Manuel de prélèvement
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Fiche 1 : Les méthodes dobservation
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TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
ou en ME les coupes examinées sont le fruit de procédures techniques qui requièrent plusieurs étapes successives : fixation
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
TECHNIQUE HISTOLOGIQUE EN Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d'obtenir des tranches de section (coupes histologiques).
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
Le but de cette technique est d'éliminer l'eau contenue dans les organes par un TD N°2 : Techniques de préparation des coupes histologiques. Page 2 ...
FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
la confection des coupes histologiques comporte alors 3 étapes : - L - Le séchage de la préparation : en inclinant les lames et en les séchant au moyen ...
FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
Connaître en détail les techniques histologiques de routine et comprendre le rôle de Elle a pour but de permettre la réalisation de coupes fines (d'une ...
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
Pour l'étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait Le but de cette technique est d'éliminer l'eau contenue dans les organes
TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
différents éléments de la préparation. Comme les colorants sont en solution aqueuse les coupes doivent d'abord subir une réhydratation. Celle-ci est effectuée
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
Le plus souvent le matériel histologique (= cellules contenues dans un tissu) est fixé
Aperçu des principales colorations histologiques et intérêt pour le
L'inclusion a pour but la réalisation de coupes histologiques. Le milieu d'inclusion le plus utilisé est la paraffine. Comme la paraffine est hydrophobe le.
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A. Fixation macroscopie
HISTOLOGIE : les COUPES dans des TISSUS VEGETAUX Une
En voici un exemple : il s'agit d'une coupe dans une tige d'Asparagus avec coloration et montage selon le processus déve-.
Guide sur lassurance qualité en anatomopathologie - Phases pré
technique des préparations histologiques ? › Les lames sont-elles de qualité suffisante (fixation des tissus épaisseur des coupes
Préparation des tissus : information générale
Préparation des tissus : information générale. Tissus inclus dans la paraffine. - Technique solidifiant les tissus et permettant de confectionner des coupes
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et d'isolation de tissus ou de cellules à partir de coupes histologiques ou de préparations cellulaires par microdissection laser (LCM).
Chapitre II : Méthodes d’étude de la cellule TD N°2
1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus
Les colorations histologiques - Université Paris-Saclay
Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d’obtenir des sections (coupes histologiques) de 3 à 5 microns d’épaisseur Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C) - La plupart des tissus sont transparents
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1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique [Figure 1] Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus
Déshydratation
Les échantillons fixés dans des solutions aqueuses ne peuvent être imprégnés en paraffine directement. L’eau des tissus doit être éliminée par déshydratation dans une succession de bains d’éthanol de concentration croissante (70%, 95% à 100%).
Clarification
Bien que le tissu soit maintenant essentiellement exempt d’eau, il ne peut toujours pas être imprégné dans la paraffine car celle-ci est non miscible dans l’éthanol. Il faut utiliser un solvant intermédiaire miscible à la fois dans l’éthanol et dans la paraffine. L’agent de clarification le plus couramment utilisé est le xylène.
Comment faire une coupe histologique ?
La préparation d’une coupe histologique consiste à réaliser des sections, c’est-à-dire des tranches très fines de tissus destinés à être observés par transparence au microscope. Les coupes à congélation présentent certains avantages que la technique en paraffine n’offre pas : la congélation permet une conservation optimale de l’ADN et de l’ARN.
Comment faire des coupes fines dans un tissu biologique ?
Le but est d’éliminer l’eau des tissus et de la remplacer par un milieu qui se solidifie pour permettre la réalisation de coupes fines (4 à 5µm). Pour cela, le tissu biologique doit être inclus dans une matrice dure (paraffine). Les principales étapes de ce processus sont la déshydratation, la clarification et l’imprégnation. Déshydratation
Comment faire des coupes de tissu?
Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C). - La plupart des tissus sont transparents ?Les colorationsréalisées sur lames, accentuent les contrastes pour pouvoir reconnaîtredifférents éléments du tissu. LES ETAPES DE LA COLORATION -Déparaffinage (toluène / xylène - éthanol)
Comment traiter les tissus biologiques ?
Traitement des tissus Le but est d’éliminer l’eau des tissus et de la remplacer par un milieu qui se solidifie pour permettre la réalisation de coupes fines (4 à 5µm). Pour cela, le tissu biologique doit être inclus dans une matrice dure (paraffine). Les principales étapes de ce processus sont la déshydratation, la clarification et l’imprégnation.
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technique de préparation des coupes histologiques
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1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020
1FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE
- HISTOLOGIQUE -OBJECTIFS SPECIFIQUES :
¾ Décrire les étapes de
¾ Connaître en détail les techniques histologiques de routine et comprendre le rôle de chaque réactif utilisé¾ Comprendre la c
MATERIELS
VERRERIES
Lame & Lamelle
cuve de coloration en verre (type Coplin & type Hellendhal)Cuve de rinçage en verre
Cristallisoir
Bécher
Entonnoir
Erlenmeyer
Compte-goutte Pipette Pasteur
MATERIELS
Microtome
Etuve - Faculté de médecine1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020
2Plaque chauffante Barres de Leuckart
Microscope photonique
REACTIFS
Formol
Liquide de Bouin
Alcool absolu à 100°
Eau distillée
Xylène
Toluène
Paraffine
Colorants (Hématéine éosine Safran -vert lumière-Baume de Canada
Nombre de postes : 15 postes par binôme
- Faculté de médecine1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020
3 - Faculté de médecine1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020
411 ETAPES
1. Prélèvement
Le prélèvement doit se faire aussi délicatement que pos tissulaire. Une fois obtenu, ce prélèvement doit immédiatement être immergé dans un grand volume de liquide fixateur.2. Fixation
La fixation a pour but la conservation des structures dans un état aussi proche que
possible de leur état vivant, avec arrêt de toutes activités mitotique et enzymatique. Ainsi que
le durcissement de la pièce anatomique. Les liquides fixateurs les plus utilisés en pratique courante sont le formol ou le liquide de Bouin La durée de la fixation varie selon le volume des prélèvements.3. Déshydratation
fine par la suite sans perdre la structure cellulaire initiale au moment de la rupture de la rations croissantes (de lcool à dilué .4. Imprégnation
le xylène ou le toluène, solvant intermédiaire5. Inclusion
Le prélèvement baigne dans de la paraffine fondue (chauffée à 56°C pendant 4h dans une étuve) et qui infiltre alors toutes les cellules.Remarque :
laboratoires de routine - Faculté de médecine1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020
56. Mise en bloc
liquide est coulée dans un petit moule en métal" Barres de Leuckart ». Après refroidissement (dans un congélateur pendant toute une nuit),
paraffine dur prélevée est rigide en pr cellule composant le tissu. OU7. Confection des coupes histologiques
Le passage du bloc de paraffine dans un microtome permet de réaliser des sections de 2 à5 µm disposées en séries ré
- Faculté de médecine1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020
6 la confection des coupes histologiques comporte alors 3 étapes : - : de segments de ruban de paraffine sur une lame de verre contenant un eau albumineuse. - Le collage : les lames de verre sont placées sur une plaque chauffante, réglée à une température de 40°C, pendant 15 min. - Le séchage de la préparation : en inclinant les lames et en les séchant au moyen de papier buvard absorbant.8. Déparaffinage
-à-dire plaque chauffante (de 45 à 60°C) périphérique.Plaque chauffante
9. Réhydratation
50eau distillée.
10. Coloration
constituants tissulaires (noyau, membrane plasmique et cytoplasme).10-1 Par histochimie :
La coloration se base sur des réactions chimiques connues entre des réactifs de laboratoire (colorants) et des composants des tissus étudiés. Ex1 : coloration hématéine- éosine-safran (HES) est un colorant basique se fixe par affinité aux molécules acides (ADN) permettant de colorer le noyau, de colorer le cytoplasme et le safran se fixe par affinité entre les fibres de collagène. Ex 2 : coloration Bleu Alcian ou du Rouge Mucicarmin : Le mucus présent dans certains tissus peut être coloré par la révélation des mucopolysaccharides acides respectivement en bleu ou en rouge. Ex 3 : coloration à périodique de Schiff (PAS) met en évidence les glucides par un colorant rouge à pourpre. Permettant de mieux visualiser le glycogène ou les mucines contenus dans certaines cellules ou encore les lames basales des épithéliums qui sont riches en glycoprotéines - Faculté de médecine1ère année de médecine Année universitaire : 2019/2020
710-2 Par histochimie enzymatique : la distribution tissulaire de certaines enzymes
spécifiques peut être étudiée sur des coupes fraiches en y ajoutant un substrat spécifique de cet enzyme. un produit de réaction primaire, insoluble et pouvant être mis en évidence par une coloration. La plupart des systèmes enzymatiques sont détruits lors de la fixation, enzymatique sont le plus souvent réalisées sur coupes en congélation. Ces techniques permettent de10-3 Par Immunohistochimie : Des anticorps spécifiques sont utilisés pour venir se
fixer à une molécule (antigène) de la coupe histologique. partir de la protéine purifiée est couplé à:9 une enzyme (peroxydase) qui catalyse une réaction avec production de couleur
9 un marqueur (fluorophore), le plus souvent fluorescent. On parle alors
à fluorescence.
11. Montage & Observation microscopique
Les coupes colorées sont montées entre lame et lamelle avec une résine synthétique
On obtient, ainsi, une préparation histologique (ou par abus de langage : une lame histologique) prête à être observée au microscope optique.quotesdbs_dbs44.pdfusesText_44[PDF] coupe au microtome
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