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Les méthodes d'isolement
et de purification des CyanophycéesPierre Armand ROGER et Pierre Adrien REYNAUD
O.R.S.T.O.M., Laboratoire de Microbiologie,
Centre de Dakar, B.P. 1386, Dakar, Sénégal
RÉSUMÉ
Revue bibliographique sur les méthodes d'axénisation desCyanophycées. 60 références.
MOTS CLÉS : Cyanobacteries - isolement - purification - revue. ABSTRACT Revue on Cyanophyceae purification methods. 60 references. KEY WORDS : Cyanobacteria - isolation - purification - review.INTRODUCTION
Les Cyanophycées sont des organismes unicellulaires ou filamenteux qui se développent le plus souvent sous forme de colonies gélatineuses ou de voiles. Plusieurs espèces sont souvent associées et le mucus qu'elles secrètent abrite une flore bactérienne importante. Il en résulte une certaine difficulté à isoler des souches axéniques et ce n'est qu'en 1913 que la première culture incontestablement pure fut obtenue par Pring- sheim.Depuis cette date de nombreux auteurs se sont
penchés sur le problème de la purification des Cyano- phycées et l'on pourra à ce sujet consulter les revues et articles généraux de Pringsheim (1946), Allen (1952), Lewin (1959), Gussev (1964), Tassigny (1969), Venkata- raman (1969). L'obtention d'une culture axénique s'effectue en deux stades : 1" Obtention d'une culture unialgale en passant ou non par l'intermédiaire d'une culture enrichie en Cyanophycées. 2" Purification de la culture unialgale.1. OBTENTION DE CULTURES UNIALGALES
La préparation de cultures unialgales de Cyano- phycées ne pose pas de difficultés importantes : un étalement sur boîte de Petri de suspensions-dilutions de sol ou d'eau, suivi de repiquages successifs, donne généralement de bons résultats. Toutefois, le dévelop-pement plus rapide de certains microorganismes (Bac- téries, autres Algues...) inhibe parfois le développement
des Cyanophycées (Gerloff, 1950). Il peut donc être nécessaire de procéder préalable- ment à une culture d'enrichissement. Différents facteurs tels que la température, la composition du milieu, certains composés organiques, peuvent être utilisés (Reynaud et al., 1977) : - Hilton et al. (1963) utilisent une gamme de tempé- rature entre 22°C et 38°C pour isoler sélectivement différentes espèces d'Algues. Les Cyanophycées sont favorisées par les températures les plus élevées. - Allen et al. (1968) montrent que dans un milieu minéral non sélectif qui à 25°C permet le développe- ment de Cyanophycées et de nombreuses Algues euca- ryotes, le développement des Algues eucaryotes est inhibé à 35°C. D'autre part, le nombre et la variété des Cyanophycées qui se développent dans le milieu sont plus importants à 35 qu'à 25°C. Enfin quand le milieu est carencé en azote, seules les Cyanophycées formant des hétérocystes se développent aussi bien à 25 qu'à 35°C. - Zehnder et al. (1958) signalent les propriétés inté- ressantes de l'actidione (cycloheximide) qui inhibe la croissance des Chlorophycées, Xantophycées et Bacilla- riophycées mais pas celle des Cyanophycées. Ce produit est aussi actif sur beaucoup de Champignons, spéciale- ment sur les Levures, par contre il est inactif sur lesBactéries.
Une fois les cultures enrichies obtenues, l'isolement des souches unialgales pourra être fait soit par repi- quages successifs soit par des techniques de micro- manipulation (Lewin, 1959). Il convient de signaler, pour cette dernière technique, le dispositif peu coûteux mis au point par Kemp (1970) qui est une version simplifiée du micro-manipulateur de Barer et Saunders-Singer (1948).2. OBTENTION DE SOUCHES AXENIQUES
La purification des cultures unialgales est difficile enraison des Bactéries contaminantes qui adhèrent à la Cah. ORSTOM, sér. Biol., vol. XII, no 2, 1977 : 121.128 121