[PDF] Mesure de l’activité enzymatique

Mesure de l’activité enzymatique

Il est difficile de mesurer la quantité d’enzyme en unités de masse ou de concentration molaire (quantité trop faible et problème de purification); l’activité enzymatique est défini en terme de vitesse de réaction (la V étant directement proportionnelle à la quantité d’enzyme) 2

EXERCICES D’ENZYMOLOGIE

Pour calculer une activité molaire, il faut : 1) Etre en conditions optimales de mesure de la vitesse de réaction, c'est-à-dire, en conditions saturantes de substrat ([S]>>K M) où V=V max 2) Avoir une solution pure d' enzyme Aide 2 : Il faut connaître la Vmax pour calculer l'activité molaire

3 Cinétique enzymatique - ESI

Il est difficile de mesurer la quantité d’enzyme en unités de masse ou de concentration molaire; l’activité enzymatique est défini en terme de vitesse de réaction L’unité international (I U ) est le montant d’enzyme requis pour convertir 1-µmol de substrat en produit dans 1 min à

Les enzymes - Remedeorg

C L’activité spécifi que est exprimée en U/mole d’enzyme D L’activité spécifi que moléculaire augmente avec le degré de pureté d’une préparation d’enzyme E Dans une réaction dont le k catalytique (kcat) est 100 s-1, une mole d’enzyme transforme 100 moles de substrat par seconde 61 On a purifi é une enzyme à partir

TP 8 Détermination de l’activité spécifique d’une enzyme

Une nanokatal mesure l’activité de l’enzyme qui a libérée une nanomole de produit ou qui transforme une nanomole de substrat en une seconde à 30°C dans les conditions optimales d’action L’activité spécifique est rapportée à 1mg d’enzyme mesuré par un dosage de protéine II Le travail de cette séquence de TP

Méthodes de mesure des activités enzymatiques

d’enzyme qui catalyse la transformation d’une micromole de substrat par minute ; 4280_ Page 926 Jeudi, 18 juillet 2013 3:07 15 •le katal (kat) , cohérent, correspond à la quantité d’enzyme qui catalyse la trans-

Les Enzymes

C’est l’activité de l’échantillon divisée par la masse de protéine qui permet cette activité ii Exprimée en U / mg ; cat / mg iii Elle représente un critère de pureté 5 Activité catalytique molaire : ACM i C’est l’activité catalytique de solution divisée par la quantité d’enzymes ii = nombre de moles de substrat

Activité 1 : Mise en évidence de la spécificité de substrat

les scientifiques ont élaboré des modèles moléculaires de l’enzyme seule ou de l’enzyme avec son substrat ce qui a permis de comprendre cette spécificité de substrat On cherche à comprendre, par visualisation de molécules en 3D, pourquoi l’amylase modifiée a une activité très faible Document 1 : Mode d’action des enzymes

[PDF] activité spécifique enzyme formule

[PDF] les enzymes biochimie pdf

[PDF] calcul de l'activité spécifique d'une enzyme

[PDF] production de l'oral 4am page 169

[PDF] j'écris page 184 4am français

[PDF] orientation collège 3ème

[PDF] orientation scolaire 3eme

[PDF] contester l'orientation scolaire

[PDF] qui aide les eleves a choisir leur orientation

[PDF] orientation collège 4ème

[PDF] jumia maroc

[PDF] jumia market maroc

[PDF] site d'achat en ligne au maroc

[PDF] jumia casablanca maarif

[PDF] cosinus angle

enzymatique

DR AKSAS

1

ƒIl

2

Cette mesure consiste à évaluer la

3

L'actiǀitĠ d'une enzyme se mesure

1.d'un

d'apparition d'un

3.d'utilisation d'un

4

Méthodes de mesure

2 Méthode en point final ou " à deux points »

Méthodes cinétiques:

1. 5 Si expérimentales[S]0 et[S]0 la d'enzyme C'est doser d'enzyme 6

Conditions opératoires

et maximale a)0et déterminer contient. b) optimale c) [S]( activateurs 7

Le substrat

Le Pour Pour Il doitMais Un de on exige que S > 10 Km. 8

Température

En , C

SFBC(société

C 9

La durée de la mesure

AE = Vi en [ ] saturante de substrat

10 10

Le Témoin

Dans les méthodes " 2 points »

On Ce que .

Dans les méthodes cinétiques

On 11

Les unités enzymatiques

katalquantité seconde trop-

Launité

internationalequi catalyse minute 60
12

Les unités enzymatiques

Nombre

AEM

Nombre

AS

Elle enzymatique

13

Les unités enzymatiques

ƒLe=

/ Activité enzymatique totale de départ (x

ƒ Le=

spécifique de départ 14 1 manuelle 1. durée, 2.son 3.

Į .15

Méthode en point final ou à " 2 points »

Ladoit

Le lorsque nécessaire

¾soit

¾soit

zone0en

¾soit.

16

Méthode en point final ou à " 2 points »

Faire Ce (Exemple transformer 17

Méthode en point final ou à " 2 points »

Exemple:

LetĮ-;

-30. -Dinitro 18 ALAT

Méthode en point final ou à " 2 points »

C solution 19 2

Consiste de

La spécifiqueUV visible

tempsplus 20

Cinétique enzymatique en Ultra

LeNAD/NADH NADP/NADPH

employé La

UV NAD+/NADHqui

sont Ces Cette 21

Méthodes cinétiques

Dans continu, fixée La réactif) stabilise Elle

Ppermet

22

Cinétique enzymatique en Ultra

NAD considérés(réaction

AH2 + NAD+ A + NADH,H

AH2 + NADP+ A + NADPH,H

[NAD+ ] > 10 NAD 23

Cinétique enzymatique en

NADH NAD+, Si réduction NAD+,la; oxydation deDO. Le

NADPHİ -cm- 24

Cinétique enzymatique en

NADH-cm-

NAD+ 25

AEMesure

de 340nm

AE diminution

de A340nm LDH NADн et NADH2 prĠsentent un pic d'absorbtion ( surtout NAD+) a 260 nm alors on mesure électivement Le NADH2 a 26

A 340 nm ( UV) Si on mesure :

27

Cinétique enzymatique en Ultra Violet

Condition cte

permet Dans tampon à

NADH,H .

Puispyruvate

On La droite 28

Lactate déshydrogénase

(EC 1.1.1.27)

Lactate = substrat

Pyruvate = produit

NAD+/NADH = cofacteur

29

Cinétique enzymatique en

OnDO/min

déclenchée, Les On

T E 3 UI.l-

VTet VE en3

30

Cinétique enzymatique en

DO = İ

DO1 İ 1 1=1 İ

DO2 İ 2 2=2 İ

2-1=DO2 İ DO1 İ

0 31

Cinétique enzymatique en

= x x 6

A 340 nm İNADH,H + = -. cm-.l.

AE en 32
VE VT

Réactions enzymatiques couplées

déshydrogénase à NAD+ ou NADP+ et que ni S et ni P ne possèdent de propriétés spectrales, alors on couple la première R à une deuxième, catalysée par une déshydrogénase dont P est le substrat. S P PH2 33
E1

NADH,H NAD+

quotesdbs_dbs45.pdfusesText_45