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ou en ME les coupes examinées sont le fruit de procédures techniques qui requièrent plusieurs étapes successives : fixation
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TECHNIQUE HISTOLOGIQUE EN Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d'obtenir des tranches de section (coupes histologiques).
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
Le but de cette technique est d'éliminer l'eau contenue dans les organes par un TD N°2 : Techniques de préparation des coupes histologiques. Page 2 ...
FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
la confection des coupes histologiques comporte alors 3 étapes : - L - Le séchage de la préparation : en inclinant les lames et en les séchant au moyen ...
FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
Connaître en détail les techniques histologiques de routine et comprendre le rôle de Elle a pour but de permettre la réalisation de coupes fines (d'une ...
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
Pour l'étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait Le but de cette technique est d'éliminer l'eau contenue dans les organes
TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
différents éléments de la préparation. Comme les colorants sont en solution aqueuse les coupes doivent d'abord subir une réhydratation. Celle-ci est effectuée
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
Le plus souvent le matériel histologique (= cellules contenues dans un tissu) est fixé
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L'inclusion a pour but la réalisation de coupes histologiques. Le milieu d'inclusion le plus utilisé est la paraffine. Comme la paraffine est hydrophobe le.
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HISTOLOGIE : les COUPES dans des TISSUS VEGETAUX Une
En voici un exemple : il s'agit d'une coupe dans une tige d'Asparagus avec coloration et montage selon le processus déve-.
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technique des préparations histologiques ? › Les lames sont-elles de qualité suffisante (fixation des tissus épaisseur des coupes
Préparation des tissus : information générale
Préparation des tissus : information générale. Tissus inclus dans la paraffine. - Technique solidifiant les tissus et permettant de confectionner des coupes
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et d'isolation de tissus ou de cellules à partir de coupes histologiques ou de préparations cellulaires par microdissection laser (LCM).
Chapitre II : Méthodes d’étude de la cellule TD N°2
1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus
Les colorations histologiques - Université Paris-Saclay
Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d’obtenir des sections (coupes histologiques) de 3 à 5 microns d’épaisseur Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C) - La plupart des tissus sont transparents
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1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique [Figure 1] Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus
Déshydratation
Les échantillons fixés dans des solutions aqueuses ne peuvent être imprégnés en paraffine directement. L’eau des tissus doit être éliminée par déshydratation dans une succession de bains d’éthanol de concentration croissante (70%, 95% à 100%).
Clarification
Bien que le tissu soit maintenant essentiellement exempt d’eau, il ne peut toujours pas être imprégné dans la paraffine car celle-ci est non miscible dans l’éthanol. Il faut utiliser un solvant intermédiaire miscible à la fois dans l’éthanol et dans la paraffine. L’agent de clarification le plus couramment utilisé est le xylène.
Comment faire une coupe histologique ?
La préparation d’une coupe histologique consiste à réaliser des sections, c’est-à-dire des tranches très fines de tissus destinés à être observés par transparence au microscope. Les coupes à congélation présentent certains avantages que la technique en paraffine n’offre pas : la congélation permet une conservation optimale de l’ADN et de l’ARN.
Comment faire des coupes fines dans un tissu biologique ?
Le but est d’éliminer l’eau des tissus et de la remplacer par un milieu qui se solidifie pour permettre la réalisation de coupes fines (4 à 5µm). Pour cela, le tissu biologique doit être inclus dans une matrice dure (paraffine). Les principales étapes de ce processus sont la déshydratation, la clarification et l’imprégnation. Déshydratation
Comment faire des coupes de tissu?
Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C). - La plupart des tissus sont transparents ?Les colorationsréalisées sur lames, accentuent les contrastes pour pouvoir reconnaîtredifférents éléments du tissu. LES ETAPES DE LA COLORATION -Déparaffinage (toluène / xylène - éthanol)
Comment traiter les tissus biologiques ?
Traitement des tissus Le but est d’éliminer l’eau des tissus et de la remplacer par un milieu qui se solidifie pour permettre la réalisation de coupes fines (4 à 5µm). Pour cela, le tissu biologique doit être inclus dans une matrice dure (paraffine). Les principales étapes de ce processus sont la déshydratation, la clarification et l’imprégnation.
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technique de préparation des coupes histologiques
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LaPlateformed'HistologieetdeMicroscopieÉlectroniqueLaPlateformed'HistologieetdeMicroscopieÉlectroniqueoffreauxprofesseurs,chercheurs,cliniciensetétudiants,plusieursservicesd'histologieetdemicroscopieallantdelapréparationdeleurséchantillons biologiqueshumainsouanimauxàle uranalysemorphologiquehistologique,cellulaireetultrastructurale.LaPlateformedétientunsavoir-faireetuneexpertisepourlaréalisationdeprojetsnécessitantdestechniquesd-histopathologie,demorphologieultrastructurale,delocalisationsubcellulaireetd'is olationdetissusoudecellules àpartird ecoupeshistologi quesoud epréparatio nscellulairesparmicrodissectionlaser(LCM).LesapplicationsprimairesdelaPlateformesontlafixationdetissus,l-inclusion(paraffine,O.C.T.,EPON)etlacongélationrapide,laréalisationdecoupes(microtome,cr yostat,ultramicrotomeetcryo-ultramicrotome)etle scolo rationsderoutine(H&E,trichromedeMasson,uranyl-acétateetlecitratedeplomb).Cescolorationssontgénéralementlespremièresétapesdu processusp ermettantl'examenmicroscopiqued estissus.L-équipedelaPlateformeoffreaussiunserv iced-immunohi stochimie,d'immunofluorescenceetd'immunogoldpourévaluerl-expressiond-unconstituantcellulaireetsubcellulairespécifique.Ces techniquesp euventaussiêtreassociéesàd'autr esactivitésdéveloppéesparlaPlateformecommelamicrodissectionaulaser.LaPlateformeestsituéesurdeuxsitesàlaFacultédemédecineetdessciencesdelasanté(FMSS)del'UniversitédeSherbrooke .Leserv iced'histologieestsituéau localZ8-2007duPavillondeRechercheappliquéeauCancer (PRAC).Onyretro uveunmicrod issecteurlasercoupléàunmicroscop ei nversé,uncirculateur,uncolorateurautomatiséainsiq u'unhistocentrepourl'enrobagedestissus,unmicrotomeetplusieurséquipementspériphériquesnécessairespourlesanalysestissulairesetcellulaires.Leservicedemicroscopieélectroniqueestlocaliséaulocal9418au9eétagedel'ai le4delaFMSS. Onyretro uveunmicroscopeélectroniqueàtransmissionaveccaméradigitale,unultramicrotome,uncryo-ultramicrotomeetunappareilàpointcritique(CPD,CriticalPointDryer).D-autresappareilsspécialiséssontégalementdisponiblesparlebiaisduCentredecaractérisationdesmatériauxdel-UniversitédeSherbrookecommelamiscroscopieélectroniqueàbalayage.ServicesspécifiquesoffertsparlaPlateformeettarification
• Circulationdestissus:Suiteàunefixatio nd anslaparaformaldéhyde,lestissussontdéshydratésafindepermettreleur inclusion danslap araffine.LestissuscirculésàlaPlateformedoiventêtrefixésdanslaparaformaldhyde.Lestissusayantétéfixésparuneautreméthode(Bouin,formaline,formol)seronttraitésdefaçonindividuelle.• Préparationdestissuspourdesanalysesultrastructurales:
Préparationstandard,fixation,post-fixation,déshydratation,infiltration.• Inclusiondetissusdanslaparaffine:Suiteàlacirculation,lestissussontinclusdansdelaparaffineafindepermettre descoupesti ssulaires trèsminces(4-5µm).Lestissusfixés suivantcetteméthodenepeuventpasêtresutiliséspourdétecterlesantigèneslabilesouisolerl-ADN/ARN(option:congélationdestissusfrais).
• Congélationdestissusfrais:lestissusfraissontinclusdansuncomposé"d'O.C.T.».Cettetechniquesolidifielestiss uspermettantdescoupestrèsminc es.Lestiss usnonfixésetcongelésconserventleurantigénicitémaisdémontrentunepréservati onmorphologiqueinférieure.Cetypedecongélationconvientàladétectiond'antigèneslabilesetàl'isolementdel'ADN/ARN.• Préparationdetissuspouranalysed'immunolocalisationultrastructurale:Fixationlégèredestissuset congélationrapideo uincl usiondansdesrési nespermettant depréserverl-immunoréactivitédestissus.• Inclusiond'untissudansl'EPON:Inclusiondeséchantillonsbiologiquesdansl'EPONafinderéaliserdesétudesmorphologiquesàl'échelleultrastructurale.• Coupeshistologiquesaumicrotome:Coupestissulairestrèsminces(4-5µm)permettantlesétudesmorphologiques,histologiquesetimmunohistochimiques.• Coupesaucryostat :Coupestissulairestrèsminces(4-5µm)provenantd etissusfraiscongelésdansl'O.C.T.Permetd'obtenirundiagnosticrapideoupallierauxproblèmesdefixationmenaçantl'intégri tédesconstituantscellulaires.Cependant,lamorphologiedestissusn'estpasmaintenuedemanièreoptimale.• Coupesauultramicrotomeetcryo-ultramicrotome:Lacoup eàl'ultramicrotome des spécimensbiologiquesestuneétapepréalableessentielleafindeproduiredessectionssemietultra-fines(40-200nmd-épaisseur).Deplus,unecryo-chambrepermetdecouperàbassetempérature.Cessectionspeuventensuiteêtreobservéesenmicroscopieélectronique.• Colorationderoutine:Premièresétapesduprocessuspermettantl'examenmicroscopiquedestissuspouridentifiercertainsconstituantscellulaires.Lescolorationsdisponiblespourl'histologiesontl'hématoxylineetéosine,l'alcianbleu,l'acidepériodiquedeShiff,trichromedeMasson, SiriusRedetOilr ed-O.Ledé veloppeme ntdecolorationsparticulièresouspécialiséesestpossib lesurdemande.Pourlamicrosc opieé lectronique,lescolorationsdisponiblessontl'uranyl-acétateetlecitratedeplomb.• Microdissectionaulaser:Permetd'isolerun esous-populationdecellulesausei nd'unenvironnementtissulairecomplexeetprocéderàdesétudespluspousséesd-analysedephénotypeetdegénotype.• Immuno-cytolocalisation:Permetdedéterminerlalocalisationcellulaireouintracellulairedeprotéinesreconnuesdemanièrespécifiqueparleuranticorps.Lestechniquesutiliséesauniveauhistologiquesontl'immunohistochimieetl'immunofluorescencealorsquepourlamicroscopieélectronique,latechniquerequiertdesanticorpsmarquéàl'or(immunogold).
LesservicesdelaPlateformesontoffertsauxmembresdelaFMSSàdestarifspréférentiels.LescoûtssontprésentésdansletableaudelapagesuivantepourlesclientsdelaFMSSetdeslaboratoiresacadémiquescanadiensouétrangers.VeuillezprendrecontactavecladirectricedesopérationsdelaPlateforme,MmeAnneVézina(Anne.Vezina@USherbrooke.ca),pourunesoumissionindividualiséeoupourdesinformationssurlestarifspourlescompagnies. Pourtouteinformationsupplémentaire,vouspouvezcontacternosresponsablesscientifiques,PrNathaliePerreault(Nathalie.perreault@usherbrooke.ca)pourl'histologieouPrJean-FrançoisBeaulieu(Jean-François.Beaulieu@usherbrooke.ca)pour lamicroscopie électr onique.Vouspouvezaussivisiternotresiteweb:www.usherbrooke.ca/dep-anatomie-biologie-cellulaire/recherche/plateforme-danalyses/
4Quelquesexemplesd'histologiedetissusencolorationH&Eetdecolorationsderoutine. • Visualisationetévaluationdeconstituantscellulairesspécifiquesàl'aided'anticorpsparlestechniquesd'immunofluorescenceetd'immunohistochimie.
Poumons Foie Pancréas Alcian bleu PAS Estomac Intestin grêle Côlon5• Visualisationultrastructuraledeconstituantscellulaires.Publicationsassociées1. RoySAB,LangloisMJ,CarrierJC,BoudreauF,RivardNandPerreaultN.2012.DualregulatoryroleforPteninspecificationofintestinalendocrinecellsubtypes.WorldJofGastro18(14):1579-1589.2. MaloumF,AllaireJM,Gagné-SansfaçonJ,RoyE,BellevilleK,SarretP,MorissetJ,CarrierJC,MishinaY,KaestnerKHandPerreaultN.2011.EpithelialBmpsignalingisrequiredforproperspecificationofepithelialcelllineagesandgastricendocrinecells.AmJPhysiol300(6):G1065-79.3. AllaireJ,DarsignyM,MarcouxSS,RoySAB,SchmouthJF,UmansL,ZwijsenA,BoudreauFandPerreaultN.20 11.LossofSmad5 leadsto disassemblyofth eapicaljunction alcomple xandincreasingsusceptibilitytoexperimentalcolitis.AmJPhysiol300(4):G586-97.4. LussierCR,BrialF,RoySAB,LangloisMJ,VerduEF,RivardN,PerreaultNandBoudreauF.2010.LossofHepatocyte-Nuclear-Factor-1αImpactsonadultmouseintestinalepithelialcellgrowthandcelllineagesdifferentiation.PloSOne24(8):12378.5. BenoitYD,ParéF,FrancoeurC,JeanD,TremblayE,BoudreauF,EscaffitEandBeaulieuJF.2010.CooperationbetweenHNF-1alpha,Cdx2,andGA TA-4in initiati nganenterocyticdifferentiationprograminanormalhumanintestinalepithelialprogenitorcellline.AmJPhysiol298(4):G504-17.6. LussierCR,BabeuJP,AuclairBA,PerreaultNandBoudreauF.2008.Hepatocytenuclearfactor-4alpha(HNF-4α)pro motesdifferentiationofin testinalepithelialcellsinco-culturesystem.AmJPhysiol294(2):G418-28.7. AuclairBA,BenoitYD,Ri vardN,MishinaYandPerreaultN.2007.Bonemorphogeneticproteinsignalingisessentialforter minal differentiationofthe intestinalsecr etorycelllineage.Gastroenterology133:887-896.8. BoudreauF,LussierCR,MongrainS,DarsignyM,DrouinJL,DoyonG,RanSuhE,BeaulieuJF,RivardNandPerreaultN.2007.LossofcathepsinLactivitypromotesclaudin-1overexpressionandintestinalneoplasia.FASEBJ21(14):3853-65.9. GroulxJF,GagnéD,BenoitYD,MartelD,BasoraN,BeaulieuJF.2011.CollagenVIisabasementmembranecomponentthatregulatesepithelialcell-fibronectininteractions.MatrixBiol.30(3):195-206.Microscopie électronique à transmission Microscopie électronique à balayage Immunolocalisation ultrasctructurale
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