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Dans les deux cas un fluide appelé phase mobile parcourt un tube appelé colonne Cette colonne peut contenir des "granulés" poreux (colonne remplie) ou être
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20 jan 2010 · La chromatographie en phase liquide a permis de réaliser des analyses qui La phase mobile poussée par une pompe sous haute pression
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de préférence « de haute performance » [HPLC] Ainsi jusqu'à ces années 1958-1960 la chromatographie en phase liquide sur colonne (CL)
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une forte pression sur la phase mobile La CLHP Chromatographie Liquide à Haute Performance a donc été longtemps appelée Chromatographie Liquide sous
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Chromatographie en phase liquide haute pression Anglais LHHHHH HPLC High Performance (or High Pressure) Liquid Chromatography Applications médicales
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analytique la chromatographie liquide à haute performance à polarité de phase inversée (HPLC) L'objectif de cette étude est d'optimiser une méthode de
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la phase stationnaire est soit un solide soit un liquide (fixé sur un support La chromatographie liquide haute performance est très utilisée dans tous
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La séparation est réalisée sur colonne Xbridge® avec une phase acétate d'ammonium pH 4 / acétonitrile (10/90 v/v) en mode isocratique La détection est réalisée
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3) Influence du pH de la phase mobile la chromatographie en phase liquide de charge car travailler sous haute pression est toujours synonyme de
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CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC) I) Principe de la chromatographie La chromatographie est une méthode de séparation des constituants d'un mélange même très complexe Il existe trois principaux types de chromatographie: • la chromatographie en phase gazeuse (CPG) • la chromatographie en phase liquide à
Chromatographie en phase liquide à haute performance
La chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) appelée plus fréquemment par l'abréviation anglaise HPLC ( high performance liquid chromatography ou plus rarement high pressure liquid chromatography ) (voir Figure 1 et 2 à la fin du cours) est une technique
CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC)
CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE HAUTE PERFORMANCE (HPLC) I) Principe de la chromatographie La chromatographie est une méthode de séparation des constituants d'un mélange même très complexe La chromatographie en phase liquide a permis de réaliser des analyses qui n'étaient
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la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP ou HPLC en anglais) ; la chromatographie en phase supercritique ou fluide supercritique (CPS ou SFC en anglais) On peut aussi les nommer selon les interactions développées par la phase stationnaire : la chromatographie chirale (qui est soit de la CPG soit de la CPL) ;
Qu'est-ce que la chromatographie liquide à haute performance ?
La chromatographie liquide à haute performance, souvent appelée du nom de son abréviation CLHP-HPLC en langue anglaise-constitue une technique analytique très générale d'emploi.
Quels sont les composants d’un système de chromatographie liquide haute performance ?
Les composants d’un système de chromatographie liquide haute performance (HPLC) de base sont représentés de manière simplifiée à la figure E. Un réservoir contient le solvant (appelé phase mobile, car il se déplace).
Quels sont les avantages de la chromatographie en phase liquide ?
2. Chromatographie en phase liquide sur microcolonnes Analogue à la chromatographie sur colonne en phase gazeuse. Avantages - économie de solvant; - produits utilisés en quantité réduite; - temps de séparation beaucoup plus courts.
Quels sont les différents types de chromatographie ?
?la chromatographie en phase gazeuse (CPG ou GC en anglais) également appelée CPV (chromatographie en phase vapeur) ; ?la chromatographie en phase liquide (CPL ou LC en anglais) ; Pr. MEGHABAR Rachid (rachidmeghabar@yahoo.fr; meghabarrachid@gmail.com) ?la chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP ou HPLC en anglais) ;
Introduction
X. Bataille - ENCPB - 2008
Principe de la CLHP
Séparation de constituants dans un
mélange complexeMise en solution dans un solvant ou un mélange de solvant (éluant)Analyse qualitativeAnalyse quantitative
X. Bataille - ENCPB - 2008
X. Bataille - ENCPB - 2008Principe
X. Bataille - ENCPB - 2008Schéma
X. Bataille - ENCPB - 2008CLHP
Apparition: années 1950Chromatographie:
séparation et quantificationLiquide: travail en solutionHaute performance:Grande efficacité de la
séparationX. Bataille - ENCPB - 2008
Comparaison CPG-CLHPCPG: Chromatographie en Phase
Gazeuse : ?composés volatils,
?faibles masses molairesCLHP: ?toutes molécules trouvent un solvant pour y être dissoutes : méthode universelle
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Exemple de chromatogramme
Rétention
différéeX. Bataille - ENCPB - 2008
Performance - EfficacitéNombre de plateaux théoriquesN> 2000 2 2 0 1/216 5,54
r r tht tNw w( ) ( )X. Bataille - ENCPB - 2008
Résolution
R ~ 1,5
0 0 1/2 1/2
2 1,18
A B A BA B A Br r r rt t t tRw w w w
X. Bataille - ENCPB - 2008Asymétrie
As = A/B
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Autres paramètres
Temps de rétention réduit : t"
R= t R- t 0Facteur de capacité :
00 2 2tttk R- 00 1 1tttk R-X. Bataille - ENCPB - 2008
Temps mort (t
mou t 0) Temps que met un produit pour traverser la colonnesans être retenu.Se calcule si on connaît la porositéde la colonne, définie par :Le temps mortdépend des caractéristiques de la colonne: la longueur(l), son diamètre(2r), sa porosité(e) et du débitimposé par la pompe (d).
3 -1éluant
m 2 2 colonne vide / cm .min /minε = / cm
π /cm´=´ ´V
d t V l r 2 m l r t dX. Bataille - ENCPB - 2008
Autres paramètres
Sélectivité :Sous réserve de certaines approximations : NkkR S -=1""1 41aa,,12RRtt= a
X. Bataille - ENCPB - 2008Objectif
Séparation individuelle de tous les
constituants d"un mélangeDeux facteurs :?Miscibilité dans la phase mobile ?Interaction (affinité) avec la phase stationnaireX. Bataille - ENCPB - 2008
Principe d"une
séparationTemps d"analyse:
minimalPerformance: maximaleConstitution de la chaîne
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Les pompes
Délivrer un débit
constantsous une pressionélevée, constanteX. Bataille - ENCPB - 2008
Vanne d"injection
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Boucle d"injection
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Colonnes
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Détecteur UV
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Détecteur UV
X. Bataille - ENCPB - 2008Détecteur
réfractométriqueX. Bataille - ENCPB - 2008
Détecteur fluorimétrique
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Constitution de la
colonne Colonne remplie de billesBilles de silice tapissées d"un revêtementX. Bataille - ENCPB - 2008Billes
X. Bataille - ENCPB - 2008
Phase inverse (RP)
/ phase normaleComplémentarité
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Physico-chimie
de la rétentionCompromis entre:?phase stationnaire ?phase mobileInteractions intermoléculaires
EI Q EI QX. Bataille - ENCPB - 2008
Interactions
intermoléculairesX. Bataille - ENCPB - 2008
Moment dipolaire
X. Bataille - ENCPB - 2008
Autres moments
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Interaction dipôle-dipôle
X. Bataille - ENCPB - 2008
Interaction dipôle-dipôle
X. Bataille - ENCPB - 2008
Polarisabilité
X. Bataille - ENCPB - 2008
Interaction dipôle
permanent-dipôle induitX. Bataille - ENCPB - 2008
Dispersion
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Interactions
de Van der WaalsX. Bataille - ENCPB - 2008
Liaison hydrogène
X. Bataille - ENCPB - 2008Bilan
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" Magic » LogP octanol/eauConstante de partage octanol / eau
i,octanol i i,eauP = C
C OH HO H HO H HO H HO H HO H H OH HO H HO H HO H HO H HO H H OH HO H HO H HO H HO H HO H H OH OH OH OH OH OH OH OH OH?X. Bataille - ENCPB - 2008
Version Chemsketch
(ACDLABS)X. Bataille - ENCPB - 2008
LogP par la méthode de Villar
(Int. J. Quantum Chem., 44444444, 203 (1992))X. Bataille - ENCPB - 2008
LogP / Villar en PM3
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LogP par la méthode Ghose, Pritchett et Crippen (J. Computational Chem., 9999, 80 (1988))X. Bataille - ENCPB - 2008
Influence de la polarité
de l"éluantNotion de force éluante : ?Influence de la proportion de solvant apolaireIsothermes de van"t Hoff
i i i i ln k" ln + +H SRT R
fD ° D °
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Préparation d"une séparation
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Choix de l"éluant
X. Bataille - ENCPB - 2008
Gradient d"éluant
X. Bataille - ENCPB - 2008
Gradient
d"éluantX. Bataille - ENCPB - 2008
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X. Bataille - ENCPB - 2008Couplages
Identifier les produits sortants par : ?Spectrométrie de masse ?Résonance magnétique nucléaire ?Spectroscopie Infra-RougeX. Bataille - ENCPB - 2008
Couplage CLHP-SM
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Couplage CLHP-RMN
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Couplage CLHP-IR
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Optimisation d"une
séparation tanalyse le plus petit possibleRésolution: 1,7 > R > 1,4Asymétrie: centrée sur 1PerformanceélevéeRobustesse : une légère modification
des paramètres ne doit pas influer sur la qualité de la séparation et de l"analyse.X. Bataille - ENCPB - 2008
Facteurs d"optimisation Colonne (longueur, diamètre, particules, chaîne alkyle)Débit - PressionEluant (%polaire-apolaire, pH)Température
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Efficacité
Débit
Anisotropie
d"écoulementX. Bataille - ENCPB - 2008
Van-Deemter / Knox
Hauteur Equivalente en Plateaux
Théoriques :
NLH= 3Van Deemter : .Knox : . .
VD VD VD KnKn KnB
H A C v
vBH A v C vv= + +
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Efficacité d"une colonne (nombre de plateaux
théorique):Efficacité réelle (nombre de plateaux efficace) : avec 2221654,5)
wdsRRRtttN222"16"54,5") wdsRRR efftttN 0 "ttt RR-X. Bataille - ENCPB - 2008
Perte de charge
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Exemple : optimisation
de la séparation des bases de l"ADNX. Bataille - ENCPB - 2008
Stabilisation
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Choix judicieux des
concentrationsX. Bataille - ENCPB - 2008
Spectre UV-visible
X. Bataille - ENCPB - 2008
X. Bataille - ENCPB - 2008Débit
X. Bataille - ENCPB - 2008% MeOH
X. Bataille - ENCPB - 2008
pHX. Bataille - ENCPB - 2008
Température
X. Bataille - ENCPB - 2008Bilan
X. Bataille - ENCPB - 2008
Bilan de l"optimisation
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Applications de la CLHP
AnalytiqueCLHP Analytique ?Gamme d"étalonnage
?Ajouts dosés ?Etalon interneCLHP préparative?Dérivation en sortie ?Boucle d"injection à gros volumequotesdbs_dbs13.pdfusesText_19[PDF] narration visuelle histoire de l art
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