifiée est couplé à: une enzyme (peroxydase) qui catalyse une réaction avec production de couleur un marqueur (fluorophore) le plus souvent fluorescent On parle alors d’immunofluorescence
Chapitre II : Méthodes d’étude de la cellule TD N°2
ainsi une préparation histologique prête à être observée au microscope optique 2- Préparation des coupes pour observation au microscope électronique [Figure 2] La séquence de manipulation est analogue à celle qui a été exposée pour la microscopie optique a) Fixation
1 Méthodes d'études en histologie - editions-ellipsesfr
B La congélation permet la conservation de pièces histologique qui pourront servir plusieurs années après encore à des études moléculaires et enzymatiques C Une coupe et une coloration par l’hématéine éosine safran (HES) peuvent être réalisées sur un bloc de tissu fixé par le liquide de Bouin inclus en
Comment faire une coupe histologique ?
La préparation d’une coupe histologique consiste à réaliser des sections, c’est-à-dire des tranches très fines de tissus destinés à être observés par transparence au microscope. Les coupes à congélation présentent certains avantages que la technique en paraffine n’offre pas : la congélation permet une conservation optimale de l’ADN et de l’ARN.
Qu'est-ce que l'orientation des coupes histologiques?
Par exemple, on utilise cette terminologie pour indiquer l'orientation des coupes histologiques ou des vues utilisées dans les schémas et images en médecine ou en biologie humaine à partir de la position de Poirier, c'est-à-dire lorsque le sujet est debout face à l'observateur [ réf. souhaitée] .
Quelle est la différence entre la technique histologique et la technique des coupes minces?
Technique des coupes minces et coloration positive La technique des coupes minces et coloration positive Le principe et le procédé sont les même que pour la technique histologique la différence est dans les produits et les outils utilisés
Quels sont les 4 étapes d’une démarche histologique?
Toute activité histologique a en commun l’action de voir (observer) et d’interpréter ce qui est vu. Dans toute démarche d’ordre histologique, 4 étapes se succèdent : 1) le choix du matériel à étudier, 2) la technique permettant de visualiser les structures ou les phénomènes que l’on veut étudier, 3) la production d’images de ces structures ou de...
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TP 7 Histologie
Les techniques de MO et de ME sont utilisées en routine pour visualiser les structures. Avec les conseils de Madame Julien. Anatomopathologie . 26000 ValencePour rendre visible ce que l'on veut observer, il est nécessaire de mettre en oeuvre des techniques
diverses (préparation des échantillons) que l'on applique au matériel. Pour l'observation en MO
ou en ME, les coupes examinées sont le fruit de procédures techniques qui requièrent plusieurs
étapes successives : fixation, inclusion, coupe, coloration, montage. I Pour la MO : fixation au formol, inclusion en paraffine, colorations standard (hématoxyline-éosine ou HES ou trichrome) La fixation a pour but la conservation des structures et le durcissement des pièces. Elle doit se faire immédiatement après le prélèvement, par immersion du matériel dans un grand volume de liquide fixateur. Les liquides fixateurs les plus utilisés sont le formol ou le liquide de Bouin (mélange de formol et d'acide picrique). La durée de la fixation varie selon le volume des prélèvements (de quelques heures pour un petit fragment biopsique à plusieurs semaines pour un cerveau humain entier). L'inclusion a pour but de permettre la réalisation de coupes fines et régulières. Le milieu d'inclusion le plus utilisé est la paraffine. Comme la paraffine est hydrophobe, le prélèvement doit d'abord subir une déshydratation (par immersion dans des bains d'alcool de degré croissant puis dans des bains de toluène) avant d'être coulé dans un moule contenant de la paraffine fondue par chauffage et devenue liquide, qui infiltre alors toute la pièce. Après refroidissement, on se trouve en présence d'un bloc de paraffine, dur, à l'intérieur duquel la pièce prélevée est incluse. Dans certains cas, on utilise d'autres milieux d'inclusion (celloïdine, résines plastiques, etc.). Les coupes du bloc de paraffine sont faites avec un microtome permettant de réaliser des tranches de section (coupes) de 2 à 5 µm d'épaisseur. Les coupes sont recueillies sur des lames de verre.BTSA 1 M55
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Les colorations réalisées sur lames, accentuent les contrastes pour mieux reconnaître les différents éléments de la préparation. Comme les colorants sont en solution aqueuse, lescoupes doivent d'abord subir une réhydratation. Celle-ci est effectuée après déparaffinage
des coupes (par la chaleur et des bains de toluène) en immergeant les lames dans desbains d'alcool de degré décroissant puis dans l'eau distillée. Les colorations les plus
fréquemment utilisées associent deux ou trois colorants différents : l'Hématoxyline-
Eosine (H.E.) associe l'hématéine qui colore les noyaux en violet et l'éosine les
cytoplasmes en rose ; les colorations trichromiques usuelles sont l'Hématéine-Eosine-Safran (H.E.S.) par ajout de safran colorant en jaune les fibres de collagène, et le
trichrome de Masson qui associe un colorant nucléaire (hématoxyline), un colorant cytoplasmique et un colorant bleu ou vert colorant les fibres de collagène. De nombreuses colorations spéciales (dites signalétiques) permettent de visualiser différentes structures ou composants des tissus (par exemple, les fibres de réticuline par des colorations argentiques ou les fibres élastiques par l'orcéine). Le montage. Après avoir subi une déshydratation (par bains d'alcool de degré croissant puis bains de toluène), les coupes colorées sont montées entre lame et lamelle avec unerésine synthétique dont l'indice de réfraction est voisin de celui du verre. On dispose alors
d'une " préparation microscopique » (simplement appelée " lame » dans le langage courant) prête à être observée au MO. Remarque :Pour la ME : fixation à la glutaraldéhyde, post- fixation à l'acide osmique, inclusion en épon, contraste par l'acétate d'uranyle et le citrate de plomb La technique dite " standard » de ME est analogue dans ses principes à celle de MO, mais les modalités précises diffèrent. La fixation se fait habituellement dans de la glutaraldéhyde tamponnée et est suivie d'une post-fixation à l'acide osmique. L'inclusion se fait dans une résine synthétique type Epon ou Araldite, après que les fragments ont été déshydratés dans les alcools et dans l'oxyde de propylène. Les coupes ultrafines des blocs sont réalisées grâce à un ultramicrotome qui permet d'obtenir des coupes ultrafines d'environ 80 nm d'épaisseur. Les coupes sont recueillies sur des grilles de cuivre. Avec le même ultramicrotome, on peut faire des coupes semi- fines, observables en MO et permettant de guider le choix des zones à étudier en ME. Le contraste des coupes s'effectue habituellement avec de l'acétate d'uranyle (contrastant les nucléoprotéines : noyau, nucléole, ribosomes) et des sels de plomb comme le citrate de plomb (contrastant les membranes).BTSA 1 M55
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II Technique de préparation des échantillons1 Fixation
Mettre la pièce anatomique dans un bain de formol à 10% entre 24h et 48h. (il est préférable de la
laisser 48h).Il faut veiller à préparer un bain qui représente 10 fois la masse de la pièce à fixer.
Remarque : Formol à 10% en sachant que les solutions du commerce sont à 30%Prélever un à étudier. Le positionner
2 Préparation avant inclusion : La déshydratation
sachant que la paraffine est très hydrophobe.Alcool 70° 85° 90° 100°
Temps 10 min 30 min 45 min 1h30
Ensuite mettre dans 3 bains successifs de safsolvent de concentration identique pour laver safsolvent 15 min 30 min 45 minMettre dans de la paraffine liquide pour laver les excès de solvant. Pour cela on utilise une étuve
entre 56°C et 60 °C pour garder la paraffine liquide.Paraffine liquide 1h 1h 1h
Le dernier bain peut durer 1 nuit ffectuer, le lendemain, la coupe avec les étudiants3 Inclusion/ enrobage
Dans un moule métallique ou jeta à 56°C.
Mettre au fond quelques gouttes de paraffine liquide (Les pinces doivent être chaude pour faciliter cette opération.. Utiliser le bec bunsen).Mettre
Rajouter de la paraffine liquide
La cassette, puis de nouveau de la paraffine liquide (bain glacé) pour faciliter le démoulage.BTSA 1 M55
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4 Coupe histologique
le microtome o reculer le porte objet au maximum o placer le bloc dans le porte objet sans le fixer o placer le rasoir face gravée vers l'extérieur : e fixer (face à couper dans un plan vertical, parallèle au fil du rasoir, les deux arêtes du bloc les plus longues horizontalement o dégrossir à la main o régler l'épaisseur des coupes (5 microns) o mettre le cliquet o couperDIFFICULTES
o Les coupes ne se font pas vérifier le cliquet, l'inclinaison du rasoir, la fixation du porte objet o coupes striées essuyer le rasoir ou le déplacer o coupes irrégulières vérifier la fixation du rasoir et du porte-objet La cire doit être assez froide, pour obtenir un ruban. =>Mettre le bloc de paraffine au congélateur si besoin ou utiliser une bombe cryolab qui refroidit la surface de la cire.BTSA 1 M55
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5 Fixation de la coupe sur la lame
Sur une plaque chauffante maintenant une température de 50 °C.On place une lame sur laquelle on dépose une solution eau distillée albuminé à 1% en veillant à
faire un bien glisser sur la lame. stick on On dépose alors la coupe histologique sur la lame.On égoutte la lame , en renversan.
On place la lame droite pour bien faire sécher. Par exemple sur un sopalin. Puis on place la lame dans une étuve à 56°C pendant 1 h.Cela perm
coupe sur la lame. - une épaisseur constante. - pas de pli, pas de bulle - pas de détérioration de la coupe - pour que laBTSA 1 M55
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6 Déparaffinage
Puis il est né en veillant à ne pas enlever la coupe de la lame) Par passage de la lame dans 2 bains de toluène. (en veillant à la propreté du dernier bain) safsolvent 2 min 2 minAlcool 100° 80° 50°
Temps 2 min 2 min 2 min
On place la lame dans un bain du robinet pendant quelques secondes. On place la lame dans un bain e pendant quelques secondes7 Coloration à HE
Bain à 5 min
Rinçage eau du robinet 3 min
Rinçage eau distillée passage
Bain à r le cytoplasme en rose 3 minutes
Rinçage eau distillée passage
1 min 1 minLaisser tremper la lame dans le ---------
plusieurs semaines dans le toluène.BTSA 1 M55
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8 Montage
On place une goutte de safemont
soigneusement avec une pince.Critères de réussite .
Pas de pli sur la lame.
Pas de bulle au montage.
Bon contraste au niveau des noyaux.
Coupe complète de la pièce de l.
Epaisseur régulière dans la coupe
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