Manuel de prélèvement
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coupes histologiques ou de préparations cellulaires par microdissection ... Cette technique solidifie les tissus permettant des coupes très minces. Les ...
Fiche 1 : Les méthodes dobservation
Technique simple. Technique complexe i. Les microscopes à sondes locales. Il en Ces deux contraintes identifiées la préparation des coupes histologiques se.
MODULE 1 – Introduction Comment préparer un prélèvement de
Cette coloration est la technique de contraste fondamentale pour tout examen microscopique histologique La dernière étape de la préparation des lames ...
Contribution a letude dagents pathogenes de lhuitre creuse
7 mars 2018 Les techniques d'histologie ... technique de préparation des lames (superposition de particules sur les cellules). Les coupes histologiques ...
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L'inclusion a pour but la réalisation de coupes histologiques. Le milieu d lors de son analyse initiale sur les coupes de technique standard. Les ...
TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
ou en ME les coupes examinées sont le fruit de procédures techniques qui requièrent plusieurs étapes successives : fixation
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
TECHNIQUE HISTOLOGIQUE EN Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d'obtenir des tranches de section (coupes histologiques).
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
Le but de cette technique est d'éliminer l'eau contenue dans les organes par un TD N°2 : Techniques de préparation des coupes histologiques. Page 2 ...
FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
la confection des coupes histologiques comporte alors 3 étapes : - L - Le séchage de la préparation : en inclinant les lames et en les séchant au moyen ...
FICHE TECHNIQUE TP HISTOLOGIE - PREPARATION DUNE
Connaître en détail les techniques histologiques de routine et comprendre le rôle de Elle a pour but de permettre la réalisation de coupes fines (d'une ...
Université Frères Mentouri Constantine 1 1ère année LMD / TC / SNV
Pour l'étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait Le but de cette technique est d'éliminer l'eau contenue dans les organes
TP 7 Histologie Les techniques de MO et de ME sont utilisées en
différents éléments de la préparation. Comme les colorants sont en solution aqueuse les coupes doivent d'abord subir une réhydratation. Celle-ci est effectuée
Les techniques de préparation des coupes pour les microscopies
Le plus souvent le matériel histologique (= cellules contenues dans un tissu) est fixé
Aperçu des principales colorations histologiques et intérêt pour le
L'inclusion a pour but la réalisation de coupes histologiques. Le milieu d'inclusion le plus utilisé est la paraffine. Comme la paraffine est hydrophobe le.
Sans titre
A. Fixation macroscopie
HISTOLOGIE : les COUPES dans des TISSUS VEGETAUX Une
En voici un exemple : il s'agit d'une coupe dans une tige d'Asparagus avec coloration et montage selon le processus déve-.
Guide sur lassurance qualité en anatomopathologie - Phases pré
technique des préparations histologiques ? › Les lames sont-elles de qualité suffisante (fixation des tissus épaisseur des coupes
Préparation des tissus : information générale
Préparation des tissus : information générale. Tissus inclus dans la paraffine. - Technique solidifiant les tissus et permettant de confectionner des coupes
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et d'isolation de tissus ou de cellules à partir de coupes histologiques ou de préparations cellulaires par microdissection laser (LCM).
Chapitre II : Méthodes d’étude de la cellule TD N°2
1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus
Les colorations histologiques - Université Paris-Saclay
Les coupes du bloc de paraffine sont réalisées avec un microtome permettant d’obtenir des sections (coupes histologiques) de 3 à 5 microns d’épaisseur Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C) - La plupart des tissus sont transparents
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1- Préparation des coupes pour observation au microscope optique [Figure 1] Pour l’étude histologique classique la préparation des coupes fines se fait en plusieurs étapes : a) Prélèvement Le prélèvement effectué sur un organe doit se faire aussi délicatement que possible afin de ne pas meurtrir les tissus
Déshydratation
Les échantillons fixés dans des solutions aqueuses ne peuvent être imprégnés en paraffine directement. L’eau des tissus doit être éliminée par déshydratation dans une succession de bains d’éthanol de concentration croissante (70%, 95% à 100%).
Clarification
Bien que le tissu soit maintenant essentiellement exempt d’eau, il ne peut toujours pas être imprégné dans la paraffine car celle-ci est non miscible dans l’éthanol. Il faut utiliser un solvant intermédiaire miscible à la fois dans l’éthanol et dans la paraffine. L’agent de clarification le plus couramment utilisé est le xylène.
Comment faire une coupe histologique ?
La préparation d’une coupe histologique consiste à réaliser des sections, c’est-à-dire des tranches très fines de tissus destinés à être observés par transparence au microscope. Les coupes à congélation présentent certains avantages que la technique en paraffine n’offre pas : la congélation permet une conservation optimale de l’ADN et de l’ARN.
Comment faire des coupes fines dans un tissu biologique ?
Le but est d’éliminer l’eau des tissus et de la remplacer par un milieu qui se solidifie pour permettre la réalisation de coupes fines (4 à 5µm). Pour cela, le tissu biologique doit être inclus dans une matrice dure (paraffine). Les principales étapes de ce processus sont la déshydratation, la clarification et l’imprégnation. Déshydratation
Comment faire des coupes de tissu?
Les coupes sont recueillies sur des lames de verre et mises à sécher (sur la nuit à 40-45°C ou 1H max 60°C). - La plupart des tissus sont transparents ?Les colorationsréalisées sur lames, accentuent les contrastes pour pouvoir reconnaîtredifférents éléments du tissu. LES ETAPES DE LA COLORATION -Déparaffinage (toluène / xylène - éthanol)
Comment traiter les tissus biologiques ?
Traitement des tissus Le but est d’éliminer l’eau des tissus et de la remplacer par un milieu qui se solidifie pour permettre la réalisation de coupes fines (4 à 5µm). Pour cela, le tissu biologique doit être inclus dans une matrice dure (paraffine). Les principales étapes de ce processus sont la déshydratation, la clarification et l’imprégnation.
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technique de préparation des coupes histologiques
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Plateforme d'Histologie _ IRIC
Les colorations histologiques:
colorations de routine et colorations spécialesLES ETAPES
depuis le prélèvement jusqu'au bloc d'uneautopsie.Lafixationapourbutslaconservationdes
structuresetledurcissementdestissus. estlaparaffine.Commelaparaffineesthydrophobe,le
paraffinefondue(inclusion). estincluse.LES ETAPES
depuis le prélèvement jusqu'au blocCirculation du tissu
imprégnation à la paraffine ÉtapesRéactifsDurée (min)Température (ºC)1Fixateur200< 40
2Éthanol 50%2045
3Éthanol3045
4Éthanol4045
5Éthanol4045
6Éthanol5045
7Éthanol 100%5045
8Toluène4545
9Toluène4545
10Toluène4545
11Paraffine6060
12Paraffine6060
13Paraffine6060
LES ETAPES
depuis le bloc jusqu'à la lame colorée micronsd'épaisseur. lanuità40-45°Cou1Hmax60°C). -LaplupartdestissussonttransparentsLES ETAPES DE LA COLORATION
-Déparaffinage (toluène / xylène -éthanol) -Hydratation -Colorationà proprement dit (routine ou spéciale) -Déshydratation (éthanol)Éclaircissement (toluène / xylène)
xylène.Le pathologiste et le choix des colorations
serainstitué. unevisionglobaledelamorphologiedestissus (noyau,cytoplasmeetcollagène).Départements de
Pathologie
Ayez les bons outils de
travail !!!Seule une bonne
utilisation de contrôles adéquats permet d'obtenir des résultats explicables et reproductibles en histologie.Facteurs influant la distribution des colorants
dans les tissus et la qualité de la lame en général matérield'analyse.Les colorations de routine (topographiques)
H&E différentséléments. ReinPoumon
Les colorations de routine (topographiques)
H&E distincteLesNucleolesdevraientêtreviolacés.
Microscopic Quality Control of Hematoxylin and EosinPolymorphonucléaire
Plasmocytes
Muqueuse colique
Les colorations de routine (topographiques)
HPS Hématoxyline Phloxine Safran (milieu francophone) cytoplasmeJGH,HMR,SacréCoeurbienquefrancophones
demandentleHE.Colorant /
SolvantTemps
Xylène 5'00''
Xylène5'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
Lavage0'20''
Lavage1'00''
Hématoxyline0'55''
Lavage0'20''
Lavage0'20''
Bicarbonate
Sodium 0.5%0'20''
Lavage0'15''
Lavage3'30''
Éosine0'45''
ETOH 95%0'30''
ABS ETOH0'40''
ABS ETHO2'40''
Xylène2'00''
Xylène2'00''
Xylène2'00''Colorant /
SolvantTemps
Xylène 3'00''
Xylène3'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
ABS ETOH2'00''
Lavage0'10''
Lavage0'40''
Hématoxyline0'50''
Lavage0'25''
Bicarbonate
Sodium 0.5%0'12''
Lavage0'15''
Lavage3'00''
Phloxine0'15''
Lavage0'18''
ETOH 95%0'30''
ABS ETOH0'30''
ABS ETHO0'45''
Safran5'00''
ABS ETOH0'45''
ABS ETHO0'45''
ABS ETOH0'45''
Xylène0'45''
Xylène0'45''
Xylène1'00''
Les colorations spéciales
standard. etc).Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
systèmenerveuxcentral.Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Trichrome de Masson
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Cette méthode est très populaire. Utile dans l'étude de la pathologie du coeur (infarctus), foie (cirrhose ) , rein (fibrose glomérulaire) La plupart des recettes colore en rouge la kératine et les fibres musculaires, en bleu ou vert le collagène et l'os, en rouge-clair ou rose les cytoplasmes, et en noir les noyaux de cellules.Résultats:
Noyaux, chromatine et nucléole..............bleu foncé à noir Globules rouges..............................................................rougeArtère
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Trichrome de Masson
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Cette méthode est très populaire. Utile dans l'étude de la pathologie du coeur (infarctus), foie (cirrhose ) , rein (fibrose glomérulaire) La plupart des recettes colore en rouge la kératine et les fibres musculaires, en bleu ou vert le collagène et l'os, en rouge-clair ou rose les cytoplasmes, et en noir les noyaux de cellules.Résultats:
Noyaux, chromatine et nucléole..............bleu foncé à noir Globules rouges..............................................................rougeDéparaffiner et réhydrater
Mordancer au Bouin 1H 56
CRefroidir et laver 20mn
Hematox. Weigert filtrée
LaverBiebrich scarlet fuchsine acide 2mn
LaverAc. Phosphomolibdique-phosphotungstique 10mn
Bleu aniline 30
-40 secRincer
Acide acétique 1%
Déshydrater, monter
Les colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Elle est parfois demandée en pathologie cardiovasculaire.MOVATT
Noyaux ...................................................................bleu à noir Cytoplasme .....................................................................rouge Collagène et fibres réticulaires-....................jaune verdatre Fibrine ...............................................................rouge intense Mucine et substance de fond..........................bleu limette OsLes colorations spéciales
Mise en évidence des fibres conjonctives
Cette coloration met en évidence les fibres de
collagènes. Elle est parfois demandée en pathologie cardiovasculaire.MOVATT
Noyaux ...................................................................bleu à noir Cytoplasme .....................................................................rouge Collagène et fibres réticulaires.....................jaune verdâtre Fibrine ...............................................................rouge intense Mucine et substance de fond..........................bleu limetteDéparaffiner et réhydrater
Bleu Alcian 15mn
Laver 5mn
Alcool alcalin 1H
Laver 15mn et rincer
Hématoxyline 12
-15 mn Rincer et différencier dans chlorure de fer 2% 30sThiosulfate sodium 1mn
LaverCrocéine scarlet -ac. Fuchsine 2mn
Rincer à l'eau distillée pls fois
Rincer Acide acétique 0.5%
5% Ac. Phosphotungstique aqueux 2X 5mn
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